老年性皮膚瘙癢T淋巴細胞因子平衡及安膚止癢濕敷方的療效

劉春保

(三亞市中醫院，海南 三亞 72000)

老年人體內固有水分和細胞中的水分減少，可引發皮膚干燥、皺紋增加，易導致局部或全身性的皮膚瘙癢〔1〕。目前對老年性皮膚瘙癢的發病機制尚未明確，導致缺乏有效的治療方案。相關研究認為，免疫系統異常特別是T淋巴細胞因子失衡參與了其發病過程〔2〕。淋巴細胞功能相關抗原(LFA)-1、細胞間黏附分子(ICAM)-1分屬于細胞黏附分子中的整合素家族、免疫球蛋白超家族，可調控多種炎癥介質和細胞因子的分泌〔3〕。老年性皮膚瘙癢在中醫理論中屬“癢風”、“風瘙癢”范疇，由風濕、燥熱、血虛等因素引發〔4〕；西醫常用抗組胺或激素類藥物治療，但患者耐受性差且停藥后易復發〔5〕。本研究探討老年性皮膚瘙癢癥患者體內T淋巴細胞因子變化及相關機制，分析安膚止癢濕敷方對T淋巴細胞因子平衡的影響。

1 對象與方法

1.1研究對象 選取2016年1月至2017年6月三亞市中醫院收治老年性皮膚瘙癢患者96例為研究組。均符合以下條件：①年齡≥60歲，符合《中國臨床皮膚病學》老年性皮膚瘙癢癥的診斷標準；②近1個月未接受皮質類激素、免疫抑制劑治療；③認知功能正常；④排除合并惡性腫瘤、肝腎功能障礙、嚴重感染、治療藥物過敏者。根據患者住院號的奇偶數分為治療A組和治療B組；治療A組49例，其中男29例，女20例；年齡60～76歲，平均(68.53±7.15)歲；病程4個月至7年，平均(2.95±1.78)年。治療B組47例，其中男29例，女18例；年齡60～78歲，平均(69.16±8.59)歲；病程5個月至7年，平均(3.05±1.92)年。另收集同期在我院查體健康老年人50名為對照組，其中男31名，女19名；年齡60～77歲，平均(69.02±6.38)歲。各組一般資料差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經醫院倫理委員會審批，受試者均簽署知情同意書。

1.2主要試劑 DMEM細胞培養基，胎牛血清購于上海杰美基因醫藥科技有限公司；人淋巴細胞分離液，植物血凝素(PHA)購于上海翊圣生物科技有限公司；Trizol試劑，逆轉錄試劑盒購于寶日醫生物技術有限公司；小鼠抗人LFA-1、ICAM-1單克隆抗體購于北京盛世中方生物科技有限公司。

1.3治療方案和癥狀評分 治療A組口服氯雷他定(深圳信立泰藥業股份有限公司，國藥準字H20020092)，10 mg/次，1次/d；治療B組在A組基礎上加用安膚止癢濕敷方，組方：胡麻仁、火麻仁、桃仁、甘草、沙苑蒺藜、艾葉、生姜各30 g，粉碎后每次取10 g外用，2次/d。兩組均連續治療1個月。采用改良的瘙癢癥狀評分表評估癥狀，總分0～9分，其中瘙癢程度(0～4分)、部位(0～2分)、頻率(0～3)得分越高反映癥狀越嚴重。

1.4外周血單個核細胞分離 抽取研究組與對照組外周靜脈血5 ml，放于肝素預處理的離心管中，加5 ml淋巴細胞分離液，2 000 r/min離心30 min，取外周血單個核細胞層，D-Hank洗滌3次，2 000 r/min離心5 min，用含10%胎牛血清的DMEM細胞培養液調整細胞濃度為2×106/ml。

1.5細胞因子誘導與檢測 DMEM配置濃度為500 μg/ml的PHA，向96孔板中每孔分別加入外周血單個核細胞懸液和PHA溶液各300 μl，細胞終濃度為1×106/ml，PHA溶液終濃度為250 μg/ml，37℃ 5%CO2培養箱中靜置48 h，收集上清液，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測T淋巴細胞因子〔白細胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10、干擾素(IFN)-γ〕水平，操作按試劑盒說明進行。

1.6RT-PCR法檢測外周血單個核細胞中LFA-1、ICAM-1 mRNA表達 Trizol法提取研究組與對照組外周血單個核細胞總RNA，分光光度法測定濃度，逆轉錄試劑盒獲得cDNA。引物由上海羽朵生物科技有限公司合成，反應體系30 μl，反應條件：94℃ 10 min，94℃ 5 min，56℃ 50 s，72℃ 1 min，共40個循環。擴增產物行瓊脂糖凝膠電泳，掃描得到目標條帶灰度值，以β-actin為內參計算LFA-1、ICAM-1 mRNA的相對表達量。

1.7Western印跡法檢測外周血單個核細胞中LFA-1、ICAM-1蛋白表達 RIPA試劑盒提取外周血單個核細胞總蛋白50 g，聚氰基丙烯酪正丁酯(BCA)法測定蛋白濃度，行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝膠電泳，轉膜到聚偏氟乙烯(PVDF)膜，封閉2 h，分別滴加小鼠抗人LFA-1、ICAM-1一抗(1∶500稀釋)，鼠源性β-actin單抗(1∶1 000)為內參，4℃孵育過夜，滴加辣根過氧化物酶(HRP)標記的二抗，孵育4 h，電化學發光(ECL)顯色，顯影、采集圖像，分析各條帶灰度值。

1.8統計學分析 使用SPSS17.0軟件進行t檢驗、Pearson分析。

2 結 果

2.1治療前研究組與對照組T淋巴細胞因子比較 治療前研究組外周血單個核細胞中IL-2、IFN-γ水平明顯高于對照組，IL-4、IL-10水平明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 治療前兩組外周血單個核細胞中T淋巴細胞因子水平比較

與對照組比較：1)P<0.05

2.2治療前研究組與對照組LFA-1、ICAM-1 mRNA和蛋白表達情況 研究組LFA-1、ICAM-1 mRNA相對表達量分別為2.51±0.95、2.18±0.72，對照組分別為1.15±0.43、1.02±0.30；研究組LFA-1、ICAM-1蛋白相對表達量分別5.82±1.90、5.39±1.62，對照組分別為3.18±0.73、2.85±0.69。研究組LFA-1、ICAM-1 mRNA和蛋白表達水平均明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見圖1。

2.3治療前研究組皮膚瘙癢癥狀評分與T淋巴細胞因子的相關性 研究組治療前皮膚瘙癢癥狀評分(5.37±2.85)分，Pearson分析顯示，IL-2、IFN-γ與癥狀評分呈正相關(r=0.423、0.526，均P<0.05)；IL-4與癥狀評分呈負相關(r=-0.332，P<0.05)；IL-10與癥狀評分無相關性(r=-0.062，P>0.05)。

2.4不同治療組T淋巴細胞因子比較 治療后1個月，兩組IL-2、IFN-γ水平明顯低于治療前，IL-4、IL-10水平明顯高于治療前(P<0.05)；且治療B組改善程度明顯優于治療A組(P<0.05)，見表2。

圖1 兩組LFA-1、ICAM-1蛋白電泳條帶

組別n時間IL-2IFN-γIL-4IL-10治療A組49治療前24.98±4.8219.11±4.437.85±3.558.72±3.91治療后1個月21.42±4.211)15.63±3.681)10.17±3.241)10.26±2.881)治療B組47治療前25.32±5.7619.03±4.767.89±3.768.85±4.43治療后1個月13.78±4.461)2)9.12±3.151)2)15.29±3.321)2)12.33±3.211)2)

與治療前比較：1)P<0.05；與治療A組比較：2)P<0.05

3 討 論

老年性皮膚瘙癢癥的發病機制仍未明確，目前認為體內免疫系統異常，特別是T淋巴細胞因子失衡可能參與其發病過程。根據活化后分泌的細胞因子和生理功能可將T淋巴細胞分為Th1和Th2兩個亞群，其中Th1包括IL-2、IFN-γ等，Th2包括IL-4、IL-10等。相關研究發現，Th1、Th2平滑失調與多種疾病的發生、發展有關〔6〕。細胞黏附分子是體內具有重要生理活性的跨膜糖蛋白，其中LFA-1表達于白細胞表面，ICAM-1分布于外周血白細胞、巨噬細胞等多種組織細胞表面，二者表達水平可調控多種炎癥介質和細胞因子的分泌〔7〕。本研究結果提示老年性皮膚瘙癢患者存在T淋巴細胞因子失衡，表現為Th1功能亢進、Th2功能下降，且與疾病發展有關。進一步分析發生機制提示LFA-1、ICAM-1表達上調可能介導了T淋巴細胞因子失衡，參與老年性皮膚瘙癢的發生、發展。

老年性皮膚瘙癢的臨床治療以口服抗組胺類藥和激素類外用軟膏為主，不良反應明顯且耐受性差。中醫理論中將其歸為“癢風”范疇，中藥外用方劑可有效止癢，輔助治療效果明顯。安膚止癢濕敷方具有收斂、消炎、鎮痛、止癢的功效，還能夠提升對組胺的致癢閾，可用于老年性皮膚瘙癢的輔助治療。本研究結果提示安膚止癢濕敷方有助于糾正患者T淋巴細胞因子失衡，達到治療目的。