肺癌液體活檢研究進展

陳萬進　雷冰

【摘要】 肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其具有病理機制復雜、發病率高、早期癥狀無特異性、治療效果差等特征。隨著醫療技術的發展，發現腫瘤標志物有利于協助臨床診斷，其具有無創性、操作簡單、可重復性等優點，故筆者特進行此次綜述，具體內容如下。

【關鍵詞】 肺癌； 液體活檢； 循環腫瘤細胞； 循環腫瘤DNA； 外泌體

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.12.088 文獻標識碼 A 文章編號 1674-6805（2018）12-0182-03

Progress in Liquid Biopsy of Lung Cancer/CHEN Wanjin，LEI Bing//Chinese and Foreign Medical Research，2018，16（12）：182-184

【Abstract】 Lung cancer is one of the most common malignant tumors in China.It has the characteristics of complex pathological mechanism， high incidence，early symptoms，and poor treatment effect.With the development of medical technology，it is found that tumor markers are helpful for clinical diagnosis.They are non-invasive，simple and repeatable.Therefore，the author carried out the research as follows.

【Key words】 Lung cancer； Liquid biopsy； Circulating tumor cells； Circulating tumor DNA； Exocrine body

First-authors address：Red Cross Hospital of Yulin City，Yulin 537000，China

原發性肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，發病率、病死率均較高，據文獻[1]報道，全世界每年大概新發1 800萬例肺癌，且患者的預后較差，患者的5年生存率在15%左右。病理活檢作為目前診斷肺癌的“金標準”，診斷準確性高，但其是一種有創性診斷方法，患者可能會出現氣胸、出血等并發癥，使其臨床發展受到一定程度的限制[2]。癌胚抗原、鱗狀細胞癌抗原等腫瘤標志物在臨床應用廣泛，但其診斷的特異性、敏感度較低。活檢組織標本肺癌病理診斷的作用主要是明確患者是否存在腫瘤、腫瘤的類型[3]。隨著醫療的發展，對于液體活檢的研究深入，發現其是一種無創、可重復、有效的檢查手段，有利于協助早期診斷肺癌[4]。目前臨床液體活檢主要包括循環腫瘤細胞（CTCs）、外泌體、循環腫瘤DNA（ctDNA），具體內容見下文。

1 肺癌的概述

近年來，隨著生活節奏加快，生活習慣不規律，致使罹患肺癌的人數呈直線上升。肺癌具有較高的發病率和死亡率，對人們的身體健康和日常生活造成嚴重威脅。尤其是近50年以來，大多數國家患有肺癌的發病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位。目前肺癌的病因尚未完全查明，大量資料表明，長期大量吸煙患者罹患肺癌的概率較常人要高，是不吸煙者的10～20倍，開始吸煙的年齡越小，患肺癌的概率越高。此外，吸煙不僅對本人的身體健康造成影響，還會對周圍人群的健康產生不良影響，致使被動吸煙者肺癌發病率明顯增加。另外，城市居民肺癌的發病率比農村高，這可能與城市大氣污染和煙塵中含有致癌物質有關。除此之外，所處的職業環境、電離輻射、慢性肺部感染、遺傳等因素都是誘發肺癌的緣由之一。其臨床表現也較為復雜，初期患者并無明顯特征，還要取決于腫瘤病變位置，患者會出現咳嗽、痰中帶血、胸痛、胸悶、聲帶嘶啞等癥狀；并經病情長時間發展累及全身，會伴有發熱、消瘦等癥狀，甚至出現肺源性關節增生癥及異位激素分泌綜合征；待發展到終末期，腫瘤會擴散到淋巴、胸膜、消化道、腎臟等處，嚴重危及患者的生命安全。目前，臨床中針對肺癌患者除基本的體格檢查外，還采用X線、CT檢查、MRI檢測、細胞學檢驗等手段，雖然可為肺癌的診斷和進一步的治療提供依據，但對患者都會造成不同程度的創傷。因此，采用無創、快捷、便宜、有效的檢測手段對肺癌患者進行檢查是非常重要的，不僅可提高疾病診斷效率，而且減少對患者的損傷。隨著醫學技術的不斷發展，肺癌液體活檢逐漸走到相關患者和檢驗醫生的眼中，這種液體活檢的方式通過對肺癌患者液體中腫瘤細胞的檢驗，不僅縮短檢驗時間，為患者治療提供充分時間，而且減少其他檢查對患者的創傷，成為肺癌檢驗中常用的方式之一。

2 循環腫瘤細胞的研究進展

循環腫瘤細胞（CTCs）是原發肺癌細胞脫落進入到血液循環中，作為潛在的生物標志物，其可作為評價療效的指標。有學者研究發現，對于非小細胞癌的患者，在行放射治療前對CTCs的數量進行了檢測，放射治療后CTCs的數目隨著腫瘤的縮小而減少，有明顯的相關性，故可把CTCs當成評價療效的指標[5]。還有學者研究發現，CTCs在肺癌診斷的特異性為84.1%～100%，敏感性為30.4%～89.0%[6]。有學者采取熒光原位雜交技術檢測50例非小細胞癌患者的CTCs，臨界值為3.2 ml/2細胞單位，特異性為97.60%，敏感性為84.0%[7]。文獻[8]報道，采取PCR檢測225例非小細胞癌患者CTCs，將臨界值設置為8.64～8.65單位CTCs，發現其特異性為84.10%和93.20%，敏感性為73.20%和81.80%。CTCs在血液中的含量非常少，在每毫升血液中大約含有100萬血細胞，但其中大約混雜有1個腫瘤細胞[9]。故進行CTCs檢測時需要富集，可采取RT-PCR、干細胞計數、免疫磁珠標志等方法進行富集。CTCs的檢測方法主要有免疫熒光法、細胞計數法、核酸檢測法、CTC-chip法、CellSearch系統法、酶聯免疫斑點法、原位雜交法、測序法等。

3 外泌體的研究進展

外泌體是細胞主動朝細胞外分泌的囊泡樣小體，且大小一致，具有促進血管新生和抗腫瘤免疫等功能[10]。外泌體主要包括miRNA、脂類、mRNA、蛋白質等[11]。外泌體可協助肺癌的臨床診斷、預測預后[12]。來自于腫瘤的外泌體會促進癌細胞的生長繁殖。有學者認為外泌體可以對核酸物質進行有效的保護，可以使ctDNA易降解的問題得到有效解決[13]。外泌體比較容易富集，臨床常用的檢測技術有色譜法、納米微粒追蹤分析術、免疫磁珠法等[14]。

4 循環腫瘤DNA的研究進展

攜帶腫瘤特有突變信息的血漿游離DNA即為循環腫瘤DNA（ctDNA）。其主要存在源于凋亡或是壞死的腫瘤細胞[15]。有學者研究發現，對于ctDNA是EGFR基因突變檢測中十分有效、具有特異性的生物標志物，其對于非小細胞肺癌的診療具有重要價值[16]。在非小細胞肺癌血液ctDNA中，可發現雜合性缺失、基因甲基化、基因突變、微衛星不穩定性等多基因改變[17]。有學者認為ctDNA檢測腫瘤變異的敏感性遠超過CTCs，其可作為有效的手段監測非小細胞型肺癌[18]。ctDNA在肺癌患者體內的含量特別少，大約占血漿游離DNA的1%，其半衰期非常短[19]。故對檢測的靈敏度有較高要求。目前臨床多采取測序、digital PCR法[20]。

5 液體活檢的優勢和局限性

隨著醫療的發展進步，對于腫瘤的診斷，不僅需要結合臨床癥狀、還需要腫瘤位于組織、細胞、分子層面的技術檢測，進行綜合考慮[21]。雖然病理組織活檢診斷價值較高，但是腫瘤的異質性導致其檢查結果不可全面揭示腫瘤基因圖譜，在一定程度上可出現誤診[22]。且對于晚期肺癌患者、不宜手術的患者組織取樣較為困難。液體活檢技術是抽取肺癌患者體內的外周血進行檢測分析，是一種無創性、可重復取樣的檢測手段[23]。且可以有效地反映腫瘤基因圖譜全貌。

但液體活檢也存在一定的局限性。進行CTCs分離必須采取特殊設備，很難鑒定和確認真正的腫瘤細胞，需對測序技術有所依賴[24]。且以上報道中不同的研究方法，特異性和敏感性有所不同，說明PCR檢測、熒光原位雜交技術等檢測方法不同，數據存在一定的誤差。選取的樣本數量、納入的腫瘤分期均可有效檢測差異，故CTCs檢測具有一定的局限性。外泌體檢測亦具有一定的局限性，進行外泌體分離時需要特殊設備，且無法進行細胞層面的深入研究。ctDNA檢測因體內ctDNA含量特別少，且非常容易被正常血漿游離DNA所掩蓋，無法從細胞層面進行深入研究[25]。

綜上所述，腫瘤液體活檢具有無創、操作簡便、可展示腫瘤基因圖譜全貌，但也具有局限性，對測序技術有一定依賴性，故需要進一步在臨床進行探討。

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（收稿日期：2018-03-23）