解郁開心丹對抑郁模型大鼠海馬及韁核中BDNF表達(dá)的影響

周慶瑩，劉宏巖

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117）

抑郁癥這一重大心理生理精神疾病正在嚴(yán)重危害著人類的社會職業(yè)功能、身體健康和生活質(zhì)量。但是對于抑郁癥的發(fā)病機制和治療方法到目前為止仍然沒有明確的解說和很好的治療方法。西醫(yī)對于抑郁癥的治療，許多藥物都只是針對抑郁癥患者單個或者部分機制的異常進行干預(yù)以達(dá)到治療的目的，但治療效果并不理想同時還帶來許多治療后的不良反應(yīng)。中醫(yī)藥治療抑郁癥具有一定優(yōu)勢[1]，近年來，中醫(yī)藥治療抑郁癥的療效與機制研究取得了可喜的成就。關(guān)于解郁開心丹治療抑郁癥的現(xiàn)代機制的研究，其實驗結(jié)果顯示，與抑郁癥的多種現(xiàn)代發(fā)病機制關(guān)系密切，其中對抑郁癥大鼠海馬及韁核中BDNF水平表達(dá)的影響與神經(jīng)元損傷假說有關(guān)[2]。

腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）屬于NTF的一種。研究[3]表明，抑郁癥會導(dǎo)致NTF的表達(dá)減少。NTF即神經(jīng)營養(yǎng)因子可影響神經(jīng)元的存活、分化和修復(fù)[4]。由于BDNF 在長時程增強（LTP） 中發(fā)揮重要的特性，故提示其細(xì)胞因子是神經(jīng)元再生的關(guān)鍵因素[5]。海馬是情緒整合和高級精神活動中樞[6]，是成年人神經(jīng)發(fā)生的主要結(jié)構(gòu)，其中海馬齒狀回的亞顆粒狀區(qū)是新神經(jīng)元生成的2個主要區(qū)域之一[7-8]。韁核為邊緣前腦和腦干的重要樞紐之一[9]。實驗證明，韁核和海馬中BDNF表達(dá)水平在抑郁癥大鼠中是降低的[10]。應(yīng)激會對腦海馬結(jié)構(gòu)，成熟神經(jīng)元有一定影響[11]。本文通過慢性應(yīng)激方法造模，進一步研究解郁開心丹對抑郁癥大鼠模型海馬及韁核中BDNF表達(dá)水平的影響，進而探索解郁開心丹的抗抑郁機制。

1 材料與方法

1.1 材料 動物：SD大鼠60只，體質(zhì)量（200±20） g，合格證號：SCXK（吉-2011-0004）。藥品及試劑：中藥解郁開心丹：柴胡、郁金、黃芩等。制成水煎劑濃縮至實驗濃度。鹽酸氟西汀20 mg，蘇州中化藥品有限公司，H20064844。抗BDNF免疫試劑盒，DAB顯色試劑盒（北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司）。儀器：冷凍離心機（sigma Corp3k15）；電子顯微鏡（萊卡）；寶特ELX-808，酶標(biāo)儀；TKY-LA，冷凍切片機；GHP-9270，隔水式培養(yǎng)箱；BS-1100，型分析天平。

1.2 方法

1.2.1 分組 SD大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。使用Open-Field方法：淘汰得分≤20分、得分≥130分的大鼠，將得分在20～130分大鼠，隨機分為正常組、模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組，每組10只。

1.2.2 海馬及韁核中BDNF表達(dá)的測定 將抑郁癥模型大鼠的腦組織，置于新配制4%多聚甲醛液中，固定1 h，修塊， 80%、90%、95%、100%乙醇梯度，脫水，二甲苯透明，石蠟包埋；切片，常規(guī)脫臘至水，3%H2O2孵育5 min，目的消除內(nèi)源性過氧化氫酶活性；將切片進行預(yù)處理：用0.01 mol/L枸櫞酸緩沖液（pH 6.0），微波修復(fù)，DH2O沖洗，將一抗孵育，4 ℃過夜。PBS沖洗，3次/2 min，滴加二抗進行孵育，室溫20 min，PBS沖洗，3次/2 min，應(yīng)用DAB顯色，光鏡下觀察，DH2O沖洗阻斷顯色反應(yīng)，蘇木素復(fù)染2 min。逐級乙醇脫水（80%～100% 2 min/次），二甲苯透明，中性樹脂封片。實驗結(jié)果，使用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)分析，利用顯微攝影系統(tǒng)分別在200、400倍鏡下分別取5個視野，計算陽性細(xì)胞灰度值，再求平均值，進行統(tǒng)計。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件，使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組均數(shù)之間比較，使用單因素方差分析，每2組均數(shù)之間比較，使用t檢驗。P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 6組大鼠海馬中BDNF表達(dá)水平比較 見表1。

表1 6組大鼠海馬中BDNF表達(dá)水平比較（ ，n = 10）

表1 6組大鼠海馬中BDNF表達(dá)水平比較（ ，n = 10）

注：與空白組比較，# P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

組 別 海馬中BDNF空白組 125.050 0±7.148 61模型組 146.750 0±7.224 77#西藥組 141.900 0±4.315 21 △中藥高劑量組 140.250 0±7.992 60 △中藥中劑量組 156.900 0±6.676 55 △中藥低劑量組 141.633 3±5.674 50

2.2 6組大鼠韁核中BDNF表達(dá)水平比較 見表2。

表2 6組大鼠韁核中BDNF表達(dá)水平比較（ ，n = 10）

表2 6組大鼠韁核中BDNF表達(dá)水平比較（ ，n = 10）

注：與空白組比較，# P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

組 別 韁核中BDNF空白組 72.900 0±11.665 96模型組 111.950 0±6.621 14 #西藥組 141.900 0±4.315 21 △中藥高劑量組 42.700 0±5.831 85 △中藥中劑量組 45.900 0±8.213 60 △中藥低劑量組 62.850 0±6.072 15

3 討論

研究[12]表明，慢性應(yīng)激刺激可以降低海馬中BDNF的水平。長期抗抑郁治療可以使BDNF的表達(dá)水平升高[13]。實驗結(jié)果證明，解郁開心丹對抑郁癥大鼠海馬及韁核中BDNF的表達(dá)水平的調(diào)節(jié)作用與西藥氟西汀相同。由此推斷解郁開心丹的抗抑郁作用機制可能與調(diào)節(jié)海馬及韁核中BDNF水平的表達(dá)有關(guān)，與之前報道吻合[14-15]。可以得出解郁開心丹的抗抑郁機制不是針對抑郁癥患者某個異常的機制進行干預(yù)與治療，而很可能是通過多種機制，作用于多系統(tǒng)，而達(dá)到抗抑郁的作用。即中醫(yī)整體觀的思想，中醫(yī)認(rèn)為，人體是一個整體，上下內(nèi)外表里均是相互聯(lián)系與溝通的。氣血陰陽上下交通，出入于表里內(nèi)外，無時無刻都在運動和氣化過程中，其中一部分機制發(fā)生異常勢必會影響其他機制的正常交通與運化。這也與抑郁癥的發(fā)病機制是由多種機制異常綜合作用所致的結(jié)論不謀而合。所以治療抑郁癥的切入點不應(yīng)該是對人體某個異常機制的改善，而是從整體出發(fā)，綜合調(diào)治才能達(dá)到理想的治療效果。中醫(yī)藥治療抑郁癥的方法很多，但通過多年的研究結(jié)果表明，以中藥復(fù)方治療抑郁癥的療效最為突出，本實驗也印證了這一點。

解郁開心丹是在“填精益氣養(yǎng)血法”的指導(dǎo)下擬定，由十幾味中藥配伍而成。具有滋養(yǎng)五臟陰陽之虛、顧護五臟之神，填精益氣養(yǎng)血之功效。抑郁癥屬于中醫(yī)的情志疾病，而情志疾病屬于中醫(yī)“神”的病變范疇。中醫(yī)認(rèn)為，廣義的神包括神、魂、魄、意、志等，分別由心、肝、肺、脾、腎所藏，又稱為“五神臟”。人體正常的情志、精神活動，靠五神共同協(xié)作維持，五神的正常活動則靠五臟氣血濡養(yǎng)。若五臟虛損，則難舍五神：心虛神失所養(yǎng)，肝虛無以斂魂，脾虛意則難存，肺虛魄失藏舍，腎虛志氣不藏[16]。同時神志的波動又會引起氣血運化的異常，氣血運化異常亦會影響五臟。如抑郁癥會對人的消化、免疫、神經(jīng)系統(tǒng)等機能產(chǎn)生影響甚至造成損傷[17]。故中醫(yī)認(rèn)為，抑郁癥患者情志異常，日久則影響五臟氣血的運化，相反，五臟氣血運化異常，則神失所養(yǎng)，進一步影響神志的恢復(fù)。此復(fù)方通過多味中藥的配伍應(yīng)用，不單獨針對某個臟腑，而是從整體出發(fā)補充人體之氣血，調(diào)和人體之陰陽，通過調(diào)和人體五臟整體的氣血陰陽進而濡養(yǎng)五神，使身體恢復(fù)常態(tài)進而達(dá)到抗抑郁的作用。筆者認(rèn)為，隨著解郁開心丹對抑郁的緩解和消除，現(xiàn)代研究所發(fā)現(xiàn)的各種抑郁狀態(tài)下異常的系統(tǒng)或指標(biāo)，解郁開心丹都將對其產(chǎn)生積極有效的調(diào)節(jié)作用。

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