復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)、肉質(zhì)及血清中補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4含量的影響

曲 木， 黃 成， 張寶龍， 程鎮(zhèn)燕， 白東清， 賈麗艷， 翟勝利*

（1.天津市晨輝飼料有限公司，天津市水族動(dòng)物功能性飼料企業(yè)重點(diǎn)試驗(yàn)室，天津 301800；2.天津農(nóng)學(xué)院水產(chǎn)學(xué)院，天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點(diǎn)試驗(yàn)室，天津 300384）

黃顙魚(yú) （pelteobagrus fulvidraco）屬鯰形目（Siluriformes）， 鲿科 （Bagridae）， 黃顙魚(yú)屬（Pelteobagrus）。因其細(xì)嫩的口感，少刺，味道鮮美而被人們所喜愛(ài)，但是由于養(yǎng)殖面積和強(qiáng)度的急劇增加，病害日益嚴(yán)重，養(yǎng)殖人員大量使用抗生素和化學(xué)藥品，致使魚(yú)體抗藥性增加，養(yǎng)殖成本提高，已嚴(yán)重影響人類的健康和水環(huán)境安全 （盛竹梅等，2012）。近年來(lái)，中草藥被廣泛應(yīng)用于凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei） （ 王 蕓 等 ，2007）、 鯉 魚(yú)（Cyprinus carpiovar） （ 孟 兆 娜 等 ，2011）、 草 魚(yú)（Ctenopharyngodon idellus）（李超等，2011）等的研究中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加中草藥對(duì)養(yǎng)殖對(duì)象生長(zhǎng)及免疫力提升有極大的促進(jìn)作用。目前，添加中草藥以提高魚(yú)體抗病毒性、抗病菌及促進(jìn)免疫力等功效成為水產(chǎn)飼料添加劑的研究熱點(diǎn) （劉紅柏等，2004；姜德山等，2003；羅琳等，2000；黃琪琰，1993）。本試驗(yàn)研究以黨參、黃芪、野菊花混合制成的復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)、肉質(zhì)及血清中補(bǔ)體含量的影響，為飼料配方優(yōu)化提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

1.1.1 復(fù)方中草藥的制備 復(fù)方中草藥的制備參照葛婧等（2016）方法并略作改動(dòng)。將黃芪、黨參和野菊花三種中草藥按5∶3∶2比例混合。將稱重過(guò)的中草藥洗凈溫水浸泡50 min，加20倍水量，先用武火煎煮，沸騰后改用文火，砂鍋3次煎煮，一煎40 min，二煎 35 min，三煎 30 min，連續(xù)煎煮后過(guò)濾殘?jiān)瑴珓┌唇M別分別裝瓶標(biāo)號(hào)放入冰箱4℃冷藏待用。

1.1.2 飼料的制備 本試驗(yàn)飼料以復(fù)方中草藥為添加劑，以魚(yú)粉、豆粕、雞肉粉、玉米蛋白粉為主要蛋白來(lái)源，輔佐少量礦物質(zhì)元素，配合中草藥制成六個(gè)梯度的試驗(yàn)飼料。以Diet 1為對(duì)照組（復(fù)方中草藥含量0%），其余為試驗(yàn)組。飼料自然風(fēng)干，裝袋保存標(biāo)記待用。

表1 飼料配方%

1.2 試驗(yàn)魚(yú)與養(yǎng)殖管理

1.2.1 試驗(yàn)魚(yú) 試驗(yàn)魚(yú)購(gòu)自天津市和來(lái)科技有限公司，挑選規(guī)格一致，初始體重（20.0±1.0）g 的黃顙魚(yú)，經(jīng)消毒、暫養(yǎng)2周后，隨機(jī)選取健康無(wú)病，體色正常不畸形的試驗(yàn)魚(yú)分為六個(gè)處理組，每組4個(gè)平行，每個(gè)平行20尾魚(yú)，飼養(yǎng)在780m×575m×467 m的方形（實(shí)際養(yǎng)殖水150 L）藍(lán)色塑料箱中，記錄每條魚(yú)的體重。馴化2周后開(kāi)始正式養(yǎng)殖試驗(yàn)，養(yǎng)殖周期為28 d。

1.2.2 養(yǎng)殖管理 試驗(yàn)期間日投喂量為體重的3%～6%，具體投喂量按試驗(yàn)魚(yú)實(shí)際攝食情況而定，每天記錄投喂量，每天飼喂兩次，投喂時(shí)間為每天9:30和16:30。定期檢測(cè)水質(zhì)指標(biāo)：試驗(yàn)期間水溫（27.5±2.5）℃，溶氧≥6.0 mg/L，pH 為（7.3±1.2），氨氮 ＜ 0.2 mg/L，亞硝酸鹽 ＜ 0.005 mg/L。每?jī)商鞊Q一次水，每次換水1/3左右，及時(shí)清理底質(zhì)沉積。

1.2.3 樣本采集 養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，禁食24 h，從每個(gè)養(yǎng)殖箱隨機(jī)撈取5尾魚(yú)，稱重記錄。試驗(yàn)魚(yú)經(jīng)丁香酚麻醉后，在冰盤上進(jìn)行抽血，取出來(lái)的靜脈血4℃、4000 r/min離心15 min，取上層血清待用。之后進(jìn)行解剖，取肝臟、脾、中腎等組織，對(duì)肝臟稱重記錄，所有樣本-20℃條件保存。

每個(gè)平行分別取10尾魚(yú)，取側(cè)線上方的同側(cè)新鮮背肌，干紗布擦干表面水分，其中5尾魚(yú)的樣品放于底部放有適當(dāng)吸水紙的10 mL離心管中，以用于肌肉滴水損失率的測(cè)定，剩余5尾樣品裝入密封袋以用于后續(xù)肌肉蒸煮損失率測(cè)定。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定

生長(zhǎng)指標(biāo)計(jì)算按下列公式進(jìn)行：

增重率/%=（終末體重-初始體重）/初始體重×100；

特定生長(zhǎng)率/（%/d）=（ln 終末體重-ln 初始體重）/養(yǎng)殖時(shí)間×100；

餌料系數(shù)=飼料投喂重量/（終末體重-初始體重）；

肝體比/%=肝臟重量/終末體重×100；

蛋白效率 （PER，%）=體重增加量/蛋白質(zhì)攝取×100。

1.3.2 肉質(zhì)檢測(cè)

1.3.2.1 肌肉滴水損失率測(cè)定 將盛有樣本的10 mL離心管，4℃，4000 r/min離心20 min，取出擦干背肌表面水分，稱重記錄。

滴水損失率/%=（離心前肌肉質(zhì)量-離心后肌肉質(zhì)量）/離心前肌肉質(zhì)量×100。

1.3.2.2 肌肉蒸煮損失率測(cè)定 將裝有樣本的密封袋，放入70℃的恒溫水浴鍋中蒸煮15 min，取出冷卻至室溫，擦干背部肌肉表面水分，稱重記錄。

蒸煮損失率/%=（蒸煮前肌肉質(zhì)量-蒸煮后肌肉質(zhì)量）/蒸煮前肌肉質(zhì)量×100。

1.3.3 黃顙魚(yú)組織中補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4含量的測(cè)定

采用商用試劑盒 （購(gòu)自南京建成生物工程研究所）對(duì)血清及組織中的補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4含量進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)分析 所有指標(biāo)數(shù)據(jù)均用Excle 2007進(jìn)行分析處理，所有數(shù)據(jù)均以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，使用SPSS 18統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（ANOVA），用 Duncan（D）比較差異性，顯著性水平為0.05。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響 用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚(yú)，在7、14、21、28 d時(shí)取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚(yú)增重率有上升的趨勢(shì)，在4個(gè)取樣階段均為Diet 4處理組最高，與對(duì)照組相比分別升高了 69.89%、106.69%、143.51%、66.07%，Diet 4處理組各階段增重率大小順序?yàn)?1 d＞7 d＞14 d＞28 d（見(jiàn)表 2）。

表2 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)增重率的影響%

用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚(yú)，在7、14、21、28 d時(shí)取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚(yú)增重率有上升的趨勢(shì)，在4個(gè)取樣階段均為Diet 4處理組最高，與對(duì)照組相比分別升高了 70.07%、105.71%、142.11%、63.64%，Diet 4處理組各階段特定生長(zhǎng)率大小順序?yàn)?7 d＞14 d＞21 d＞28 d（見(jiàn)表 3）。

表3 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)特定生長(zhǎng)率的影響%/d

用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚(yú)，在7、14、21、28 d 時(shí)取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚(yú)的餌料系數(shù)變化趨勢(shì)不明顯，在4個(gè)取樣階段均為Diet 4處理組最低，且顯著低于其他各組（P＜0.05），分別比對(duì)照組降低了 11.58%、22.35%、28.88%、35.52%，Diet 4處理組各階段餌料系數(shù)大小順序?yàn)? d＞14 d＞28 d＞21 d（見(jiàn)表 4）。

表4 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)餌料系數(shù)的影響

用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚(yú)，在7、14、21、28 d時(shí)取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚(yú)蛋白質(zhì)效率有上升的趨勢(shì)，在4個(gè)取樣階段均為Diet 4處理組最高，且顯著高于其他各組（P＜0.05），與對(duì)照組相比分別升高了 25.82%、41.48%、47.09%、63.91%，Diet 4處理組各階段蛋白質(zhì)效率大小順序?yàn)?4 d＞28 d＞7 d＞21 d（見(jiàn)表 5）。

表5 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)蛋白質(zhì)效率的影響%

2.2 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)肉質(zhì)的影響 用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚(yú)，在7、14、21、28 d時(shí)取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚(yú)肉質(zhì)的滴水損失率有降低的趨勢(shì)，在4個(gè)取樣階段均為Diet 4處理組最低（P＜0.05），與對(duì)照組相比分別降低了24.52%、28.81%、44.28%、46.03%，Diet 4處理組各階段滴水損失率大小順序?yàn)?7 d＞14 d＞28 d＞21 d（見(jiàn)表 6）。

表6 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)背部肌肉滴水損失率的影響%

用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚(yú)，在7、14、21、28 d時(shí)取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚(yú)肉質(zhì)的蒸煮損失率有降低的趨勢(shì)，在4個(gè)取樣階段均為Diet 4處理組顯著較低 （P＜0.05），與對(duì)照組相比分別降低了28.80%、29.81%、39.47%、38.62%，Diet 4處理組各階段滴水損失率大小順序?yàn)? d＞14 d＞28 d＞21 d（見(jiàn)表 7）。

表7 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)背部肌肉蒸煮損失率的影響%

2.3 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)血清中補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4含量的影響

2.3.1 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)血清中補(bǔ)體C3含量的影響 用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚(yú)，在 7、14、21、28 d 時(shí)取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中中草藥添加量的上升，黃顙魚(yú)血清中的補(bǔ)體C3活性有上升的趨勢(shì)，在4個(gè)取樣階段均為Diet 3處理組顯著升高（P＜0.05），與對(duì)照組相比分別升高了 51.18%、139.93%、46.80%、102.56%，Diet 3處理組各階段補(bǔ)體C3活性高低順序?yàn)?1 d＞28 d＞14 d＞7 d（見(jiàn)表 8）。

2.3.2 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)血清中補(bǔ)體C4含量的影響 用添加復(fù)方中草藥的飼料飼喂黃顙魚(yú)，在 7、14、21、28 d 時(shí)取樣，結(jié)果表明：隨著飼料中草藥添加量的上升，黃顙魚(yú)血清中的的補(bǔ)體C4活性有上升的趨勢(shì)，在4個(gè)取樣階段均為Diet 3處理組顯著升高（P＜0.05），與對(duì)照組相比分別升高了 231.43%、159.05%、161.04%、223.81%，Diet 3處理組各階段補(bǔ)體C4活性高低順序?yàn)?1 d＞28 d＞14 d＞7 d（見(jiàn)表 9）。

表8 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)血清中補(bǔ)體C3含量的影響mg/L

表9 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)血清中補(bǔ)體C4含量的影響mg/L

3 討論

3.1 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)的影響 中草藥含有多中營(yíng)養(yǎng)元素和生物活性物質(zhì)，對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物有一定的促生長(zhǎng)作用。Wu等（1998）發(fā)現(xiàn)，0.3%中草藥（絞股蘭）對(duì)草魚(yú)增重的促進(jìn)作用最大，Dan等（1999）發(fā)現(xiàn)，1%中草藥（小茴香）對(duì)鯽魚(yú)增重的促進(jìn)效果最大。與上述結(jié)果相似，本試驗(yàn)中，黃顙魚(yú)攝食了含有中草藥的飼料后，增重率和特定生長(zhǎng)率顯著提高，Diet 4飼料組即中草藥含量為0.4%時(shí)促生長(zhǎng)效果最好。中草藥的給藥劑量不同，可能是因?yàn)樘砑又胁菟幏N類、養(yǎng)殖對(duì)象的不同造成的。復(fù)方中草藥可以促進(jìn)黃顙魚(yú)對(duì)飼料的吸收和消化，增加飼料的吸收利用率。消化率決定飼料利用率，而消化率與消化部位產(chǎn)生的消化酶息息相關(guān)，消化酶決定黃顙魚(yú)對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，朱浩等（2008）證明了中草藥飼料可以改變消化酶活性，從而促進(jìn)黃顙魚(yú)的生長(zhǎng)。中草藥具有誘食作用，可以增加黃顙魚(yú)對(duì)飼料的興趣，大大降低飼料的浪費(fèi)，變相的降低餌料系數(shù)。從蛋白質(zhì)效率上看，投喂中草藥后，可以提高黃顙魚(yú)對(duì)蛋白質(zhì)吸收利用，對(duì)生長(zhǎng)起到一定的促進(jìn)作用。而肝體比方面試驗(yàn)組與對(duì)照組相比并沒(méi)有太大的變化，這與丁小峰（2006）的試驗(yàn)結(jié)果相似。

3.2 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)肉質(zhì)的影響 肌肉滴水損失和蒸煮損失是衡量肌肉蛋白質(zhì)保持水分的能力，直接影響肉的風(fēng)味、質(zhì)地和營(yíng)養(yǎng)成分等食用品質(zhì)（黃燕華等，2013）。試驗(yàn)中投喂黃顙魚(yú)中草藥飼料后，蒸煮損失率和滴水損失率都有所下降，其中Diet 4的效果最好，中草藥含量為1.20%，從而也說(shuō)明肉質(zhì)中的水分減少，蛋白質(zhì)和脂質(zhì)成分變大，黃顙魚(yú)的品質(zhì)變高。王吉橋等（2008）研究證明了投喂中草藥可以提高黃顙魚(yú)肌肉中蘇氨酸，蛋氨酸等含量，大大提高肉質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。張耀武等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥能夠提高黃河鯉肌肉中鮮味氨基酸的含量，提升其肌肉品質(zhì)。

3.3 復(fù)方中草藥對(duì)黃顙魚(yú)組織中補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4含量的影響 補(bǔ)體系統(tǒng)可廣泛參與機(jī)體抗微生物防御反應(yīng)以及免疫調(diào)節(jié)，也可介導(dǎo)免疫病理的損傷性反應(yīng)，是機(jī)體內(nèi)具有重要生物學(xué)意義的效應(yīng)系統(tǒng)和效應(yīng)放大系統(tǒng)（符華林，2002），而C3、C4為補(bǔ)體系統(tǒng)中固有的成分，在機(jī)體防御過(guò)程中可通過(guò)免疫復(fù)合物、調(diào)理吞噬細(xì)胞等機(jī)制對(duì)病原微生物進(jìn)行清除及活化炎性細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷作用（崔保安等，2003；王英超等，1998）。 研究表明，以添加復(fù)方中草藥（麻黃、苦參、黃岑、五倍子等）的飼料飼喂黃顙魚(yú)，可顯著提高其血清中補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4的含量 （盛竹梅等，2012）。李華等（2013）用富含復(fù)方中草藥（牛膝、板藍(lán)根、甘草、陳皮、肉桂、麥芽、神曲）的飼料飼喂大鱗鲆，發(fā)現(xiàn)4%的中草藥處理組大鱗鲆血清中補(bǔ)體C3含量持續(xù)上升。與以上研究結(jié)果相同，本試驗(yàn)在飼料中添加黨參、黃芪、野菊花，同樣可以使黃顙魚(yú)血清中補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4的含量得到提升，進(jìn)而提升黃顙魚(yú)免疫力。最適中草藥添加量有差異，可能是由于中草藥種類不同，富含活性物質(zhì)不同造成的。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，中草藥添加量為0.4%時(shí)，試驗(yàn)組黃顙魚(yú)生長(zhǎng)特性最好，肌肉滴水損失率和蒸煮損失率最低。在21 d中草藥添加量為0.2%與0.4%時(shí)，試驗(yàn)組黃顙魚(yú)血清中補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4含量顯著升高。綜合生長(zhǎng)、肉質(zhì)及免疫指標(biāo)來(lái)看，黃顙魚(yú)最適復(fù)方中草藥添加量為0.4%，最佳給藥時(shí)間為21 d。