宣痹通瘀方對急性冠脈缺血大鼠心臟的保護作用及機制

李雙娣 成光宇 劉迎輝 隋永朋 李洪禹 劉愛東

(長春中醫藥大學附屬醫院，吉林 長春 130021)

冠心病心絞痛是臨床常見病、多發病，發病率逐年增加〔1〕。冠脈造影是診斷冠心病心絞痛的金標準，但由于造影為有創檢查手段，并且針對小血管、微血管及多支血管病變無法進行診斷，在臨床應用中仍然存在一些局限性。近年來，中醫藥干預心肌缺血動物模型的相關研究成為熱點，研究方向包括抗炎癥、抗氧化、抗動脈硬化等。研究發現，大量的中藥在不同程度上發揮著抗心肌缺血作用〔2〕。活血中藥川芎、 丹參、三七等具有抗血小板聚集、抗血栓形成、擴張血管、保護心肌細胞、降低心肌耗氧量等作用〔3〕。宣痹通瘀膠囊由延胡索(酒炙)、三七、川芎、郁金、人參、冰片等藥物組成，具有行氣化瘀止痛的功效，臨床上主要用于氣滯血瘀之胸痹心痛。本研究旨在觀察宣痹通瘀膠囊對心肌缺血模型大鼠生化指標及心肌組織血管內皮生長因子(VEGF)表達的影響，探討宣痹通瘀方保護心肌損傷的作用機制。

1 材料與方法

1.1實驗動物 清潔級SD大鼠，雌雄各半，體質量(220±20)g，由遼寧長生生物技術有限公司提供，動物合格證號：SCXK(遼)2015-0001。室內溫度(24±2)℃；相對濕度(50±10)%；氨濃度(mg/m3)≤14；采用晝夜自然光照；飼料為顆粒飼料，自由攝食、飲水。

1.2主要藥劑和設備 宣痹通瘀膠囊成分包括延胡索(酒炙)、三七、川芎、郁金、人參、冰片，規格：每克膠囊內容物含4.03 g生藥，批號：20141201，由長春中醫藥大學附屬醫院新藥研發中心提供。陽性對照藥麝香保心丸，上海和黃藥業有限公司生產(國藥準字231020068)，規格：22.5mg/丸；VEGF抗體：規格：1 ml/瓶，產品批號：JL0972R，美國Sigma公司產品，兔IgG-免疫組化試劑盒(SABC即用型)：產品批號：11H24J20。生理信號采集系統，型號：Powerlab/8sp，澳大利亞埃德公司產品。醫學圖像分析儀，型號：BI-2000,成都泰盟股份有限公司產品。全自動生化分析儀，型號：selectra junior，荷蘭威圖科學儀器公司產品。酶標儀，型號：BIOO680，美國伯樂公司產品。臺式高速低溫離心機，型號：Biofuge Stratos，德國賀利氏公司產品。電子天平，型號：SQP，規格：PRACTUM313-1CN，序列號：0028892121，賽多利斯科學儀器(北京)有限公司產品。交直流電子計數計重兩用秤，型號：KF-H2，中國凱豐集團有限公司產品。電熱三用水浴箱，型號：DS，北京市醫療設備廠產品。電熱恒溫鼓風干燥箱，型號：DHG-9143BS-Ⅲ型，上海新苗醫療器械制造有限公司產品。手術器材，JZO2Cr型靜脈拉鉤，手術刀，止血鉗，持針器，縫合針，縫合線等，上海醫療器械(集團)有限公司手術器械廠產品。各種手術器械在使用前經新潔爾滅溶液浸泡消毒滅菌24 h。大鼠固定板，1 ml注射器，5 ml注射器，采血管，離心管等。

1.3方法

1.3.1模型制備與分組 SD大鼠購入后，穩定適應性飼養1 w。用乙醚吸入法將大鼠麻醉，采用快速開胸結扎冠狀動脈前降支的模型處理方法，制備急性心肌缺血動物模型。具體方法：將動物置于密閉容器中使其被迫吸入乙醚至淺麻醉狀態。仰位固定于鼠板上，胸部去毛，絡合碘局部消毒，在第4～5肋間開胸，鈍性分離肌層，打開胸腔，暴露心臟，在左心耳根部與肺動脈圓錐交界處，相當于左冠狀動脈起始處下2 mm穿一手術線結扎，迅速將心臟送回胸腔，排出進入胸腔的氣體及血液，縫合胸壁。再次用絡合碘消毒液進行皮膚表面消毒，待動物蘇醒后放歸籠具常規飼養。結扎后5 min將其與Powerlab/8s型八導數據分析記錄儀連接好，記錄一段標準Ⅱ導聯心電圖，觀測ST段偏移幅度，以ST段抬高0.2 mV定義為造模成功。將造模成功的大鼠隨機分為模型組、麝香保心丸組(0.024 g·kg-1·d-1)；宣痹通瘀膠囊設高劑量(3.2 g·kg-1·d-1)、中劑量(1.6 g·kg-1·d-1)和低劑量(0.8 g·kg-1·d-1)三個亞組。另外，取10只同一批心電圖正常的大鼠作為假手術組。假手術組采用的手術方法與其他手術組相同，只是在左冠狀動脈下僅置手術線而不結扎。每組10只，雌、雄各5只。每天灌胃給藥1次，連續7 d。假手術組與模型組灌胃等體積蒸餾水。

1.3.2指標檢測 最后一次給藥后1 h，將實驗大鼠用20%烏來糖以5 ml/kg腹腔注射麻醉，經腹主動脈取血，3 000 r/min離心10 min分離血清。按相關各項指標檢測試劑盒說明書要求操作，使用全自動生化分析儀測定血清谷丙轉氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)含量。使用酶標儀測定超氧化物歧化酶(SOD)活性。采用免疫組化方法檢測VEGF含量。

1.4統計學方法 應用SPSS19.0統計學軟件行t檢驗。

2 結 果

2.1宣痹通瘀膠囊對心肌缺血模型大鼠血清心肌三酶水平的影響 模型組血清AST、CK和LDH水平均明顯高于假手術組(均P<0.001)。給予宣痹通瘀膠囊干預后，與模型組比較，高劑量組血清AST、CK和LDH明顯降低(P<0.01或P<0.05)，中劑量組可以明顯下調各組血清AST和LDH水平(P<0.05和P<0.01)；而低劑量組僅對LDH水平有顯著的下調作用(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清AST、CK、LDH、MDA水平和SOD活性比較

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，3)P<0.001；下表同

2.2宣痹通瘀膠囊對心肌缺血模型大鼠血清SOD活性及MDA含量的影響 宣痹通瘀膠囊高、中劑量組血清SOD活性明顯高于模型組(P<0.05)；而MDA含量明顯低于模型組(P<0.05)。見表1。

2.3宣痹通瘀膠囊對心肌缺血模型大鼠心肌組織VEGF含量的影響 與假手術組比較，模型組VEGF顯著下降(P<0.05)；與模型組比較，麝香保心丸組、宣痹通瘀高、中、低劑量組心肌組織內VEGF含量增高，差異均有統計學意義(均P<0.05)。見表2。

表2 免疫組化檢測各組心肌組織切片VEGF陽性表達染色面積及平均光密度比較

3 討 論

宣痹通瘀膠囊共含有六味中藥，延胡索(酒炙)辛苦而溫，入心、肝、脾經，具活血行氣止痛之功，“治心痛欲死”(《雷公炮炙論》)，能行血中之氣滯，氣中之血滯，故為君藥。三七甘苦而溫，入肝、胃二經，可化瘀活血而定痛，能夠祛瘀生新，化瘀不傷正；川芎辛溫，入肝、膽、心包經，活血化瘀，行氣止痛，為“血中之氣藥”，能夠通達氣血，使氣行血調；郁金味辛，入心、肝、膽經，辛能行能散，既能活血，又能行氣，可活血止痛、行氣解郁。三藥同用，助君行氣活血，化瘀止痛，共為臣藥。人參甘溫，入心、脾、肺經，善“補五臟，安精神，止驚悸”(《神農本草經》)，能補脾益肺養心氣，方中人參既可補氣生血，使氣旺血生，動力不竭，又能固護正氣，防君、臣諸藥行氣化瘀克罰太過耗傷正氣，屬佐助和佐制之功；冰片辛苦微寒，歸心、脾、肺經，善走能散，具有散火、散氣、散血、散滯、通竅、辟惡之功，“獨行則勢弱，佐使則有功”(《本草衍義》)，與諸藥相伍，能開心竅，止痹痛，亦為佐藥。諸藥合用，共奏活血祛瘀，行氣止痛之功，可使瘀血得去，脈道得通，則諸癥自解。

本研究結果表明，宣痹通瘀膠囊對缺血缺氧導致的心肌損傷有保護作用。現代藥理研究表明，延胡索、川芎能夠擴張冠脈、降低冠脈阻力、提高耐缺氧能力、保護心肌細胞〔4，5〕，三七、郁金具有抗血小板聚集及溶栓作用〔6〕，人參、冰片能夠抗心肌缺血、抗心律失常〔7〕。同時，宣痹通瘀方可以升高缺血心肌組織中VEGF含量，提示宣痹通瘀方可能存在一定促進血管新生的作用，但具體機制還有待進一步研究。