注射用硫酸奈替米星中11種膠塞添加劑的遷移研究

劉艷 金華 金鵬 陳廣云 李佳

[摘要] 目的 建立同時測定11種膠塞添加劑含量的HPLC法，研究膠塞添加劑向注射用硫酸奈替米星中的遷移情況。方法 采用Agilent Poroshell 120 EC-C18色譜柱（4.6×50 mm，2.7 μm）；流動相為3相混合體系，A相為水-乙酸（1 000：1），B相為乙腈，C相為異丙醇，梯度洗脫；檢測波長為280 nm。結果 11種添加劑均在范圍內線性關系良好，相關系數均大于0.999，回收率在96.7%～111.6%之間。結論 該方法具有良好的專屬性、檢測靈敏度、精密度、線性和準確度，可用于注射用硫酸奈替米星膠塞中添加劑遷移的檢測。

[關鍵詞] 藥用膠塞；添加劑；高效液相色譜；注射用硫酸奈替米星

[中圖分類號] R927 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2018）12（b）-0170-03

藥用膠塞是與藥品直接接觸的藥包材，生產過程中添加了許多化學添加劑，不可避免的會在膠塞本體內殘存一些未被化學鍵合的反應剩余物、不參與反應的物質、熱分解的產物以及硫化生成物，這些物質與藥物之間是否有遷移、吸附甚至發生化學反應[1-2]，為了確保藥物的安全、有效，因此評價相關添加劑是否向藥物中遷移很有必要。本文研究并建立了同時測定11種添加劑含量的HPLC法[3-6]，并檢測了不同廠家6批注射用硫酸奈替米星中膠塞添加劑的遷移情況。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

DIONEX UltiMate3000 UHPLC 高效液相色譜儀（Thermo公司）；XS205電子天平（Mettler公司）。

1.2 試藥

添加劑對照名稱廠家含量及批號：抗氧劑1310（Aladdin，98%，D1625133）、對特辛基苯酚（Aladdin，97%，H1511073）、2，4-二特丁基苯酚（J&K、99.5%、LM40Q78）、抗氧劑245（AccuStandard，100%，5787-01）、BHT（Alfa Aesar，99%，5013F26P）、升華硫（天津科密歐化學試劑，99.5%，20140614）、抗氧劑3114（Aladdin，98%，H1201021）、抗氧劑1010（Aladdin，95.0%，H1506031）、抗氧劑330（Aladdin，99%，J1512033）、抗氧劑1076（Aladdin，98%，D1514012）、抗氧劑168（TCI，98.0%，OPKYD-PP）、溴酚（CNW，98.0%，M125G005）。6批注射用硫酸奈替米星分別為A公司（批號1503011）、B公司（批號150806-4）、C公司（批號B150502）、D公司（批號B15082901）、E公司（批號1510015、1601001）。乙腈、異丙醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18（4.6×50 mm，2.7 μm）；檢測波長：280 nm；進樣量：5 μL；柱溫：40℃；流速為2.0 mL/min；流動相：3相混合體系，A相為水-乙酸（1 000：1），B相為乙腈，C相為異丙醇，梯度洗脫[7]，具體程序見表1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內標溶液的制備 取溴酚適量，少量二氯甲烷溶解，用丙酮稀釋至濃度為1 100 μg/mL的內標工作溶液。

2.2.2 混合對照溶液的制備 分別取11種添加劑適量，少量二氯甲烷溶解后，用甲醇稀釋至含內標溶液的系列濃度對照液。

2.2.3 樣品溶液的制備 取注射用硫酸奈替米星樣品一瓶，加5 mL水溶解，轉移至具塞試管中，再加水5 mL至樣品瓶中，振蕩洗滌，合并水至具塞試管中，作為樣品溶液，取樣品溶液，加入適量內標工作溶液，加入二氯甲烷2 mL，激烈振搖90 s，靜置分層，取下層溶液1 mL，加甲醇4 mL，搖勻，得到樣品測試溶液，平行制備2份。

2.2.4 空白溶液的制備 除不加樣品外，同“樣品溶液的制備”方法配制。

2.3 系統適用性試驗

取混合對照溶液及空白溶液進樣，根據各待測物的保留時間加以鑒別，對各待測物的定量采用內標校正法，通過比較待測物的分析響應值與內標的分析響應值來進行。結果表明，空白溶液無干擾，各對照溶液理論板數均大于4000，相鄰峰之間的分離度均大于1.5（見圖1）。

2.4 線性關系考察

以各待測物的濃度為Y軸，以各待測物峰面積（Ar）/內標峰面積（As）×內標濃度（Cs）的計算值平均值為X軸，建立線性回歸方程。線性范圍和方程及相關系數為：抗氧劑1310（0.7～70.5 μg/mL，C=6.693 2×Ar/As×Cs-0.527 9，r=0.999 8）、對特辛基苯酚（0.5～48.4 μg/mL，C=4.795 2×Ar/As×Cs-0.176 0，r=1）、2，4-二特丁基苯酚（0.4～39.9 μg/mL，C=3.530 2×Ar/As×Cs-0.157 9，r=0.999 9）、抗氧劑245（0.4～42.2 μg/mL，C=3.199 5× Ar/As×Cs+0.047 3，r=1）、抗氧劑BHT（0.6～56.8 μg/mL，C=4.274 5×Ar/As×Cs-0.131 9，r=0.999 9）、硫（0.3～27.6 μg/mL，C=3.829 6×Ar/As×Cs-0.054 6，r=1）、抗氧劑3114（0.9～87.3 μg/mL，C=7.818 3×Ar/As×Cs -0.207 1，r=1）、抗氧劑1010（0.8～82.4 μg/mL，C=6.562 1×Ar/As×Cs-0.387 7，r=0.999 9）、抗氧劑330（0.6～56.0 μg/mL，C=4.314 3×Ar/As×Cs-0.126 4，r=1）、抗氧劑1076（1.4～142.0 μg/mL，C=4.314 3×Ar/As×Cs-0.126 4，r=1）、抗氧劑1076（1.4～142.0 μg/mL，C=11.324×Ar/As×Cs -0.492 4，r=1）、抗氧劑168（1.2～121 μg/mL，C=11.027× Ar/As×Cs-0.057 2，r=1）。結果表明，各對照溶液在濃度范圍內，線性良好，能夠滿足測試要求。

2.5 穩定性

取混合對照溶液分別在0、24、48 h各進樣2次，記錄各待測物和內標色譜峰面積，計算各待測物與內標的峰面積比值，并分別計算相對標準偏差。11種添加劑RSD%結果分別為1.1%、2.4%、1.2%、1.7%、2.8%、3.0%、2.2%、1.6%、2.9%、2.0%、1.7%，表明48 h內各對照溶液穩定性良好。

2.6 檢測限和定量限

分別取檢測限和定量限溶液，每份溶液各進樣2次，記錄待測物的信噪比。檢測限和定量限（μg/瓶）結果為：抗氧劑1310（2.1/7.1）、對特辛基苯酚（1.5/4.8）、2，4-二特丁基苯酚（1.2/4.0）、抗氧劑245（1.3/4.2）、抗氧劑BHT（1.7/5.7）、硫（0.8/2.8）、抗氧劑3114（2.6/8.7）、抗氧劑1010（2.5/8.2）、抗氧劑330（1.7/5.6）、抗氧劑1076（4.3/14.2）、抗氧劑168（3.6/12.1）。結果表明，該測試方法具有較高靈敏度，能夠滿足測試要求。

2.7 回收率和精密度

在樣品中分別加入各添加劑對照品，同“樣品溶液的制備”方法制備回收率測試溶液，各分別取3份低、中、高濃度回收率測試溶液，記錄待測物和內標色譜峰面積，并計算回收率和相對標準偏差。結果顯示平均回收率在96.7%～111.6%，RSD%在1%～6%，表明各待測物的低、中、高濃度加標回收率和測試精密度均能夠滿足測試要求。

2.8 樣品測定結果

取6批注射用硫酸奈替米星，依法制備并測定，結果顯示，6批樣品溶液中均未檢出抗氧劑1310、對特辛基苯酚、2，6二叔丁基對甲基苯酚、抗氧劑245、抗氧劑BHT、硫、抗氧劑3114、抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076和抗氧劑168。

3 討論

有報道顯示，膠塞添加劑本身也有可能發生降解，《化學藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術指導原則（試行）》指出，對于注射劑這類給藥后直接接觸人體組織或血液系統的高風險制劑須進行藥品與包裝材料的相容性研究，因此有必要關注這類物質向輸液遷移的情況[8]。本文建立了HPLC法同時測定膠塞中常用抗氧劑和硫化劑等11種添加劑的含量測定方法，方法學驗證良好，為進一步開展藥品包材與藥物之間相容性研究奠定基礎，對不同廠家6批注射用硫酸奈替米星膠塞中添加劑的遷移情況進行了檢測，試驗結果表明，樣品膠塞中添加劑的遷移情況均為未檢出。

[參考文獻]

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[3] 張芳芳，蔡榮，周亞菊.三層共擠輸液用袋中抗氧劑1010的降解產物抗氧劑1310在3種pH介質中的提取研究[J].藥物分析雜志，2016，36（5）：933-937.

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[6] 李曉光等.HPLC法同時測定五層共擠膜中4種抗氧劑的含量[J].中國食品添加劑，2015（1）：171-175.

[7] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典四部[S].中國科技醫藥出版社，2015：374-377.

[8] 國家食品藥品監督管理局.化學藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術指導原則（試行）[EB/OL].2012[2015-03-12].http：//www.sda.gov.cn/WS01/CL0844/75197.html.

（收稿日期：2018-00-00）