昆明地區漢族H型高血壓MTHFR基因C677T多態性及其相關危險因素的分析

錢 凈， 施 茜， 翟秀偉， 趙曉麗， 邵劍春，胡大春

（昆明市第一人民醫院檢驗科 昆明醫科大學附屬甘美醫院，云南 昆明 650011）

高血壓已成為一個全球性的公共衛生問題，隨著人們生活方式的變化，高血壓患病率呈持續增加態勢。我國已成為世界上高血壓危害最嚴重的國家之一，高血壓的防治已成為我們要面臨的重大挑戰?！吨袊哐獕悍乐沃改稀罚?010年修訂版 第三版）將血漿同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）≥10 μmol/L納入高血壓的危險分層，將原發性高血壓伴隨高Hcy血癥定義為H型高血壓[1]。越來越多的研究表明，H型高血壓在卒中的發生、發展過程中是一個獨立的危險因素，并且伴隨著Hcy水平的升高，卒中的風險性也隨之相應增加[2-6]。因此，有效控制H型高血壓是十分重要的預防卒中發生的措施。亞甲基四氫葉酸還原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）是Hcy代謝的關鍵酶。因此，探討MTHFR基因多態性及其與H型高血壓的相關性，對闡明Hcy水平的升高機制和預防相關疾病有重要的理論和應用價值。因此，本研究選取昆明地區漢族人群，探討MTHFR基因C677T多態性、血漿Hcy水平變化及其在高血壓發生中的作用，旨在探明昆明地區漢族人群的MTHFRC677T突變特征，為該地區H型高血壓的防治和個體化治療提供基礎信息。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2013年1—11月在昆明市第一人民醫院住院的患者和體檢健康者，且為三代均居住在昆明境內的漢族人群，分為3組：（1）H型高血壓組，共111例，其中男61例、女50例，年齡28～64歲；（2）非H型高血壓組，共112例，其中男70例、女42例，年齡26～64歲；（3）正常對照組，共119名，其中男75名、女44名，年齡28～61歲。各組間性別及年齡差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 入組標準和排除標準

1.2.1 入組標準 沒有任何影響檢測結果的生理指征；未服用藥物或進行飲食治療；發育、精神正常，無心血管、肺、腎和肝、膽、胰等器質性疾病；3個月內無輸血和手術史；1個月內未患任何疾病；婦女不在月經期、妊娠期或哺乳期；無酗酒史。

1.2.2 排除標準 急、慢性感染性疾?。粐乐氐难翰?；肝、腎功能不全；骨髓移植術；風濕性瓣膜性心臟??；嚴重創傷或腫瘤；免疫性疾病及其他影響炎癥指標的疾病。

1.3 H型高血壓的診斷標準

高血壓診斷標準：非同日3次測定收縮壓≥18.7 kPa和/或舒張壓≥12.0 kPa[1]。高Hcy血癥診斷標準：空腹檢測血漿Hcy水平≥10 μmol/L。

1.4 標本采集及檢測

對上述研究人群，在知情同意的情況下，采集3～5 mL清晨空腹外周靜脈血，用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，充分混勻，標本獲取后迅速置-80 ℃冰箱保存備用，同時采集非抗凝血液，2 h內分離血清，用于血漿Hcy水平等相關指標檢測。利用等位基因特異性-聚合酶鏈反應（allele specific-polymerase chain reaction，AS-PCR）檢測研究對象的MTHFR基因C677T多態性。血清Hcy水平采用循環酶法進行檢測。

1.5 統計學方法

采用SPSS 16.0軟件進行統計分析。用直接計數法計算MTHFRC677T等位點基因型和等位基因的人群分布頻率。樣本的代表性用基因型多態性頻率的Hardy-Weinberg平衡χ2檢驗。用Logistic回歸分析評估相關因素與H型高血壓發生的相關性?；蚨鄳B性分布頻率的比較用χ2檢驗。計量資料采用表示，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 研究對象的基本特征

年齡、性別、吸煙狀況在正常對照組、非H型高血壓組和H型高血壓組3個組研究人群間的差異無統計學意義（P＞0.05），其余基本臨床信息在3個組間的差異有統計學意義（P＜0.05）；方差分析顯示，僅Hcy水平在非H型高血壓組和正常對照組之間差異無統計學意義（P＞0.05）；高血壓人群（H型高血壓組和非H型高血壓組）與健康人群的其余高血壓相關信息的差異有統計學意義（P＜0.05）；而在H型高血壓組和非H型高血壓組間差異無統計學 意義（P＞0.05）。見表1。

表1 昆明地區漢族人群H型高血壓組、非H型高血壓組和正常對照組一般資料的比較

2.2 H型高血壓組和非H型高血壓組MTHFR基因C677T等位基因及基因型分布頻率與正常對照組的比較

2.2.1 H型高血壓組和非H型高血壓組MTHFR基因C677T等位基因分布頻率與正常對照組的比較 經過AS-PCR的檢測，111例H型高血壓組MTHFR基因C677T等位基因結果顯示，等位基因C分布頻率為45.5%，等位基因T分布頻率為50.5%；112例非H型高血壓組等位基因C分布頻率為63.4%，等位基因T分布頻率為36.6%；3個組等位基因比較，C和T這2種等位基因總體分布頻率差異有統計學意義（P=0.000）。H型高血壓組與非H型高血壓組和正常對照組等位基因分布頻率差異有統計學意義（P＜0.05）。非H型高血壓組與正常對照組基因型分布頻率差異無統計學意義（P=0.336）。見表2。

表2 H型高血壓組、非H型高血壓組和正常對照組等位基因分布頻率的比較 [例（%）]

2.2.2 H型高血壓組和非H型高血壓組MTHFR基因C677T基因型分布頻率與正常對照組的比較MTHFR基因C677T基因型檢測結果顯示，111例H型高血壓組中野生型27例，頻率為24.3%；雜合子56例，頻率為50.5%；突變純合子28例，頻率為25.2%。112例非H型高血壓組中，野生型51例，頻率為45.5%；雜合子40例，頻率為35.7%；突變純合子21例，頻率為18.8%?；蛐皖l率比較顯示，CC、CT和TT基因型在3個組之間的分布頻率差異有統計學意義（P=0.001），其中H型高血壓組與非H型高血壓組和正常對照組的基因型分布頻率差異有統計學意義（P＜0.05）。非H型高血壓組和正常對照組基因型分布頻率差異無統計學意義（P=0.638）。見表3。

2.3 H型高血壓組相關因素的Logistic回歸分析

對H型高血壓組的年齡、性別、MTHFR基因C677T基因型、高血壓家族史、吸煙狀況、飲酒狀況等與正常對照組進行Logistic回歸分析，將是否患有高血壓（否：1；是：2）作為應變量，將基因型（CC型：1；CT型：2；TT型：3）、性別（男：1；女：2）、年齡（≤29歲：1；30～39歲：2；40～49歲：3；50～59歲：4；≥60歲：5）、高血壓家族史（無：1；有：2）、吸煙狀況（無：1；有：2）、飲酒狀況（無：1；有：2）作為自變量引入模型進行分析，結果顯示年齡、MTHFR基因C677T基因型、高血壓家族史、飲酒是H型高血壓組高血壓發病的危險因素；存在這些因素導致H型高血壓組高血壓發生的危險性分別是正常對照組的1.705、2.701、2.155、1.889倍；性別、吸煙不是H型高血壓組高血壓發病的危險因素。Logistic回歸方程為Y=3.202+0.539X1+1.001X2+0.754X3+0.611X4（自變量X1為年齡，X2為MTHFRC677T基因型，X3為高血壓家族史，X4為飲酒與否）。見表4。

表3 H型高血壓組和非H型高血壓組MTHFR基因型分布頻率與正常對照組的比較 [例（%）]

表4 H型高血壓發生及其相關因素的Logistic回歸分析結果

3 討論

H型高血壓是卒中最重要的危險因素。血清Hcy升高5 μmol/L，卒中風險增加59%；Hcy降低3 μmol/L，可減少卒中風險約24%。有研究發現，高Hcy人群卒中危險增加了87%，其調查結果顯示，我國高血壓人群伴Hcy的比例很高，而卒中發生率還在以每年8.7%的速度增加，預計到2020年我國每年新發現卒中的患者將由現在的200萬例增加至370萬例，H型高血壓的防治是我國要面臨的一項重大挑戰[7]。

MTHFRC677T基因位點突變頻率分布有種族、地域的差異。對于健康人群，TT純合子基因型突變頻率在愛爾蘭人約為6.1%，荷蘭人約為5.2%，法籍加拿大人約為12%，歐洲人約為35%[8]，泰國人約為1.4%[9]。MTHFRC677T的TT基因型在我國北方和南方的比例相差27%左右，而在北方和南方內部各省差異較少（北方相差7%左右、南方相差約2%）；邢繡榮等[10]對北京城區漢族人群研究發現，TT純合子基因型占20.6%。本研究發現昆明地區漢族健康人群TT純合子基因型突變頻率為14.3%，高于荷蘭人和泰國人，但低于北京的研究結果。對于高血壓人群，呼日勒等[11]對蒙古族高血壓人群MTHFR基因C677T點突變的研究顯示，TT基因型頻率為15%，T等位基因的頻率為32%，高原原等[12]對上海市社區高血壓人群的研究發現，MTHFR基因C677T點突變的TT基因型頻率為11.8%，T等位基因的頻率為38.5%。本研究結果發現，昆明地區漢族人群H型高血壓組TT基因型的頻率為25.2%，非H型高血壓組TT基因型的頻率為18.8%。2個組TT基因型的頻率及T等位基因的頻率差異均有統計學意義（P＜0.05），且略高于蒙古族、上海市社區高血壓人群。提示昆明地區漢族人群中健康者或高血壓患者的MTHFR基因C677T位點突變存在地區特征性。

有研究結果證實，基因C677T的多態性與心血管疾病的發生有密切的關系[13]。但MTHFR基因C677T多態性對高血壓影響的研究結果報道并不一致，2005年波蘭TYLICKI等[14]的研究顯示，高血壓患者和健康人的MTHFR基因C677T基因型頻率分布差異無統計學意義（P＞0.05），提示基因多態性與高血壓無關。LWIN等[15]對日本男性的MTHFR基因C677T多態性對高血壓和高尿酸血癥的影響研究也發現類似結果。但GOLLEDGE等[16]對土耳其人的高血壓人群研究顯示，MTHFR基因C677T多態性對高血壓的發生和發展是一個獨立危險因素。駱杰偉等[17]的研究發現，MTHFR基因C677T多態性與高血壓病具有相關性。本研究對高血壓患者進行了H型高血壓和非H型高血壓分層研究，結果顯示H型高血壓組等位基因T的分布頻率、基因突變型（CT、TT）分布頻率均高于非H型高血壓組和正常對照組，提示本組研究人群中，MTHFR基因C677T位點突變在H型高血壓的發生中可能有重要作用。進一步的H型高血壓相關因素的Logistic回歸分析結果顯示，年齡、MTHFR基因C677T位點突變、高血壓家族史、飲酒是昆明地區漢族人群H型高血壓發病的危險因素，其中MTHFR基因C677T位點突變導致H型高血壓發生的危險性是正常對照組的2.701倍，高于其他因素，再次提示MTHFR基因C677T位點突變在H型高血壓的發生機制中可能發揮重要作用。

綜上所述，在昆明地區漢族人群中，MTHFR基因C677T位點突變在H型高血壓的發生機制中有可能具有重要作用。

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