單用TCT、HPV-DNA及兩者聯合檢測在宮頸病變診斷中效果對比

李明風

(恩平市婦幼保健院檢驗科，廣東 恩平 529400)

宮頸癌作為一種女性較為常見的生殖道惡性腫瘤之一[1]，具有癌前病變期較長的特點，且可逆轉。宮頸癌的癌前病變表現為宮頸上皮內瘤樣病變(CIN)，對CIN的早期診斷能夠有效預防并降低宮頸癌病發[2]。宮頸細胞學檢測、陰道鏡檢及高危型人乳頭瘤病毒(HPV)-DNA檢測是市場常用的檢測方法。高危型HPV可使細胞惡性增生，與女性腫瘤的形成有關。熒光定量PCR可有效檢測HPV，且特異性強、靈敏度高。目前，我國采用細胞學-陰道鏡檢-組織學檢查進行診斷。本次研究，恩平市婦幼保健院采用聯合檢測的方法，與液基圖片細胞學(TCT)檢測、HPV-NDA檢測作比較，分析診斷結果，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2017年3月在本院接受治療的40例宮頸病變患者作為研究對象。患者年齡20～60歲，平均(39.2±2.8)歲。所有患者均符合以下條件：1)有性生活史；2)無物理治療史；3)未進行過子宮切除手術或宮頸手術；4)未妊娠或產后1個月及以上；5)經TCT檢查后結果異常。

1.2 檢測方法

對所有患者均進行TCT檢測、HPV-DNA檢測及兩者聯合檢測。

1)TCT檢測：檢測前，3 d內不進行陰道沖洗放藥，且24 h內進行性生活，同時要避開月經期。將宮頸內外的脫落細胞采用專用的取材器取置于盛有特殊固定緩沖液的容器中，送入細胞室后，用自動制片機進行處理。振蕩混勻后解聚細胞團，固定液經高精度過濾膜過濾，使宮頸上皮細胞與其他細胞碎片、黏液及血液等雜質分離，得到純凈的宮頸上皮細胞。將得到的宮頸上皮細胞收集到可調控細胞重疊密度的過濾器，轉移至玻片并固定染色。

2)HPV-DNA檢測：將無菌棉拭子擦掉宮頸口表面黏液，插入采樣刷均勻用力旋轉3周停留10 s后取出，將其置于無菌試管中，折斷多余部分保留采樣刷。用PCR結合熒光偏振檢測對標本中的HR-HPV進行檢測。按試劑盒手冊進行操作，將200 μL細胞懸液置于微量離心(EP)管離心13 000 r·min-1(10 min)，棄去離心后的上清液，吸取50 μL細胞處理液于微量離心管中振蕩使其和沉淀充分混合后，將EP管置于100 ℃加熱器中10 min，將加熱后的EP管迅速放入4 ℃冰箱冷卻，然后再次離心13 000 r·min-1(10 min)，吸取2 μL所得上清液與配制的酶、引物及23 μL混合。

3)宮頸搔刮術或陰道鏡下活檢術：由專業醫師操作對所有患者進行陰道鏡檢查，并對病灶進行鏡下活檢，鏡下病灶不明顯在轉化區3、6、9、12 4點取材，頸管病變者進行宮頸管搔刮。將所有標本送至病理科閱片，閱片結果根據宮頸病變及程度分為：無宮頸上皮內瘤變(NILM)、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和浸潤癌。實驗涉及到的儀器及試劑：梯度PCR儀(上海啟步生物科技有限公司，型號：BSW-2T)，HPV分型偏振檢測試劑盒(廣東凱譜生物科技股份有限公司)，HPV-DNA檢測儀(成都愛生科技有限公司)。電子陰道鏡(深圳金科威公司，型號：SLC22000)

1.3 觀察指標

比較三種方法與組織學診斷結果的符合率。比較其相互之間的靈敏度和特異度。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 TCT單獨檢測的組織學診斷結果

TCT檢測后，有25例診斷為ACS-US之上，其中有21例組織學診斷結果為陽性(陽性包括CA、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)。TCT檢測與組織學診斷符合率為84.00%。具體數據見表1。

表1 TCT單獨檢測的組織學診斷結果例

2.2 HPV-DNA單獨檢測的組織學診斷結果

HPV-DNA檢測后，有21例診斷為ACS-US之上，其中有16例組織學診斷結果為陽性(陽性包括CA、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)。TCT檢測與組織學診斷符合率為76.19%。具體數據見表2。

表2 HPV-DNA單獨檢測的組織學診斷結果例

2.3 聯合檢測的組織學診斷結果

聯合檢測后，有20例診斷為ACS-US之上，其中有18例組織學診斷結果為陽性(陽性包括CA、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)。聯合檢測與組織學診斷符合率為90.00%。其與TCT單獨檢測結果比較差異具有統計學意義(P<0.05)，與HPV-DNA單獨檢測結果比較差異也具有統計學意義(P<0.05)。

2.4 三種檢測方法的靈敏度和特異度比較

TCT檢測的特異度為74.8%，靈敏度為92.6%；HPV-DNA檢測的特異度為75.4%，靈敏度為82.9%；聯合檢測的特異度為88.7%，靈敏度為96.5%。聯合檢測的特異度、靈敏度與單獨TCT或HPV-DNA檢測比較，差異具有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

調查顯示[3]，宮頸癌癌前病變期較長，且早期宮頸癌的治療效果較好，生存率可達90%。其癌前病變表現為宮頸上皮內瘤樣病變，CIN的早期診斷能夠有效預防并降低宮頸癌病發[4-5]。因此，對宮頸癌的早期診斷尤為重要。

診斷宮頸病變的第一步是細胞學檢測，但其存在許多不足之處。如涂片不均勻、黏液過多遮蓋異常細胞、丟失細胞過多等影響診斷結果。膜式液基細胞學制片技術(TCT)的出現彌補了這些不足[6]，按規定手法進行操作，并且使用固定樣式的掃帚式刷子，刷頭全部進入采集管中，保證標本量，且涂片均勻，可提高閱片的準確率。此外，膜式液基細胞學制片還可重復，有效提高了檢出率[7]。

大量研究表明[8]，HPV感染與宮頸癌的病變過程有很大關系。無HPV感染的患者的CIN發生逆轉的概率是HPV持續感染患者的4倍。因此，宮頸病變的早期檢測中HPV檢測也是一項重要指標。且HPV-DNA檢測可排除可疑低度病變，提高診斷準確率。此外，還可根據術后HPV檢測的結果推測是否有復發的可能。但這兩種方法仍存在各自的不足[9]，TCT檢測容易受操作者主觀因素影響，HPV-DNA檢測受病變程度大小的影響，且特異性低。因此，本院進行聯合檢測，與TCT檢測、HPV-NDA檢測結果做對比。

對比結果表明，聯合檢測法與組織學診斷符合率(90.00%)明顯高于TCT檢測(84.00%)、HPV-NDA檢測(76.19%)；且特異度和靈敏度較高，分別為88.7%、96.5%。

綜上所述，聯合診斷的結果與組織學診斷結果的符合率較高，且特異度和靈敏度也較高，更有臨床使用價值。