MicroRNA-1469低表達與食管鱗狀細胞癌臨床病理特征及預后的關系

李亞俊，顧曉靜，楊樂，邊虹

（寧夏醫科大學總醫院 1.消化內科，2.胸外科，寧夏 銀川 750004）

食管鱗狀細胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）是一種常見的消化道腫瘤，在我國的發病率較高[1]。由于其具有局部侵襲浸潤、早期轉移等特點，往往預后不佳，生存率較低。通過對ESCC生物學標志物及信號通路的研究，可以預測腫瘤的預后，指導治療方案，實現精準治療，從而提高ESCC的生存率。

微小RNA（microRNA）是一類非編碼功能的單鏈RNA，長度約17～25個核苷酸。microRNA參與包括細胞增殖、凋亡、遷移及分化等多種病理生理過程，并且參與腫瘤信號通路，在腫瘤的發生、發展中具有重要作用[2]。MicroRNA-1469（miR-1469）系microRNA家族中的一員，位于15號染色體，相關研究發現[3]，miR-1469在多種腫瘤組織中異常表達，具體表現為在凋亡的腫瘤細胞中，miR-1469的表達水平顯著提高。目前已有文獻報道microRNA在ESCC中的作用[4]，但miR-1469與ESCC的關系尚無相關報道。本研究選擇miR-1469，首先研究其在ESCC中的表達情況，并觀察其在ESCC進展及預后中所起到的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009年6月-2010年6月在寧夏醫科大學總醫院初次診斷為ESCC的患者98例。入選標準為：①均行食管癌根治手術；②術前未行放化療；③未有圍手術期死亡；④臨床病理與隨訪資料完整。所有的腫瘤組織及腫瘤旁正常食管組織于術后儲存于液氮中，病理結果經病理科兩名醫生確認。TNM分期采用UICC/AJCC 2009第7版標準。

所有患者隨訪內容包括體格檢查、上消化道造影、胸腹部CT以及胃鏡等，隨訪間隔時間為3～6個月，隨訪時間至患者死亡或本研究的截止日期（2015年6月）。

1.2 實時熒光定量聚合酶鏈反應

根據說明書使用Trizol裂解液從冷凍組織中提起總RNA，然后通過U-3010紫外分光光度計測定RNA的濃度及純度。然后依據上海生工RNA PCR-Kit試劑說明書進行實時熒光定量聚合酶鏈反應（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）檢測基因表達水平。采用IQ5 software分析實驗結果，計算Ct值。使用內參基因GAPDH的Ct值校正目的基因Ct值，得到△Ct值。比較處理組和對照組的△Ct值得到△△Ct值。基因表達量比值（處理組/對照組）=2-△△Ct。

1.3 統計學方法

數據分析采用SPSS 19.0統計軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗，計數資料以例表示，比較用χ2檢驗，Kaplan-Meier方法繪制生存曲線，Log-rank檢驗生存曲線的統計學差異，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 miR-1469在ESCC中的表達情況

比較miR-1469在ESCC及癌旁正常組織中的表達情況，如果ESCC中的miR-1469的表達量低于癌旁正常組織，系miR-1469的低表達，反之，為miR-1469的高表達。結果顯示（見圖1），miR-1469低表達組共42例，表達量為（2.51±0.73），miR-1469高表達組共56例，表達量為（6.27±1.08），兩組比較差異有統計學意義（t=-19.457，P=0.000）。

圖1 miR-1469在ESCC中的表達

2.2 miR-1469表達與臨床病理特征的關系

miR-1469表達與腫瘤的浸潤深度、淋巴結的轉移及病理分期，差異有統計學意義（χ2=8.704、24.000和53.844，P=0.033、0.000和0.000），而與年齡、性別、腫瘤直徑和分化程度，差異無統計學意義（χ2=0.056、1.224、2.046和5.125，P=0.813、0.269、0.193和0.076）。見附表。

2.3 miR-1469表達與腫瘤復發和轉移的關系

共有65例患者出現腫瘤的復發或轉移，其5年無瘤生存率為32.6%，其中38例為miR-1469低表達，27例為miR-1469高表達，兩組比較差異有統計學意義（χ2=7.040，P=0.008），提示miR-1469低表達組的腫瘤復發或轉移率高于高表達組。低表達miR-1469的患者5年無瘤生存率低于高表達miR-1469的患者（17.9% vs 42.8%，P=0.004）。見圖2。

附表 miR-1469的表達與臨床病理特征的關系 例

圖2 患者5年總無瘤生存率

2.4 miR-1469的表達與淋巴結轉移的關系

分析miR-1469的表達與淋巴結轉移的關系發現，在N0患者中，miR-1469低表達者共9例，在N1～3患者中，miR-1469低表達者共33例，兩者差異有統計學意義（χ2=24.000，P=0.000）。在N1～3的患者中，低表達miR-1469組的5年無瘤生存率低于高表達組（7.3% vs 31.5%，P=0.043）。見圖3。

2.5 miR-1469的表達與預后的關系

在98例患者中，56例在隨訪期間內死亡，5年總生存率為39.5%。低表達miR-1469組的5年總生存率低于高表達組（29.3% vs 47.1%，P=0.027）。見圖4。

圖3 N0及N1～3患者的5年無瘤生存率

圖4 患者5年總生存率

3 討論

作為一種常見的消化道惡性腫瘤，食管癌具有較高的死亡率，多數患者在發現的時候腫瘤就已經侵透食管外膜或已經發生遠處轉移，并且預后不佳[5]。目前國際上通用的分期標準為TNM分期，根據此分期來判斷患者的病程及預后，但是TNM分期能不能準確地判斷病情的轉歸尚存在爭議，越來越多的研究關注于淋巴結轉移的個數[6]。在ESCC患者中，淋巴結轉移者更容易出現腫瘤的復發及轉移，更多的學者認為淋巴結轉移系獨立的預后因素[7]。microRNA富含RNA，其序列大小約為17～25個核苷酸，在調節細胞增殖、凋亡、遷移和分化等生理及病理過程中起到了關鍵的作用[8]，并且參與腫瘤信號通路的過度激活或者過度抑制，在腫瘤的臨床診療中，能夠指導分型及預后[9]。作為microRNA中的一員，miR-1469位于15號染色體，具有致癌基因或抑癌基因的活性[10]，參與了腫瘤的進程中。miR-1469在腫瘤組織中異常表達，具體表現為在凋亡瘤細胞中，miR-1469的表達水平提高。XU等[3]的研究發現，在肺癌中，miR-1469能夠增強VP16所誘導的細胞凋亡，進一步研究發現stat5a系miR-1469作用的靶點，miR-1469通過stat5a調節腫瘤細胞的增生和凋亡。關于stat與食管癌的關系已有大量的文獻闡述，而miR-1469、stat5a及食管癌3者之間的關系尚未有相關研究。因此，本研究選擇miR-1469，首先研究其在ESCC中的表達情況，并觀察其在ESCC進展及預后中所起到的作用。本研究系統分析98例ESCC患者標本中miR-1469的表達以及與臨床病理特征及預后的關系，發現miR-1469的表達水平與浸潤深度、淋巴結轉移及病理分期差異有統計學意義，具體表現為在T1、N0及Ⅰ期患者中，miR-1469多呈現高表達，在中晚期患者中多為低表達，這提示miR-1469的表達水平與ESCC的進程密切相關，miR-1469的表達水平能夠協助判斷腫瘤的分期及淋巴結轉移情況。

miR-1469的表達水平與5年無瘤生存率和總生存率密切相關，低表達miR-1469的ESCC患者，其5年無瘤生存率和總生存率均低于高表達者。進一步地分析發現，在N0患者中，miR-1469表達水平的高低與5年無瘤生存率無相關，但在N1～3患者中，其5年無瘤生存率差異有統計學意義，這提示在淋巴結轉移的患者中，miR-1469低表達者更容易出現腫瘤的復發及轉移。

綜上所述，miR-1469的表達與ESCC的病理分期及預后具有密切的關系，miR-1469低表達患者更容易出現ESCC的復發及轉移，且預后較差，與既往的文獻[3]關于miR-1469對于人類腫瘤的抑制作用的報道具有一致性。但是miR-1469對ESCC的抑制作用需要進一步的體外細胞實驗加以驗證，其作用靶點及信號通路需進一步明確。這將對于實現ESCC的精準治療具有重大的意義。