5種酵母菌的體外抑菌實驗

王旗 王祎丹 耿旭浩

實驗室或臨床實踐研究表明，酵母菌對腸道細菌如大腸桿菌、沙門氏菌等引起的腸道感染、腹瀉等疾病有保護預防性作用。酵母菌代謝后產物對致病菌的拮抗、競爭排斥作用是產生上述功能的主要因素。酵母菌拮抗作用產生的原因是多方面的： （1）酵母菌產酸，如乙酸、丙酸、乳酸等，酸對有害菌起生長抑制作用。（2）酵母菌產抗生素或細菌素類物質，對有害菌有殺菌作用。本試驗從上述觀點出發，用牛津杯法對5株酵母菌在體外的抑制菌能力及抑菌作用物質進行研究，為下一步動物實驗打下基礎。

目前，在動物養殖中抗生素被大量使用，由抗生素殘留引發的食品安全問題日益增多，因此，健康養殖已成為保障動物性食品安全的關鍵。酵母菌是一種常見的適應性很強的兼性厭氧微生物。因其含有豐富的蛋白質、核酸、維生素、微量元素等營養物質，且具有易發酵、增殖成本低等優點，被廣泛應用于食品、化工、藥物、飼料、環境治理和生物工程等行業。本文前期研究發現，5種常見酵母菌具有一定的抑菌性。對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌抑菌效果顯著，為其微生態制劑的開發及應用奠定基礎。

材料與方法

材料與試劑

（1）菌種

試驗菌種：畢赤克魯維酵母BP- 18、膠紅酵母、隱球酵母AP- 20、克魯斯假絲酵母M5-13、葡萄有孢漢遜酵母、枯草芽孢桿菌、沙雷氏菌、巨大芽孢桿菌（本實驗室保存）

指示菌種：大腸桿菌，金黃色葡萄球菌（本實驗保存）

（2）培養基

營養瓊脂培養基 （NA）、LB肉湯培養基 、YPD培養基。

（3）試劑

LB肉湯培養基， 北京路橋技術有限責任公司；YPD培養基，北京路橋技術有限責任公司；蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、氯化鈉、葡萄糖， 北京奧博星生物技術有限公司， 以上試劑均為分析純。

儀器與設備。ZSD- A1160生化培養箱、ZHWY- 2102C恒溫搖床、ZHJ H- C1109B型超凈工作臺， 上海智城分析儀器制造公司； FE20 p H計， 梅特勒-托利多儀器 （上海） 有限公司。

指示平板法

（1）指示平板的制備

試驗菌株酵母菌制備：將5種酵母菌接種于YPD培養基中進行活化及傳代培養，并利用分光亮度計測定吸亮度以測其菌液量，使其菌液量達到106CFU/m L。

（2）指示菌液的制備

將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌 分別接種于LB肉湯中進行活化及傳代培養，并利用分光亮度計測定其吸光值使其菌液量達到106CFU/m L。

牛津杯法測定

結果與分析

酵母菌抑菌結果分析

從表結果可以看出，膠紅酵母、葡萄有孢漢遜酵母對大腸桿菌具有抑菌能力，且葡萄有孢漢遜酵母對大腸桿菌抑菌能力最強，膠紅酵母對大腸桿菌抑菌能力相對較弱，另外三種酵母無明顯抑菌性能；膠紅酵母、葡萄有孢漢遜酵母對金黃色葡萄球菌具有抑菌能力，且葡萄有孢漢遜酵母對金黃色葡萄球菌抑菌能力強于膠紅酵母，克魯斯假絲酵母M5- 13對金黃色葡萄球菌抑菌能力相對較弱，另外兩種酵母無明顯抑菌性能。

本實驗所選取的5種酵母菌通過體外抑菌實驗表明：隱球酵母AP- 20、畢赤克魯維酵母BP- 18對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌無明顯抑制作用，而葡萄有孢漢遜酵母、膠紅酵母、克魯斯假絲酵母M5- 13對大腸桿菌及金黃色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。