茶多酚對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能及抗氧化能力的影響

劉 梅， 史 挺， 王玉海， 鄭 美

（1.棗莊學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，山東棗莊 277160；2.北京資源集團(tuán)，北京大興 102600）

茶多酚是從茶葉中提取的多酚類純天然活性物質(zhì)，通常其含量占茶制品干重的30%左右，主要成分為黃烷醇 （兒茶素）類，兒茶素占60%～80%。茶多酚又稱茶鞣或茶單寧，其是形成茶葉色香味的主要成份之一 （趙磊等，2017；汪水平等，2003）。目前，茶多酚是我國食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)批準(zhǔn)使用的天然抗氧化劑之一，其可通過保持細(xì)胞的完整性，以保證各種細(xì)胞功能。故其在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用已引起眾多研究者的關(guān)注。研究表明，茶多酚對(duì)動(dòng)物和人體是安全的（高海榮等，2016）。有關(guān)報(bào)道也表明茶多酚對(duì)肉雞的增重、料肉比有一定的改善作用（曹兵海等，2003），也可降低鵪鶉及蛋雞血清中的總膽固醇、甘油三酯水平（李樺等2015；尹靖東等，2002）。然而關(guān)于茶多酚對(duì)肉雞抗氧化能力的影響卻鮮有報(bào)道。本研究以AA肉雞為試驗(yàn)對(duì)象，探討茶多酚對(duì)肉雞生產(chǎn)性能及抗氧化能力的影響，為其在肉雞生產(chǎn)中應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 茶多酚購自徐州豐瑞生物科技有限公司，純度為99%。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì) 試驗(yàn)動(dòng)物為1日齡AA肉仔雞，購自棗莊市富平孵化場(chǎng)。選擇128只1日齡AA肉仔雞，隨機(jī)分成4個(gè)日糧處理組，每個(gè)日糧處理組分4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只雞。第1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，第2、3、4組分別在日糧中添加 40、80、120 mg/kg 的茶多酚。試驗(yàn)期 42 d。參照美國NRC（1994）營養(yǎng)需要配制的粉狀配合飼料，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理 各組飼養(yǎng)管理方式一致。試驗(yàn)肉雞雙層籠養(yǎng)，自由采食和飲水，控制舍內(nèi)溫度、濕度和光照，衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)符合雞的衛(wèi)生要求。免疫和消毒程序按常規(guī)程序進(jìn)行。

1.4 樣品采集與測(cè)定方法

1.4.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)的測(cè)定 試驗(yàn)期間每天記錄肉雞采食量，21日齡、42日齡8:00稱重 （稱重前一夜禁食12 h，僅供飲水）。計(jì)算各組的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI） 和料肉比（F/G）。

1.4.2 血清指標(biāo)的測(cè)定 每個(gè)處理組隨機(jī)取4只翅下靜脈采血，血液樣品4℃下3000 r/min離心10 min，裝于 1.5 mL的eppendorf管中，置-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

血清中丙二醛（MDA）含量的測(cè)定采用試劑盒法（硫代巴比妥酸比色法）（南京建成生物工程研究所），nmol/mL 。

血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力的測(cè)定采用試劑盒法（黃嘌呤氧化酶法）（南京建成生物工程研究所），U/mL。

血清中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力的測(cè)定采用試劑盒法（DTNB比色法）（南京建成生物工程研究所），U/mL。

血清中CAT活力的測(cè)定采用試劑盒法（紫外分光光度計(jì)法）（南京建成生物工程研究所），U/mL。

1.4.3 胸肌抗氧化能力指標(biāo)的測(cè)定 靜脈采血后斷頸處死（Close等，1997），分離胸肌并稱重，快速取1～2 g胸大肌組織樣品放入液氮中速凍，-70℃保存用于分析有關(guān)酶活性和基因表達(dá)。

表1 基礎(chǔ)日糧的組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

根據(jù)Gen Bank上雞GPx4基因m RNA序列設(shè)計(jì)引物，TRIZOL法提取總RNA后，用Oligo（dT）引物和AMV反轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，RT-PCR反應(yīng)體系為SYBR Premix Ex Taq，上下游引物和cDNA模板以GAPDH為內(nèi)參，反應(yīng)程序?yàn)椋鹤冃?5℃，10 s，退火 95 ℃，5 s，延伸 60℃，34 s。引物詳細(xì)信息見表2。

本試驗(yàn)采用熒光定量PCR中的雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法對(duì)肉雞肌肉GPx4的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，按試劑盒（大連寶生物公司）說明書進(jìn)行操作，反應(yīng)結(jié)束后分析熔解曲線，對(duì)引物特異性進(jìn)行判定。

表2 相關(guān)引物序列

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS（18.0.3）統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)方差分析，試驗(yàn)結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶多酚對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響 茶多酚對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響見表3。由表3可知，21日齡，120 mg/kg茶多酚組的平均日采食量和平均日增重分別顯著高于對(duì)照組18.64%（P＜0.05）、22.86%（P＜0.05），與對(duì)照組比較120 mg/kg茶多酚組的料肉比則顯著降低了3.42%（P＜0.05）。而在42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，茶多酚各添加組的平均日采食量（P＜0.05）和平均日增重（P＜0.05）均顯著增加，茶多酚80 mg/kg與120 mg/kg組的料肉比均顯著降低（P＜0.05）。

2.2 茶多酚對(duì)肉仔雞血清抗氧化指標(biāo)的影響茶多酚對(duì)肉仔雞血清抗氧化指標(biāo)的影響見表4。由表4可知，21日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，80、120 mg/kg茶多酚組肉仔雞血清中GSH-Px、CAT和SOD的活力均顯著上升 （P＜0.05）；在42日齡時(shí)，80、120 mg/kg茶多酚組肉仔雞血清中GSHPx和 SOD的活力均顯著上升 （P＜0.05），但CAT活力無顯著性變化 （P＞0.05）。在21日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組之間肉雞血清的MDA含量顯著下降（P＜0.05）。而在42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，茶多酚80、120 mg/kg組肉仔雞血清中的MDA含量分別顯著降低了14.88%、17.79%（P ＜ 0.05）。

表3 茶多酚對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響

表4 茶多酚對(duì)血清抗氧化相關(guān)指標(biāo)的影響

2.3 茶多酚對(duì)肉仔雞胸肌GPx4表達(dá)水平的影響茶多酚對(duì)肉仔雞胸肌GPx4表達(dá)水平的影響見圖1。由圖1可知，與對(duì)照組相比較，茶多酚80 mg/kg組和120 mg/kg組的肉仔雞胸肌GPx4表達(dá)水平顯著上調(diào)（P ＜ 0.05）。

3 討論

3.1 茶多酚對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響 李樺等（2015）的研究表明，在飲水中添加茶多酚，能不同程度的改善肉雞的平均日增重，降低料重比。李衛(wèi)春等（2008）研究指出，茶多酚能降低料肉比，且對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響存在性別差異。徐曉娟等（2011）報(bào)道，在飼糧中添加一定濃度水平的茶多酚能顯著提高青腳麻雞生產(chǎn)性能，但飼料轉(zhuǎn)化率不與日糧中茶多酚添加量成正比。易先國（2014）也報(bào)道，飼料中添加茶多酚可使4周齡以上固始雞雛雞極顯著增重，料重比也明顯降低。而曹兵海等（2003）報(bào)道，在肉仔雞日糧中添加0.4%的茶多酚，對(duì)肉仔雞的增重、料肉比等有顯著改善作用。本研究結(jié)果表明，日糧中添加120 mg/kg茶多酚在一定程度上可以改善肉仔雞生產(chǎn)性能，差異顯著（P＜0.05）。此結(jié)果與上述研究結(jié)果有些不一致，這有可能與肉雞的品種及茶多酚的添加水平不同有關(guān)。茶多酚能夠影響動(dòng)物生產(chǎn)性能，可能由于其屬于黃酮類物質(zhì)，具有植物雌激素活性，可促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，影響動(dòng)物生產(chǎn)性能。

圖1 茶多酚對(duì)肉仔雞胸肌GPx4表達(dá)水平的影響

3.2 茶多酚對(duì)肉雞血清抗氧化指標(biāo)的影響GSH-Px是生物機(jī)體細(xì)胞內(nèi)H2O2和脂質(zhì)自由基的清除劑。SOD是自由基損害的主要防御酶，其重要意義在于清除H2O2和OH-的前身O2-，進(jìn)而保護(hù)細(xì)胞不受毒性氧自由基的損傷，所以其活力可以反映機(jī)體清除氧自由基的能力，故測(cè)定SOD可以判斷組織內(nèi)的自由基水平及脂質(zhì)過氧化程度（于揚(yáng)等，2013）。SOD和GSH-PX兩種酶能協(xié)同減弱自由基的損傷效應(yīng)。CAT能分解H2O2以減少機(jī)體受自由基的侵害，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性（李樺等，2016）。生物機(jī)體內(nèi)的酶類氧自由基清除劑SOD、GSH-Px和CAT構(gòu)成酶促抗氧化體系。

有些研究表明，茶多酚可以誘導(dǎo)GSH-Px、SOD和CAT的生成，同時(shí)能激活體內(nèi)抗氧化物酶及其轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)，以提高動(dòng)物機(jī)體的抗氧化能力。李衛(wèi)春等（2008）報(bào)道，茶多酚能顯著提高肉雞血漿中的抗氧化物GSH-Px、SOD和CAT活性。李樺等（2016）研究結(jié)果表明，肉雞飲水中添加綠茶多酚能不同程度改善熱應(yīng)激狀態(tài)下的血清SOD、GSH-Px抗氧化指標(biāo)。汪小紅等（2017）研究表明，TP可顯著提高血漿總超氧化物歧化酶 （T-SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（GPx-Px）活性。本研究結(jié)果表明，21日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，80、120 mg/kg茶多酚組肉仔雞血清中的的 GSH-Px、CAT和SOD的活力均顯著上升（P＜0.05）；而在42日齡時(shí)，80、120 mg/kg茶多酚組肉仔雞血清中GSHPx和SOD的活力均顯著上升（P＜0.05），但CAT活力無顯著性變化（P＞0.05），與以上試驗(yàn)結(jié)果基本一致。

MDA是脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，其可間接反映氧自由基對(duì)細(xì)胞的損傷程度。MDA含量可以反映脂質(zhì)過氧化程度。茶多酚與自由基反應(yīng)生成較為穩(wěn)定的酚氧自由基，從而達(dá)到直接清除自由基的目的，同時(shí)能抑制脂質(zhì)過氧化作用（Masella等，2005；Wanasundara 等，1998）。 茶多酚對(duì)自由基引起的細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化損傷有保護(hù)作用，對(duì)細(xì)胞膜MDA的生成有抑制作用（晁婭梅等，2016；Park等，2003）。李衛(wèi)春等（2008）報(bào)道，肉雞日糧中添加茶多酚，血漿中的MDA含量與對(duì)照組差異不顯著。然而，李樺等（2015）研究則表明，茶多酚能有效抑制血液中MDA的生成，減少機(jī)體損傷。本研究結(jié)果表明，在21日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組之間肉雞血清的MDA含量顯著下降 （P＜0.05）。而在42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，茶多酚80、120 mg/kg組肉仔雞血清中的MDA含量分別顯著降低了14.88%、17.79%（P＜0.05）。此結(jié)果與上述研究相比有些不一致，這有可能與茶多酚的添加水平不同，添加時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān)。

3.3 茶多酚對(duì)肉仔雞胸肌GPx4表達(dá)水平的影響GPx4是GSH-Px家族同工酶的一種，也是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中唯一能直接還原生物膜上的磷脂氫過氧化物的抗氧化酶。研究表明，GPx4不但可以分解過氧化氫，而且還可以分解過氧化脂質(zhì)，以減少體內(nèi)脂質(zhì)氫過氧化物的累積。GPx4可與生物膜內(nèi)及其脂蛋白上脂質(zhì)過氧化物結(jié)合，保護(hù)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞膜上的脂蛋白免受過氧化物介導(dǎo)的損傷。所以，在動(dòng)物屠宰后，如果肌肉中GPx4基因mRNA相對(duì)表達(dá)量高，那么就說明該雞肉中GPx4酶活性高，就可以更加有效地抑制肉產(chǎn)品的腐敗（Li等，2015；Gatellier等，2004）。 本研究表明，與對(duì)照組相比較，茶多酚80、120 mg/kg組的肉仔雞胸肌GPx4表達(dá)水平上調(diào)，差異顯著。

4 小結(jié)

茶多酚對(duì)肉仔雞的生長(zhǎng)性能有促進(jìn)作用。茶多酚對(duì)抗氧化物酶GSH-Px、SOD和CAT的活性有提高作用，同時(shí)茶多酚的添加能降低肉雞血清中的MDA含量，對(duì)機(jī)體的抗氧化能力有一定的促進(jìn)作用。在轉(zhuǎn)錄水平上，茶多酚可顯著提高肉雞胸肌GPx4基因mRNA的表達(dá)量，進(jìn)而提高GSH-Px酶活性，保護(hù)肉雞肌肉生物膜不受損傷，為其貨架期延長(zhǎng)起到積極作用。