宮頸癌患者手術前后血清及病變組織AGR2水平變化及其臨床意義

王鈞 李蔚范

(1.北京市豐臺中西醫結合醫院婦產科，北京 100072；2.北京大學腫瘤醫院婦科，北京 100142)

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，我國72個腫瘤登記地區宮頸癌發病率為12.96/10萬，死亡率為3.28/10萬，宮頸癌發病率和死亡率均隨著年齡的增加而增加[1]。隨著分子生物學的發展，一些與腫瘤預后有關的血清學指標受到越來越多的重視。血清前梯度蛋白2(anterior gradient-2，AGR2)是從乳腺癌細胞系MCF7的cDNA文庫中篩選出非洲爪蟾AGR2的同源基因[2]。AGR2在多種惡性腫瘤中過量表達，與腫瘤的發生、發展密切相關，是一個潛在的早期診斷、療效及預后判斷的標志性基因[3-5]。目前有關AGR2在宮頸癌中的臨床意義尚不清楚，相關的報道極少。本研究通過檢測宮頸癌患者手術前后血清及病變組織AGR2水平變化，分析其與宮頸癌臨床病理特征的關系，為AGR2輔助診斷宮頸癌及療效、預后判斷提供一定的參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取從2014年6月～2016年6月在我院就診并經手術治療、術后病理確診的宮頸癌30例(宮頸癌組)及宮頸上皮內瘤樣病變(CIN)患者(CIN組)20例。納入標準：①首次經病理學確診的原發性宮頸癌。②術前未接受放化療及其他輔助抗腫瘤治療，無其他系統腫瘤病史。③患者均知情同意并自愿參加。年齡51～67歲，平均年齡(52.7±8.3)歲。宮頸瘤組病理類型：鱗癌26例，腺癌4例。腫瘤大小：腫瘤直徑≤4cm 21例，>4cm 9例；FIGO分期：I期19例，II期11例；分化程度：高分化4例，中分化15例，低分化11例；淋巴結轉移：有淋巴結轉移4例，無淋巴結轉移26例。CIN組20例，其中，CIN II級7例，CIN III級13例，年齡43～64歲，平均年齡(50.4±5.8)歲。另外采集20例在我院健康體檢婦女血清標本以及20例因子宮肌瘤行全子宮切除術的正常宮頸組織標本為正常對照組。

1.2 方法

血清及病變組織AGR2水平檢測宮頸癌組及CIN組患者于手術前和手術后1周、健康體檢(對照組)女性于清晨采集空腹靜脈血3mL，3000r/min，離心10min，取上清置于-80℃冰箱保存，集中檢測。術中將切除的新鮮宮頸病變組織生理鹽水沖洗后放入預冷的塑料瓶，投入液氮中保存。從液氮中取出組織標本，用預冷的粉碎器將標本粉碎，用天平稱取100mg標本，放入勻漿緩沖液試管中，制成勻漿，4℃條件下，5000r/min，離心15min，取上清置于-80℃冰箱保存，集中檢測。病變組織前梯度蛋白2(AGR2)和酶聯免疫吸附法(ELISA) 試劑盒購自北京易科攀博生物科技有限公司，采用酶聯免疫吸附法測定AGR2水平，按試劑盒說明書嚴格操作。

2 結果

2.1 手術前后宮頸癌及CIN患者血清及病變組織中AGR2水平的比較 宮頸癌組患者手術前血清及癌組織AGR2水平明顯高于CIN組和正常對照組(均P<0.01)，CIN組患者術前血清AGR2水平略高于正常對照組，無統計學差異(P>0.05)；CIN患者病變組織中AGR2水平略高于正常宮頸組織，無統計學差異(P>0.05)；宮頸癌及CIN患者術后血清AGR2水平較術前明顯降低(均P<0.01)，見圖1、圖2。

圖1 各組血清AGR2水平比較

Figure1ComparisonofserumAGR2levelsinthethreegroups

注：與同組術后比較①P<0.01；與CIN組術后比較②P<0.01;與宮頸癌組術前比較③P<0.01

圖2 各組宮頸組織AGR2水平比較

Figure2ComparisonofAGR2levelsincervicaltissuesinthethreegroups

注：與CIN和正常組宮頸組織AGR2水平比較，①P<0.01

2.2 宮頸癌血清及組織中AGR2水平與臨床病理特征的關系 宮頸癌血清及組織中AGR2水平與腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結轉移有關(P<0.05)，與年齡、病理類型、分化程度無關(P>0.05)，見表1。

2.3 宮頸癌組織與血清AGR2水平之間的關系 相關分析顯示，宮頸癌及CIN患者術前血清AGR2與術后血清AGR2水平呈正相關(r=0.747，P=0.000)，宮頸組織AGR2水平與手術前后血清AGR2水平均呈正相關(r=0.789，P=0.000；r=0.700，P=0.000)，見圖3、4、5。

表1宮頸癌血清及組織中AGR2水平與臨床病理特征的關系

Table1TherelationshipbetweenSerumandtissuelevelsofAGR2incervicalcancerandclinicopathologicalfeatures

項目n血清AGR2(ng/mL)術前術后宮頸組織年齡(歲) ≤501121.27±4.2012.34±2.0342.27±8.75 >501924.51±3.3714.02±2.9345.47±9.59腫瘤大小(cm) ≤42122.15±3.9312.48±2.4742.10±7.89 >4926.06±4.85①15.60±2.31②49.44±10.66①病理類型 鱗癌2623.39±3.9213.42±2.5744.18±8.92 腺癌422.88±8.3013.38±4.5045.10±12.91FIGO分期 Ⅰ期1921.80±3.2612.15±1.5741.16±8.15 Ⅱ期1125.95±5.30①15.59±3.16②49.72±8.88①分化程度 高分化422.38±2.0112.68±1.9240.35±4.89 中分化1522.65±1.3913.30±1.0945.17±5.90 低分化1124.58±1.1313.69±1.2644.55±5.34淋巴結轉移 有418.48±1.2111.30±1.5234.10±3.16 無2624.06±1.54①13.74±1.28①45.87±4.56①

注：與同項目前項比較①P<0.05,②P<0.01

圖3宮頸癌及CIN患者術前血清AGR2水平與術后血清水平相關性分析

Figure3ThecorrelationanalysisbetweenpreoperativeserumAGR2levelsandpostoperativeserumlevelsofAGR2incervicalcancerandCINpatients.

3 討論

研究表明，腫塊直徑、腫瘤分期、HPV檢測、分化程度對宮頸癌的臨床預后影響較大,臨床干預中需要提供相關指標的監測效能，有針對性的早期干預[6]。手術前后檢測相關腫瘤指標水平，可以為宮頸癌早期診斷、療效評價及預后判斷提供了一定的參考價值。宮頸病變及宮頸癌的起源細胞為儲備細胞，儲備細胞增殖、增生、發生癌變而形成癌變上皮[7]。Sato等[8]研究通過人源性多能干細胞(iPSCs)再生子宮頸儲備細胞樣特性的方法，誘導出類似于儲備細胞樣的細胞，發現該細胞存在AGR2表達。已有的研究證實，AGR2在乳腺癌、胃癌、胰腺癌等疾病中呈過量表達，與腫瘤的形成和轉移密切相關[9-11]。AGR2是內質網駐留的蛋白質二硫化物異構酶超家族成員，是脊椎動物中包括胚盤形成和肢體再生的基本生物學特性的主要效應因子。AGR2可干擾并影響疾病進程，包括癌癥進展和耐藥性等[12]。Pohler等[13]研究證實，AGR2通過抑制P53磷酸化及其活性，細胞失去正常調控導致癌變。王巍巍等[14]研究發現，二亞硝基哌嗪(DNP)通過在轉錄水平上調AGR2的表達，參與鼻咽癌細胞的侵襲和轉移。李躍進等[15]研究表明，AGR2在鼻咽癌細胞系5-8F中明顯高表達，干擾AGR2可使癌細胞遷移和侵襲功能明顯減弱，使其體外成瘤能力顯著降低。采用RNAi技術特異地剔除AGR2基因，可明顯減少肺癌細胞轉移[16]。由此可見，AGR2增高具有促進腫瘤細胞增殖、侵襲及轉移等作用。因此，AGR2是一個潛在的腫瘤診斷、療效及預后判斷的生物標志物。目前AGR2在宮頸癌中的表達尚不清楚，相關的文獻報道極少。本研究探討了AGR2在宮頸癌發生發展中的作用，通過ELISA法檢測了宮頸癌及CIN患者血清及病變組織的AGR2水平，結果發現，宮頸癌患者手術前血清及癌組織AGR2水平明顯高于CIN和正常對照組，宮頸癌及CIN患者術后血清AGR2水平較術前明顯降低，相關性分析表明，宮頸癌及CIN組術前與術后血清AGR2水平呈正相關，宮頸組織AGR2水平與手術前后血清AGR2水平均呈正相關，因此，推測術后血清AGR2水平下降可能與體內腫瘤組織切除后AGR2分泌入血減少有關，在一定程度上可作為判斷手術療效的參考指標。

圖4宮頸組織AGR2水平與術前血清AGR2水平的相關性分析

Figure4CorrelativeanalysisbetweenAGR2levelsincervicaltissueandpreoperativeserumAGR2levels.

圖5宮頸組織AGR2水平與術后血清AGR2水平的相關性分析

Figure5CorrelativeanalysisbetweenAGR2levelsincervicaltissueandpostoperativeserumAGR2levels.

本研究分析了血清及宮頸癌組織中AGR2水平與臨床病理特征的關系，結果顯示，宮頸癌血清及組織中AGR2水平與腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結轉移有關，與年齡、病理類型、分化程度無關。表明，AGR2與惡性腫瘤的侵襲轉移有著密切的關系。Zhang等[17]研究發現，AGR2與胃癌腫瘤大小、侵襲深度、TNM分期顯著相關。白小英等[18]研究發現，卵巢上皮性癌及卵巢交界性腫瘤血清AGR2水平、AGR2蛋白陽性表達均明顯高于卵巢良性腫瘤及健康體檢者，卵巢上皮性癌血清AGR2水平及癌組織中AGR2的陽性表達率均與臨床分期及淋巴結轉移相關。劉麗娜等[19]研究發現，結直腸癌組織中AGR2陽性表達率較癌旁正常組織顯著性增高，AGR2的陽性表達率與腫瘤分化程度與淋巴結轉移呈顯著相關，AGR2在結直腸癌的發生、發展過程中發揮了重要作用。Lacambra等[20]研究發現，AGR2表達的預后影響可能與雌激素受體陽性乳腺癌的治療結果和/或其轉移促進作用有關。它可能是臨床實踐中潛在可利用的重要腫瘤生物標志物和陰性預后因素。以上研究表明，AGR2水平參與了不同腫瘤的侵襲、轉移。

4 結論

本文資料顯示，宮頸癌患者血清AGR2增高與腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結轉移相關，并參與了宮頸癌發生、侵襲及轉移過程，也為手術療效的判斷和腫瘤治療提供了新的靶點。但尚需大樣本多指標綜合研究，以闡明AGR2與宮頸癌預后的關系。

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