原發(fā)性胃淋巴瘤中APC蛋白的表達(dá)及其意義*

艾曉輝，李小榮，雷慶良，廖國(guó)慶，羅博，劉蔚東，王海，劉安文，付江濤，劉合利

（1.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院 普外科，湖南 長(zhǎng)沙 410013；2.湖南省邵陽市中醫(yī)醫(yī)院 腫瘤普外科，湖南 邵陽 422000；3.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 胃腸外科，湖南 長(zhǎng)沙 410008；4.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 國(guó)家衛(wèi)計(jì)委肝膽腸外科研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410078；5.廣東省深圳市第二人民醫(yī)院 肛腸外科，廣東 深圳 518000）

腺瘤性結(jié)腸息肉病（adenomatous polyposis coli,APC）基因即抑癌基因APC，其與許多腫瘤的形成、生物學(xué)行為相關(guān)[1]。已經(jīng)證實(shí)APC基因不僅與家族性結(jié)腸腺瘤息肉病有關(guān)，而且與許多散發(fā)性大腸癌有關(guān)[2-3]。但是國(guó)內(nèi)對(duì)APC在原發(fā)性胃淋巴瘤（primary gastric lymphoma,PGL）中表達(dá)的研究，尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)APC蛋白在PGL組織中的表達(dá)，初步探討其在PGL發(fā)生、發(fā)展中的作用及意義。

1　資料與方法

1.1　一般資料

選取2006年6月-2011年12月在中南大學(xué)湘雅醫(yī)院、湖南省邵陽市中醫(yī)醫(yī)院行手術(shù)治療，經(jīng)病理組織學(xué)及免疫組織化學(xué)法確診的45例PGL患者作為PGL組。其中，男性32例，女性13例；年齡39～77歲，平均53.7歲；潰瘍型35例，非潰瘍型10例；幽門螺桿菌（helicobacter pylori,Hp）陽性35例，Hp陰性10例；按Ann Arbor改良分期法，ⅠE期24例，ⅡE期21例（見表1）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例。所有患者術(shù)前未接受化放療、免疫治療及其他針對(duì)腫瘤的治療。另取30例所選PGL患者癌旁組織標(biāo)本，經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為正常胃黏膜組織作為對(duì)照組，均為男性，平均年齡55.3歲。兩組患者年齡、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1　Ann Arbor改良分期法

1.2　實(shí)驗(yàn)試劑

兔抗人APC多克隆抗體、免疫組織化學(xué)染色試劑盒（SP29000）、二甲基聯(lián)苯胺顯色試劑盒均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。

1.3　儀器與設(shè)備

JY3002型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），HHS-2電子恒溫不銹鋼水浴鍋（上海南陽儀器有限公司），LEICA DM LB2型雙目顯微鏡（德國(guó)Leica公司），Haier醫(yī)用微波爐（青島Haier集團(tuán)），MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（北京北航軟件開發(fā)公司），S2-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠），Shandon325型石蠟切片機(jī)（英國(guó)Shandon公司），DNP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），Motic B5顯微攝像系統(tǒng)（廈門麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司）。

1.4　方法

所有標(biāo)本用10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片3張，分別用于蘇木精-伊紅染色法染色、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)APC蛋白，以及磷酸鹽緩沖溶液代替一抗作為陰性對(duì)照。采用微波修復(fù)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接法（streptavidin-perosidase,SP）染色技術(shù)測(cè)定APC蛋白在PGL中的表達(dá)，按照免疫組織化學(xué)染色試劑盒說明書進(jìn)行操作（稀釋比例1∶150）。取對(duì)照組正常胃黏膜組織切片作為陽性對(duì)照。

APC的陽性表達(dá)均位于細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞質(zhì)顯示棕黃色或棕褐色顆粒為陽性。對(duì)每張切片陽性細(xì)胞的染色程度進(jìn)行計(jì)分，無著色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。按著色面積進(jìn)行計(jì)分，無著色計(jì)0分，著色面積＜1/3計(jì)1分，1/3～2/3計(jì)2分，＞2/3計(jì)3分。根據(jù)2項(xiàng)得分之和判斷其結(jié)果：0分為陰性，≥3分為陽性，每張切片選擇有代表性的區(qū)域，在400倍視野下進(jìn)行計(jì)數(shù)，共計(jì)5個(gè)視野，取其平均值。

1.5　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以率（%）表標(biāo)，比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1　APC蛋白表達(dá)與PGL臨床病理特征的關(guān)系

45例PGL患者中，APC蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)，陽性表達(dá)率為37.78%（17/45），陰性表達(dá)率為62.22%（28/45）。不同性別、年齡及大體形態(tài)間患者的APC蛋白陽性表達(dá)率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.160、0.012和 0.285，P=0.690、0.912和0.593）。臨床ⅠE期患者APC蛋白陽性表達(dá)率為58.33%（14/24），臨床ⅡE期患者APC蛋白陽性表達(dá)率為14.29%（3/21），經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.244，P=0.002），ⅠE期患者APC蛋白陽性表達(dá)率高于ⅡE期患者。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者APC蛋白陽性表達(dá)率為14.29%（3/21），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者APC蛋白陽性表達(dá)率為58.33%（14/24），經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.244，P=0.002），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者APC蛋白陽性表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。見圖1、2和表2。

2.2　正常胃黏膜與PGL組織中APC蛋白的表達(dá)比較

PGL組織中APC蛋白陽性率為37.78%（17/45），對(duì)照組正常胃黏膜組織中APC蛋白陽性率為90.00%（27/30），經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.244，P=0.000），PGL組織中APC蛋白陽性率低于正常胃黏膜組織。見圖1、2和表3。

圖1　正常胃黏膜中APC蛋白的表達(dá)（SP×400）

圖2　PGL中APC蛋白的表達(dá)（SP×400）

表2　各臨床病理特征患者的APC蛋白陽性表達(dá)率比較

表3　正常胃黏膜與PGL組織中APC蛋白陽性率比較

3　討論

PGL是一種比較少見的胃惡性腫瘤，可發(fā)生于胃的各個(gè)部位，多見于胃體、胃竇部、小彎側(cè)及后壁，多為隆起型或潰瘍型腫塊，部分呈彌漫浸潤(rùn)性生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)選取PGL患者，其中潰瘍型35例（77.78%），非潰瘍型10例（22.22%），APC蛋白陽性率分別為34.29%和50.00%，無明顯差異，表明PGL中APC蛋白表達(dá)與腫塊的大體形態(tài)無明顯關(guān)系。近幾年來，PGL的發(fā)病率呈升高趨勢(shì)，其中非霍奇金淋巴瘤以每年3%的速度增長(zhǎng)，并且發(fā)病年齡以青壯年居多[4]。

APC基因是HERRERA等[5]在1986年發(fā)現(xiàn)的新抑癌基因，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[6]。大量研究證實(shí)，APC基因是唯一在結(jié)腸上皮增殖中發(fā)揮看門作用的基因[7]。遺傳突變APC1個(gè)拷貝的個(gè)體只需1次體細(xì)胞APC突變就可以產(chǎn)生腫瘤。近年來研究表明，在絕大多數(shù)結(jié)直腸癌的發(fā)生中，APC-β-catenin-Tcf/Lef通路改變具有重要意義，APC還參與細(xì)胞遷移、黏附、染色體、紡錘體分離、細(xì)胞凋亡等多種功能[8]。APC是一種抑癌基因，在許多組織中都有表達(dá)。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，大腸癌與大腸腺瘤惡變組織中APC陽性表達(dá)率低于大腸腺瘤和正常大腸黏膜組織，APC失表達(dá)與大腸癌的發(fā)生相關(guān)[9]。也有報(bào)道稱，乳腺癌[10]、膽囊癌[11]、胃癌[12]、肺癌、鼻咽癌及基底細(xì)胞癌等組織中APC蛋白表達(dá)減弱[13-15]。

本研究結(jié)果顯示，PGL組織中APC蛋白陽性表達(dá)率為37.78%，低于癌旁正常胃黏膜組織（90.0%），提示APC蛋白在PGL的發(fā)生中起重要作用。不同性別、年齡患者的APC蛋白表達(dá)無顯著差異，PGL組織中，ⅠE期患者APC蛋白表達(dá)率（58.33%）高于ⅡE期患者（14.29%）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者APC蛋白陽性表達(dá)率（14.29%）低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（58.33%）。本研究結(jié)果表明，PGL組織中APC蛋白表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與性別、年齡及大體形態(tài)無關(guān)，提示APC蛋白的表達(dá)差異不僅是PGL發(fā)生中的一個(gè)早期事件，還是其發(fā)展的一個(gè)重要因素[16]。APC蛋白在PGL中低表達(dá)，提示其可以作為PGL發(fā)生的一個(gè)重要檢測(cè)指標(biāo)。目前國(guó)內(nèi)外尚沒有公認(rèn)的能夠影響胃淋巴瘤預(yù)后的因素[17]。APC蛋白在PGL中的作用值得進(jìn)一步研究，以期掌握PGL患者的臨床病理特征，改善預(yù)后，從而提高PGL的診療水平[18-21]。