8種殺菌劑對草莓灰霉病菌的室內毒力

陳麗萍，吳長興，蒼濤，徐明飛，柳采秀，吳聲敢，趙學平

(1.浙江大學 農業與生物技術學院，浙江 杭州 310058； 2.浙江省植物有害生物防控重點實驗室—省部共建國家重點實驗室培育基地 農業農村部農藥殘留檢測重點實驗室 浙江省農業科學院農產品質量標準研究所，浙江 杭州 310021)

灰霉病是草莓上主要的真菌病害之一，近幾年來，隨著草莓的廣泛種植，灰霉病問題日益突出，尤其在我國南方發生更為嚴重[1-3]。草莓灰霉病害是由半知菌亞門葡萄孢屬的灰葡萄孢菌(BotrytiscinemaPers.)侵染引起。果實成熟前植株感染灰霉病菌會導致花和果實的軟化腐爛，嚴重影響草莓生長，使農業生產受損；果實成熟后儲存和運輸時期感染灰霉病菌致使草莓果實大量腐爛。因此，灰霉病已成為嚴重影響草莓生長以及采摘后防腐保鮮的主要病害之一，直接造成品質和產量下降，對草莓產區經濟影響極大[4-5]。目前，草莓尚無高抗灰霉病的品種，生產上控制灰霉病仍以化學防治為主[6]，隨著化學防治導致病原菌抗藥性、農藥殘留等問題日益加重[7]。本研究采用菌絲生長速率抑制法，將8種殺菌劑對采集于建德的草莓灰霉病菌株進行了室內毒力測定，以期篩選出效果好風險低的農藥，為指導草莓灰霉病的防治及草莓生產安全合理用藥提供理論和實踐依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

草莓灰霉病菌由本實驗室采集自浙江省建德市楊村橋鎮緒塘村草莓種植大棚中的病果，經分離、純化獲得。

馬鈴薯培養基(PDA)[8]用于草莓灰霉病菌的分離、保存以及毒力測定。

供試藥劑有50%啶酰菌胺水分散粒劑(巴斯夫植物保護(江蘇)有限公司)；75%百菌清可濕性粉劑(日本石原產業株式會社)；35%腐霉利懸浮劑(四川省宜賓川安高科農藥有限責任公司)；70%嘧霉胺水分散粒劑(京博農化科技股份有限公司)；50%嘧菌環胺水分散粒劑(瑞士先正達作物保護有限公司)；255 g·L-1異菌脲懸浮劑(拜耳作物科學(中國)有限公司)；250 g·L-1戊唑醇水乳劑(江蘇龍燈化學有限公司)；12%(125 g·L-1)咯菌腈懸浮劑(瑞士先正達作物保護有限公司)。各供試藥劑用滅菌水配制母液備用。

1.2 處理設計

在預備試驗的基礎上，將各供試藥劑按等比系列稀釋成5個濃度，將12%(125 g·L-1)咯菌腈懸浮劑依次稀釋為500.00、50.00、5.00、0.50、0.05 mg·L-1；50%啶酰菌胺水分散粒劑依次稀釋為200.00、50.00、12.50、3.13、0.78 mg·L-1；35%腐霉利懸浮劑依次稀釋為100.00、25.00、6.25、1.56、0.39 mg·L-1；50%嘧菌環胺水分散粒劑依次稀釋為50.00、12.50、3.13、0.78、1.95×10-1mg·L-1；70%嘧霉胺水分散粒劑依次稀釋為50.00、12.50、3.13、0.78、1.95×10-1mg·L-1；75%百菌清可濕性粉劑依次稀釋為25.00、2.50、0.25、2.50×10-2、2.50×10-3mg·L-1；255 g·L-1異菌脲懸浮劑依次稀釋為25.00、6.25、1.56、0.39、9.77×10-2mg·L-1；250 g·L-1戊唑醇水乳劑依次稀釋為25.00、2.50、0.25、2.50×10-2、2.50×10-3mg·L-1；并設清水為對照。

1.3 毒力測定

參照農藥室內生物測定試驗準則[9]，采用菌絲生長速率抑制法[10]測定。菌絲生長速率抑制法是將不同濃度藥液混入融化的PDA培養基中(1∶10)，充分搖均勻后倒入直徑為90 mm的培養皿中制成不同濃度梯度的含藥培養基平板，以加無菌水培養基為空白對照(CK)，重復3次，將預先準備好的菌絲生長旺盛的病菌培養物平板，用打孔器在菌落外緣切下一菌盤(直徑為4 mm)，用接種針移植到含藥培養基的培養皿中央，并置于相同光源、25 ℃恒溫培養箱培養5 d(空白對照快長滿培養皿時)，然后用十字交叉法逐一測定菌落直徑，求出藥劑不同濃度的抑制率。

將菌絲生長抑制率換成抑制幾率值并作為縱坐標，藥劑質量濃度轉化為對數值作為橫坐標，根據菌絲生長抑制率進行幾率值(y)與質量濃度對數(x)之間的線性回歸關系，求毒力回歸方程，計算EC50值、95%置信限及相關系數(r)等[11-12]。

2 結果與分析

2.1 殺菌劑對草莓灰霉病菌的抑菌率

由表1可知，咯菌腈為0.05～500.00 mg·L-1時，對草莓灰霉病菌的抑菌率為47.5%～100.0%；啶酰菌胺在處理濃度為0.78～200.00 mg·L-1時，對草莓灰霉病菌的抑菌率為38.8%～74.5%；腐霉利在處理濃度為0.39～100.00 mg·L-1時，對草莓灰霉病菌的抑菌率為9.7%～56.8%；嘧菌環胺、嘧霉胺在處理濃度為1.95×10-1～50.00 mg·L-1時，對草莓灰霉病菌的抑菌率分別為9.4%～72.7%、6.7%～80.8%；百菌清、戊唑醇在處理濃度為2.50×10-3～25.00 mg·L-1時，對草莓灰霉病菌的抑菌率分別為3.0%～57.3%、0～93.1%；異菌脲在處理濃度為9.77×10-2～25 mg·L-1時，對草莓灰霉病菌的抑菌率為7.8%～76.7%。

表1 不同濃度殺菌劑對草莓灰霉病菌的抑菌效果

2.2 8種殺菌劑對草莓灰霉病菌的毒力

室內毒力測定結果表明(表2)，咯菌腈對草莓灰霉病的抑菌效果最好，EC50值為0.142 6 mg·L-1；其次是戊唑醇、啶酰菌胺、異菌脲、百菌清、嘧菌環胺，對草莓灰霉病的抑菌效果較好，EC50值分別為1.219 7、2.150 4、3.699 4、11.317 8和11.645 2 mg·L-1；腐霉利和嘧霉胺對草莓灰霉病的抑菌效果略差，EC50值分別為23.076 7和25.054 4 mg·L-1。

表2 供試藥劑對草莓灰霉病菌的毒力回歸方程及EC50的影響

3 小結與討論

化學藥劑防治灰霉病是控制灰霉病發生、減少損失的最有效途徑之一。由于草莓種植面積較小，國內登記的農藥品種較少，而且草莓灰霉病病原菌具有遺傳變異大、繁殖速率快和適應性強等特點，連續單一使用某一種殺菌劑，極易使病原菌產生抗藥性及交互抗性[13-14]。因此，迫切需要篩選出新的殺菌劑防治草莓灰霉病，并避免使用已產生抗性或防效大幅降低的藥劑。

本研究結果表明，8種殺菌劑的毒力大小順序為咯菌腈>戊唑醇>啶酰菌胺>異菌脲>百菌清>嘧菌環胺>腐霉利>嘧霉胺，這與楊敬輝等[5]的啶酰菌胺毒力基本一致，也與陳宏州等[14]的啶酰菌胺毒力基本一致；但異菌脲、嘧菌環胺、嘧霉胺的毒力存在一定差異，與王睿等[6]的腐霉利、嘧菌酯的毒力存在一定差異，這可能是由于病原菌菌株之間的敏感性差異造成的，建德的草莓灰霉病菌株可能比相關報道中用到的其他菌株敏感性更低。

本研究僅進行了殺菌劑對草莓灰霉病的室內篩選，田間藥效試驗還有待開展，同時還需進一步研究各類藥劑的應用技術及殘留動態，結合風險評估數據提出科學合理的農藥安全使用建議，對緩解草莓中農藥登記品種少、易產生抗性的問題、保障草莓質量安全具有借鑒意義[15]。