桂枝甘草湯對運動性貧血大鼠血漿總超氧化物歧化酶和血清鐵的影響

傅夢薇，韓宜臻，彭 煜，張樂怡 ，趙宇晗，胡秀華

（1.北京中醫藥大學第一臨床醫學院，北京 100029；2.北京中醫藥大學生命科學學院，北京 100029）

運動性貧血是由于運動引起的紅細胞計數和血紅蛋白濃度下降的一種血液疾病[1]。近年來全球運動性貧血檢出率平均為10%～20%，女運動員檢出率更高[2]。中醫認為，運動性貧血可歸為“心陽虛”“血虛”“萎黃”等范疇，治療本病的方劑中以補氣和滋陰養血藥物出現頻次最高。桂枝甘草湯首次出現在《傷寒論》第64條“發汗過多，其人叉手自冒心，心下悸，欲得按者，桂枝甘草湯主之”。現代藥理研究[3]發現，桂枝甘草湯有抗血栓、抗心肌缺血、抗心律失常、抗突變等作用，提示桂枝甘草湯可能與機體抗氧化酶活性有關。因此，本實驗采用動物造模、灌胃給藥以及SOD酶活性和血清鐵離子檢測等，探討桂枝甘草湯改善大鼠運動性貧血的情況，及其對運動性貧血大鼠血漿總超氧化物歧化酶（SOD）活性和血清鐵濃度的影響，為桂枝甘草湯臨床治療運動性貧血的應用提供實驗依據。

1 材料

1.1 動物 SPF級SD雄性大鼠30只，體質量200 g，3～4周齡，由北京斯貝?？萍加邢薰咎峁?，合格批號：SCXK（京）2016-0002。

1.2 藥物配劑 桂枝甘草湯組成：桂枝12 g，炙甘草6 g。原藥材由同仁堂藥房提供，均符合2015年版《中華人民共和國藥典》藥材標準。稱取桂枝12 g，炙甘草6 g進行水煎，煎煮至0.018 g/mL，分成3等份，1份備用，取其中2份濃縮至0.036 g/mL，分裝后與生理鹽水一同置于冰箱4 ℃中保存備用。

1.3 試劑與儀器 乙酰苯肼（Aladdin）、總超氧化物歧化酶檢測試劑盒（上海源葉生物科技有限公司），血清鐵檢測試劑盒（上海源葉生物科技有限公司），生理鹽水、一次性20 μL采血管、12號灌胃針、10 mL肝素鈉抗凝管（北京歐北生物科技），全自動血細胞分析儀（MEK-6400），Thermo 酶標儀（Bio-Tek美國），TDL-80-2B低速臺式離心機（飛鴿牌）。

2 方法

2.1 分組 取25只SPF級SD雄性大鼠，適應性喂養1 周后隨機分為空白對照組（Control組）、乙酰苯肼組（APH組）、運動性貧血組（APH+S組）、桂枝甘草湯1和2組（APH+S+GGD 1和2組），每組5只。觀察大鼠健康狀態，稱量體質量。

2.2 模型制備及給藥 除Control組注射生理鹽水外，按照100 mg/kg對其余組大鼠進行腹腔注射2%乙酰苯肼。然后將APH+S、APH+S+GGD 1組及APH+S+GGD 2組大鼠均進行2周30 min力竭游泳運動（若不能游完30 min，則將大鼠沉入水底10 s后視為力竭，可撈出）[4-5]。用12號大鼠灌胃器對運動性貧血組（APH+S）每日灌胃生理鹽水，對APH+S+GGD 1組及2組大鼠每日分別灌胃0.018、0.036 g/mL濃度的桂枝甘草湯藥液。藥液濃度計算方法：按人體每50 kg體質量每日需要18 g桂枝甘草（12 g桂枝與6 g炙甘草）計算，即0.36 g/kg按質量等比換算后，200 g大鼠每日需用0.072 g桂枝甘草，該體質量大鼠胃容量為5 mL，故綜合考慮以3 mL的藥液灌胃為宜，藥液濃度應為0.018 g/mL，加倍濃度則為0.036 g/mL。

2.3 檢測指標 1）大鼠紅細胞參數：將眼后靜脈叢采血法取到的大鼠靜脈血送檢，采用全自動血液分析儀測定血液中紅細胞等相關參數。2）總超氧化物歧化酶活性：按總SOD檢測試劑盒（NBT核黃素比色法，R21667，上海源葉生物科技有限公司）說明書進行。3）血清鐵：參考鐵檢測試劑盒（亞鐵嗪微板法，R21668，上海源葉生物科技有限公司）說明書進行。

2.4 統計學方法 所有統計分析均通過SPSS 11.5 統計軟件完成。正態分布的資料應用t檢驗和χ2分析比較差異。數據均值以均數±標準差（）表示。P＜0.05為差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 對運動性貧血大鼠一般體征的影響 與空白對照組大鼠相比，APH、APH+S組大鼠表現出倦怠、倦臥少動、拱背、瞼結膜蒼白、唇色淡白、體質量略減輕、食欲下降，而APH+S+GGD 1組和APH+S+GGD 2組大鼠上述癥狀都有顯著改善，較APH、APH+S組大鼠好動、拱背減輕，每日需要更多維持飼料。

3.2 對運動性貧血大鼠的主要紅細胞參數的影響 見表1。

表1 對運動性貧血大鼠主要紅細胞參數的影響（ ，n = 5）

表1 對運動性貧血大鼠主要紅細胞參數的影響（ ，n = 5）

注：與Control組比較，# P＜0.05；與APH組比較，△P＜0.05； 與APH+S 組比較，▲P＜0.05

組 別 RBC/（個/L） Hb/（g/L） MCV/fl MCH/pg MCHC/（g/L）Control組 7.82±0.56 174.00±7.13 62.20±3.11 359.00±4.69 22.32±1.06 APH 組 6.46±0.13# 161.00±1.00# 69.95±1.25# 356.50±1.50# 24.95±0.35#APH+S組 6.79±0.06#△ 170.00±3.74#△ 70.14±2.81# 357.40±6.77# 25.04±0.69#APH+S+GGD 1 組 6.88±0.40# 168.80±8.89# 68.76±1.37# 357.40±3.88# 24.56±0.33#APH+S+GGD 2組 7.21±0.19△▲ 169.20±6.68# 66.66±1.95# 352.00±4.43△▲ 23.46±0.75#▲

3.3 對運動性貧血大鼠血漿總SOD活性和血清鐵濃度的影響 見表2。

表2 對運動性貧血大鼠血漿總SOD活性和血清鐵濃度的影響（ ，n = 5）

表2 對運動性貧血大鼠血漿總SOD活性和血清鐵濃度的影響（ ，n = 5）

注：與Control組比較，# P＜0.05；與APH組比較，△P＜0.05； 與APH+S 組比較，▲P＜0.05

組 別總SOD活性/（U/L）血清鐵濃度/ （μmol/L）Control組 11.179 7±3.241 1 20.986 3±3.674 2 APH 組 6.294 7±4.682 1# 29.276 0±7.307 7 APH+S組 3.208 9±1.796 4# 38.966 6±9.538 9#APH+S+GGD 1組 12.462 7±4.555 6△▲ 18.175 8±4.193 2△▲APH+S+GGD 2組 9.947 9±4.651 4▲ 19.436 2±4.202 0▲

4 討論

對于運動性貧血[6-7]，須要遵循溫通心陽的治則，桂枝甘草湯方中桂枝作為君藥，可充分發揮其溫通心陽的作用。炙甘草補益心陽，益氣生血[8]，兩藥合用，共奏溫通心陽、益氣生血之功。本實驗結果顯示，從主要紅細胞參數來看，APH+S+GGD 1組和APH+S+GGD 2組紅細胞、血紅蛋白較APH、APH+S組均明顯提高，說明桂枝甘草湯可以明顯改善運動性貧血所致的紅細胞減少，起到抗運動性貧血的作用。血漿總SOD是臨床上觀察生物體內清除氧自由基的首要物質，研究發現能損傷所有的生物化學復合物，與貧血時紅細胞破壞有關，血漿SOD的功能在于歧化O2-為H2O2，H2O2在過氧化氫酶的作用下分解為H2O和O2，起保護紅細胞作用[9]。早期貧血時機體為抵抗貧血，血漿總SOD活性會代償性增高。實驗結果顯示，APH+S+GGD 1組和APH+S+GGD 2組大鼠與APH和APH+S組相比，血漿總SOD活性明顯降低，說明桂枝甘草湯具有緩解血漿總SOD代償性增高的作用，間接反映出其具有與SOD類似的對紅細胞的抗氧化保護作用。血清鐵主要與運鐵蛋白結合成血紅素鐵，參與血紅蛋白的攜氧功能。運動性貧血時血紅蛋白破壞過多，血清鐵濃度升高，攜氧功能下降。實驗結果顯示，與APH+S組大鼠血清鐵濃度比較，APH+S+GGD 1組和APH+S+GGD 2組血清鐵濃度回升，甚至超過空白對照組，說明桂枝甘草湯可減少血中游離鐵，增加含鐵血紅素，進一步增強血紅蛋白攜氧的能力[10-11]。

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