姜黃素對乙型病毒性肝炎模型大鼠轉化生長因子-β1、腫瘤壞死因子-α表達水平的影響

胡金杰 王文生 陶 然

(海西州人民醫院感染科，青海 海西 817099)

乙型病毒性肝炎(乙肝)不僅影響患者的肝功能，如不及時控制病情可引發肝纖維化，常表現為肝組織修復異常〔1〕。因此，改善乙肝患者的肝功能及延緩肝纖維化是提高乙肝臨床治療的關鍵。姜黃素(Cur)屬于酚類化合物，作為中藥材姜黃的提取物〔2〕，具有廣泛的藥理學作用，如調節細胞周期和凋亡〔3〕、清除氧自由基〔4〕及抑制腫瘤生長〔5〕等。近年來發現Cur具有較強的肝保護作用，如對四氯化碳致實驗性肝纖維化大鼠有抗肝纖維化作用〔6〕，對膽管結扎后大鼠有較強的保肝作用〔7〕，對雷公藤甲素肝損傷有較強的保護作用〔8〕。此外，有研究指出Cur具有較強的抗乙型肝炎病毒的效果〔9〕。鑒于Cur較強的抗病毒及肝功能保護作用，本研究推測Cur有助于改善乙肝的肝功能并逆轉肝纖維化過程。為此，本研究給予乙肝大鼠Cur治療，并進一步分析其對轉化生長因子(TGF)-β1、腫瘤壞死因子(TNF)-α表達的影響。

1 材料與方法

1.1主要試劑 乙肝病毒抗原購自北京動物傳染病實驗研究中心。Cur購自美國Sigma公司，丙氨酸轉移酶(ALT)、天門冬氨酸轉移酶(AST)測定試劑盒購自上海玉蘭生物技術研究所，血清總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)測定試劑盒購自南京建成生物科技有限公司，透明質酸(HA)、層黏連蛋白(LN)和TGF-β1酶聯免疫吸附實驗(ELISA)檢測試劑盒購自美國Thermo Fisher公司，Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、TNF-α ELISA檢測試劑盒購自武漢博士德生物有限公司。

1.2動物模型與分組 采用雄性SD大鼠(體重220～250 g，北京維通利華公司提供，SPF級)尾靜脈感染乙型肝炎病毒制備乙肝模型，根據文獻〔10〕采用Hank調試劑將乙肝病毒抗原稀釋至1×106/ml，每只10 ml/kg尾靜脈注射，每周1次，連續3 w。將60只模型大鼠隨機分為模型組和Cur組，每組30只，分別每日灌服生理鹽水和20 mg/kg Cur，體積為5 ml。另取30只正常SD大鼠灌服生理鹽水作對照組。本實驗所用大鼠均于適應性喂養1 w后進行造模，整個實驗過程飼養于SPF級實驗動物房。

1.3肝功能及肝纖維化相關指標檢測 藥物干預結束即8 w后每組各選取6只大鼠，深度麻醉后開胸心臟采血5 ml，3 000 r/min離心15 min，分離血清，采用日立7600型全自動生化儀檢測ALT、AST水平，采用酶法檢測TBIL、DBIL水平，采用酶聯免疫試劑盒檢測HA、LN和PCⅢ水平，整個操作過程均嚴格遵循試劑盒說明書。

1.4血清TGF-β1、TNF-α水平檢測 藥物干預期間連續選取4個觀察點(2、4、6、8 w)，每組選取6只大鼠，血標本采集及血清分離步驟同1.3，采用酶聯免疫試劑盒檢測血清TGF-β1、TNF-α水平，整個操作過程嚴格遵循試劑盒說明書。

1.5統計學處理 采用SPSS19.0軟件行t檢驗、單因素分析。

2 結 果

2.1各組肝功能相關指標比較 與對照組相比，模型組ALT、AST、TBIL和DBIL水平升高，差異均有統計學意義(P<0.05)；Cur組的ALT、AST、TBIL和DBIL水平均低于模型組(P<0.05)，但仍高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 各組肝功能相關指標比較

與對照組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；下表同

2.2各組肝纖維化相關指標比較 與對照組相比，模型組HA、PCⅢ和LN水平升高(P<0.05)；Cur組的HA、PCⅢ和LN水平均低于模型組(P<0.05)，但仍高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 各組肝纖維化相關指標比較

2.3各組血清TNF-α水平比較 與對照組相比，模型組2、4、6、8 w的血清TNF-α水平均升高(P<0.05)；Cur組的血清TNF-α水平均低于模型組(P<0.05)，但仍高于對照組(P<0.05)。見表3。

2.4各組血清TGF-β1水平比較 與對照組相比，模型組2、4、6、8 w的血清TGF-β1水平均升高(P<0.05)；Cur組的血清TGF-β1水平均低于模型組(P<0.05)，但仍高于對照組(P<0.05)。見表4。

表3 各組血清TNF-α水平比較

表4 各組血清TGF-β1水平比較

3 討 論

肝纖維化通常繼發于慢性肝損傷，臨床研究發現在乙肝發生發展及轉歸的過程中均伴有不同程度的肝纖維化〔7〕。作為肝損傷的前期病變，肝纖維化對于乙肝的治療意義重大，延緩或逆轉肝纖維化是防止乙肝發展為肝硬化的關鍵〔8〕。Cur是姜黃的次生代謝產物，有多種藥理作用，可作為治療各種疾病如哮喘和肝病的有效藥物〔11〕。

本研究結果表明，Cur對乙肝導致的肝損傷有明確的保護價值；但經過Cur治療的乙肝大鼠的以上指標仍未恢復正常水平，可能與本研究使用的Cur劑量和觀察時間較短有關，下一步擬提高劑量和延長治療時程，必要時可聯合其他藥物提高Cur的治療效果。

在肝纖維化發生過程中，TGF-β1和TNF-α發揮了重要的促進作用。TGF-β1具有抑制膠原酶和蛋白酶合成的作用，可通過促纖維連接蛋白合成，使膠原及纖維連接蛋白在肝內沉積，同時抑制肝內膠原及基質降解，繼而導致肝纖維化的發生〔12〕。此外，TNF-α在發生肝損傷時，可促進胞外基質合成，促進炎癥反應，加重肝纖維化程度〔13〕。本研究結果發現，Cur可抑制TGF-β1和TNF-α水平升高，盡管具體機制尚不清楚，但為Cur改善乙肝肝硬化提供了確切證據。