一例豬瘟病毒感染的診斷

何春

摘要：豬瘟是危害養豬業的一種重要病毒性傳染病，給養豬業造成了巨大的經濟損失。現對一起疑似豬瘟病毒感染病例從發病豬的臨床癥狀、病理剖檢及實驗室分子生物學PCR診斷，最終確定該豬場發生了豬瘟病毒感染，并且討論分析了豬瘟診斷與綜合防控方面的體會，以期為廣大養殖戶提供參考。

關鍵詞：豬瘟病毒；感染；診斷

中圖分類號：S858. 28

文獻標識碼：B

文章編號：2095-9737（2018）06-0013-02

豬瘟（CSF）俗稱“爛腸瘟”，是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病，世界動物衛生組織（ OIE）將其列為必須報告的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病，該病具有高度傳染性和致死性，給全球養豬業造成了巨大的經濟損失，是威脅我國養豬業的最重要的傳染病之-[1]。豬瘟是一種高度接觸性傳染病，急性型豬瘟以敗血性變化為主，實質器官出血，慢性型豬瘟主要是纖維素性壞死性腸炎變化。豬瘟可以引起免疫抑制，導致豬群繼發或混合感染其他疾病，給豬場帶來嚴重經濟損失。豬瘟的防治以疫苗免疫為主，我國自主研制的豬瘟兔化弱毒疫苗（C株）是一種安全和有效的弱毒疫苗，對豬瘟的防控起到了關鍵的作用，有效控制了我國豬瘟的暴發與流行，但豬場由于免疫不及時或者疫苗質量不佳，日常養殖飼養管理方式不當，藥物使用不當等原因導致疫苗免疫失敗，豬瘟病毒的感染仍時有發生[2]。現通過對一起豬瘟病毒感染的診斷，借以提高廣大養殖戶對豬瘟疾病的認識和重視，現將整個診斷過程介紹如下。

1 材料和方法

1.1 試劑、載體及試劑盒

一步法RT- PCR擴增試劑盒、克隆載體pMD18 - T為TaKaRa公司產品；基因組RNA提取試劑盒、膠回收試劑盒、質粒提取試劑盒均購自天根生化科技（北京）有限公司。

1.2 臨床癥狀觀察

觀察發病仔豬的臨床癥狀。

1.3 病料剖檢觀察

對病死仔豬剖檢，根據臨床癥狀及病料剖檢結果，對病例進行初步診斷。

1.4 實驗室PCR檢測

取淋巴結、肺臟、脾臟、腎臟等病變組織搗碎、研磨，研磨后反復凍融3次，離心取上清，利用病毒基因組RNA提取試劑盒提取病毒基因組。根據參考文獻[3]合成1對豬瘟病毒特異性檢測引物（Pl： 5'- TACACGATTGGACAAAT-CAAA-3；P2：5'- AACTC CATGTGCCATGTACAG-3'）。PCR擴增程序為：50℃60 min；94℃5 min； 94℃45 s，56℃45 s，72℃1 min，30個循環；72℃10 min，4℃終止反應。取PCR擴增產物10 μL進行瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

1.5 測序鑒定

PCR擴增產物利用膠回收試劑盒回收后連接至pMD18T載體，利用質粒提取試劑盒提取質粒，將陽性質粒送上海生工生物工程技術服務有限公司進行測序，將測序結果與豬瘟病毒特異性序列進行比對。

2 結果與分析

2.1 臨床癥狀

發病仔豬15日齡，發病初期排黃綠色稀便，體溫升高，在39.5℃左右，厭食，逐漸消瘦，最后衰竭至死亡，曾經使用青霉素類、磺胺類藥物治療，均無效。

2.2 病料剖檢

剖檢可見全身出血嚴重，胸腔、腹腔、內臟都出血，喉頭和扁桃體出血，腎臟呈土黃色，表面有大量出血點，腸道、膀胱出血，淋巴結出血，有“大理石樣”病變。

2.3

PCR檢測結果

如圖1所示，臨床病料RT- PCR擴增產物在355 bp處有特異性擴增條帶，與試驗預期設計的大小相符。

2.4 測序鑒定

經過序列比對，擴增的序列為豬瘟病毒的特異性序列，說明該豬場發生了豬瘟病毒感染，應該加強免疫防控。

3 討論

近幾年來，隨著豬瘟兔化弱毒疫苗在我國的廣泛接種，該病在我國已經得到有效的控制，但是散發病例仍有發生，我國豬瘟的持續性感染、隱性感染依然存在，給豬瘟的綜合防治帶來了一定的困難，也造成了巨大的經濟損失，嚴重阻礙了養豬業的健康發展[4]。豬瘟是傳染性極強的疾病，一旦發生就會傳染整個豬場的豬，給養殖戶帶來災難。引起豬瘟發病的主要原因是免疫程序不合理，免疫效果不確實。豬瘟的防控應堅持以預防為主，采取綜合防控措施，確保疫苗的質量合格，在疫苗的使用過程中，嚴格按照免疫規程，制定免疫程序的關鍵是排除母源抗體干擾，確定合適的首免日齡，適當加大疫苗注射劑量。定期對豬場進行免疫檢測，這樣不僅能了解豬群的免疫水平，指導豬場合理科學免疫，而且還能檢查免疫的效果，通過監測母源抗體以及豬群殘留抗體水平，適時開展補充免疫接種[5]。豬場引種時要選擇沒有豬瘟流行地區的種豬場，引種后要隔離飼養一段時間，經過常規免疫后再轉入本場區飼養，最好是自繁自養，建立無特定病原體豬群。同時，對于豬瘟的防控還應將豬場患病豬、隱性感染豬、陽性豬堅決淘汰，病死豬要進行無害化處理，搞好豬舍環境衛生，定期消毒，做好豬舍的驅蟲、滅鼠工作，進出的人員、車輛、物品要徹底消毒，加強飼料質量管理，加強疫苗監管，提高防疫人員素質，做好每個環節的工作，確保防疫工作的有效性。目前，有條件的豬場可以實行豬瘟凈化措施，通過引進無特定疫病的種群，培育健康動物，加強檢疫等方式可以實現豬場的豬瘟病毒凈化[6]。通過建立健康豬群，制定合理的免疫程序，加強生物安全等措施，盡快實現豬瘟的凈化。

參考文獻：

[1]高順，淺談豬瘟病毒[J].畜牧獸醫科技信息，2015（10）：89.

[2]盧開森，豬瘟免疫失敗原因分析及對策[J].農技服務，2017，34（6）：129.

[3]李晶梅，劉丹，薛霜，等，豬瘟病毒和牛病毒性腹瀉病毒雙重RT- PCR鑒別檢測方法的建立及應用[J].動物醫學進展，2014，35（4）：66-71.

[4]楊光，于江，鹿胡剛，等，我國豬瘟的流行現狀及防控策略[J].中國畜牧獸醫文摘，2017，33（5）：153-154.

[5]賀俊暢，張建遠，謝有福，等，規模化豬場豬瘟免疫程序制定的探索[J].中國獸醫雜志，2017，53（1）：43-44.

[6]李沛麗，董保豫，猶銀俊，等，豬瘟凈化的基本要求和方法探討[J].貴州畜牧獸醫，2017，41（1）：22- 23.