新扶正除疫顆粒抗柯薩奇病毒B3作用評價

朱同剛，宮曉燕

（長春中醫藥大學附屬醫院，長春 130021）

新扶正除疫顆粒劑的配方為全國名中醫、國醫大師、白求恩醫學獎章獲得者任繼學教授多年臨床經驗總結而成，用于預防和治療流感60余年，是我院應用多年的名方，在SARS、甲型H1N1流行期間，起到了非常重要的預防和治療作用。柯薩奇病毒是一種常見病毒，可引起多種疾病，其中以病毒性心肌炎最為嚴重。本研究通過觀察新扶正除疫顆粒對柯薩奇病毒B3染毒小鼠心、肺組織中的病毒滴度及組織切片的變化，來觀察本藥的抗柯薩奇病毒B3的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物及病毒 新扶正除疫顆粒由長春中醫藥大學中醫藥與生物工程研究開發中心藥物藥劑實驗室提供。用蒸餾水溶解顆粒，藥物濃度為0.06 g/mL。柯薩奇病毒B3毒株由中國中醫科學院中藥研究所提供。利巴韋林顆粒由四川百利藥業有限責任公司生產，購于藥店。

1.2 動物及分組 3～4 周齡雄性Balb/c小鼠60只，體質量（10±2）g，由吉林大學農學部實驗動物中心提供；隨機分為空白對照組、病毒模型組（A組）、新扶正除疫顆粒低、中、高劑量組（B、C、D組）、陽性藥物對照組（E組），每組10只。

1.3 實驗方法 給除空白對照組以外的每只小鼠腹腔注射50 μL柯薩奇病毒液（10×TCID50），常規飼養，存活72 h以上，且體質量顯著降低，證實病毒感染模型成功建立。模型建立成功后，空白對照組和病毒模型組用生理鹽水0.1 mL灌胃，每24 h灌胃1次，共計7 d；新扶正除疫顆粒低、中、高劑量各組以新扶正除疫顆粒水溶液灌胃，高、中、低劑量組給藥量分別為4.5、9、18 g/（kg·d）；利巴韋林對照組以利巴韋林水溶液0.025 g/（kg·d）灌胃。1次/d，連續灌胃7 d。每天觀察小鼠的發病體征及死亡情況，稱取體質量并記錄，同時計算生存率；各組小鼠于實驗結束后處死。1.4 組織中感染性病毒的分離測定 無菌操作取小鼠心、肺臟器各100 mg，用MEM細胞維持液1 mL充分勻漿。勻漿液用微孔濾膜過濾除菌后，反復凍融3次，3 000 r /min，離心30 min，取上清液，- 20 ℃保存備用。取其0.2 mL接種于已生長成單層Hep-2細胞的96孔板中，37，5% CO2孵育2 h后棄去孔內液體，PBS洗滌3次后，加入MEM細胞維持液，37，5%CO2培養72～120 h。同時，每天觀察細胞生長情況及相應程度，對出現者進行病毒滴度的測定。

1.5 病理學檢查 無菌操作取小鼠心、肺臟器，立即放入10%甲醛溶液中固定。石蠟包埋，連續切片，HE染色后于顯微鏡下觀察各組小鼠臟器組織的病理改變。1.6 統計學方法 組間和組內的差異采用方差分析進行比較，P＜0.05表示具有統計學意義。實驗數據用均數±標準差（）表示，數據檢驗及相關分析用SPSS 13.0統計軟件處理。

2 結果

2.1 6組小鼠死亡情況比較 見表1。

表1 6組小鼠死亡情況比較（n = 10）

2.2 A、B、C、D、E組小鼠心、肺病毒滴度 見表2。

表2 A、B、C、D、E組小鼠心、肺病毒滴度（ ，n = 10）

表2 A、B、C、D、E組小鼠心、肺病毒滴度（ ，n = 10）

注：與A組比較，## P＜0.01

臟器 A組 B組 C組 D組 E組心臟 4.767±0.145 30 4.033±0.088 19 3.033±0.088 19 2.100±0.057 74 ## 1.700±0.057 74##肺臟 4.400±0.057 73 3.667±0.088 19 2.933±0.088 19 1.800 ±0.057 74## 1.067 ±0.088 19##

2.3 小鼠臟器組織病理觀察 病毒模型對照組小鼠心肌間質血管擴張充血，明顯炎細胞浸潤，部分心肌細胞輕度水腫；低劑量組炎細胞浸潤范圍大，少量心肌細胞壞死，其他未見明顯異常；中、高劑量組心肌纖維短柱狀排列整齊，心肌間僅見少量炎細胞，基本正常心肌結構；利巴韋林給藥組：基本正常心肌結構。病毒模型對照組小鼠肺組織切片顯示：肺組織結構不清，破壞嚴重，細支氣管壁血管擴張充血，明顯炎細胞浸潤，管腔內大量炎細胞，肺泡壁血管擴張充血，肺泡腔大量滲出物，炎細胞浸潤，提示肺臟為炎癥性病變；低劑量組肺組織結構不清，呼吸性細支氣管以下肺組織血管擴張充血、炎細胞浸潤，有出血，提示肺臟為炎癥性病變；中劑量組肺泡間隙輕度增寬，有充血，炎細胞浸潤，與模型組比較肺組織結構尚清楚；高劑量組肺泡壁血管擴張，少量炎細胞浸潤，基本正常肺結構，其結果與利巴韋林給藥組相似。

3 討論

柯薩奇病毒屬小RNA病毒科腸道病毒屬，分 A、B 2組，A組（A1～22、 24）， B組（B1～6）[1]。其中，柯薩奇病毒可引起上呼吸道感染、病毒性心肌炎等疾病。引起病毒性心肌炎的感染和非感染原非常多，最常見的感染原是柯薩奇病毒B組[2]。因為其具有高度的親心肌性，尤以2、3、4型更為常見[3]。病毒性心肌炎在兒童及青壯年中發病率較高，多數臨床表現較輕，但也可致急性猝死，最終導致擴張型心肌病和心力衰竭[4]。隨著科技進步，對病毒性心肌炎的發病原因和發病機制認識越來越深刻，但在治療方面進展不明顯，與過去一致，仍以抗病毒、營養心肌、免疫調節等綜合治療為主[5]，尚無特效的治療方法。

新扶正除疫顆粒配方是由任繼學教授集60年臨床經驗提煉出的預防和治療時疫溫病的臨床效驗方（扶正除疫湯）開發研制而成。該方由紅景天、貫眾、大青葉、虎杖4味藥物組成。全方扶正與達邪并舉，清熱與滋補兼施，配伍精當，療效確切。藥理學研究[6-14]證實，高山紅景天多糖對柯薩奇B3、B5病毒增殖有顯著的抑制作用；紅景天多糖對CVB3病毒感染乳鼠心肌細胞具有一定的保護作用，且能抑制 CVB3病毒的繁殖；紅景天甲醇冷浸提取物對手足口病病毒71型、柯薩奇病毒B型（CVB5）、單純皰疹病毒Ⅰ型和呼吸道合胞病毒有明顯的抑制作用。大青葉在柯薩奇病毒（CVB3）心肌炎早期可能通過抑制病毒合成、增強白細胞吞噬等作用，達到治療效果，而有效單體則是通過抑制病毒在Hep-2細胞內的生物合成而達到抗病毒作用，并無直接滅活效果。虎杖提取物對A9及B5型柯薩奇病毒等多種病毒有抑制作用。綿馬貫眾對柯薩奇病毒 A16、B1、B3、B4 均具有較強的抑制作用，表現在對病毒的抑制和直接滅活病毒。實驗研究[15-18]證實，扶正除疫顆粒對柯薩奇、腺病毒等多種病毒所致的細胞病變有一定的減輕作用，扶正除疫顆粒具有抗H1N1流感病毒及抗菌和抗炎作用。

本實驗初步證明了新扶正除疫顆粒對柯薩奇病毒B3感染小鼠死亡率、心肺組織的保護作用，為柯薩奇病毒B3的治療提供了一種新方案，同時也有可能拓寬新扶正除疫顆粒的臨床應用范圍。

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