MUC6基因多態性與非賁門胃癌的發病風險關聯

高 芳 秦金東 馬立聰 劉得利 李晶晶 賈彥彬

(包頭醫學院，內蒙古 包頭 014060)

目前，全球范圍內胃癌的發病率仍高居惡性腫瘤第5位〔1〕，死亡率位居第3位〔2〕；并存在明顯的地區差異和城鄉差別現象〔3，4〕，其中高的死亡率就包括中西部地區。同時胃癌在不同部位的發生趨勢也產生了變化：非賁門胃癌的發病率逐年上升〔5，6〕，而其流行病學和發病機制尚不清楚。胃癌是復雜的多基因疾病，即使在胃癌高風險人群中，也僅有一小部分人發病；提示在胃癌的發病過程中，個體自身的遺傳因素起非常重要的作用〔7〕。MUC6是正常胃黏液中的一種分泌性黏蛋白，與黏蛋白MUC1、MUC2、MUC5等共同組成生理性屏障，保護胃黏膜。而當機體出現異常時，MUC6基因編碼的黏蛋白在胃癌組織中異常表達，調節胃癌細胞生長等〔8〕；且MUC6基因在胃癌發生過程中異常變化〔9～11〕。因此，MUC6基因是胃癌易感性研究的一個十分重要的候選基因。本研究通過病例對照關聯研究的方法，觀察內蒙古中西部地區包頭漢族人群中 MUC6基因rs10794282、 rs10794279、 rs11246386、 rs10751638、 rs11826309、 rs10794359位點多態性，探討其與非賁門胃癌發病風險的關聯。

1 材料與方法

1.1研究樣本〔12〕2008年9月至2010年6月包頭市腫瘤醫院，經病理學診斷為非賁門胃癌病例288例為病例組；其中男224例，女64例，年齡26～83歲，平均(59.48±11.23)歲；病人發病時均已在包頭市居住5年以上，排除繼發病例和復發病例，均未接受過化療和放療。來自同期社區的體檢人群281例正常體檢者為對照組，無癌癥病史，也在包頭市居住5年以上。其中男220例，女61例，年齡26～85歲，平均(59.10±11.57)歲。樣本均為漢族。兩組年齡和性別比較差異無統計學意義(均P>0.05)。

1.2標記單核苷酸多態性(Tag-SNPs)的篩選 使用Agorithm-Tagger-pairwise Tagging軟件進行篩選，其中參數MAF> 5%、r2 > 0.8。選擇MUC6基因5′ 側翼區、3′ 側翼區和外顯子進行篩選，最終初步篩選出6個SNPs進行研究。

1.3基因分型 運用酚/氯仿提取外周血白細胞中的DNA。 用熒光探針(TaqMan)法對6個SNP進行基因分型，操作按照生產廠商的說明進行(美國加州福斯特城應用生物技術公司)。基因分型在北京諾賽基因組有限公司完成。并設陰性對照和陽性對照，且隨機挑取5%的樣本進行重復基因型檢測，與之前的結果完全一致。

1.4統計分析 采用SPSS13.0統計軟件進行χ2檢驗來檢測基因型分布是否符合遺傳平衡定律(Hardy-Weinberg)； 采用Haploview軟件構建單體型。 用非條件性 Logistic回歸計算比值比(OR值)及其95%可信區間(CI)，評判各等位基因、基因型及單體型與非賁門胃癌的發病風險是否存在關聯。

2 結 果

2.1MUC6基因6個SNP位點等位基因與非賁門胃癌發病風險的關系 對照組SNP rs10794282、rs10794279、rs11246386、rs10751638、rs11826309、rs10794359的基因型頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。兩組MUC6基因SNP rs11246386的等位基因頻率分布差異有統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2MUC6基因6個SNP位點基因型與非賁門胃癌發病風險的關系 兩組MUC6基因的SNP rs11246386的基因型頻率分布差異有統計學意義(P<0.05)，對胃癌的發生有保護作用，見表2。

2.3MUC6基因的單體型與非賁門胃癌發生的關系 對MUC6基因不同位點進行連鎖不平衡分析，顯示rs10794359-rs11826309(模塊1)之間存在強連鎖不平衡，構成單體型區域。但各單體型在兩組中的分布差異無統計學意義(均P>0.05)，見表3。

表1 各SNP位點等位基因與胃癌的關聯分析〔n(%)〕

1)數據缺失；2)調整了性別和年齡因素；下表同

表2 各SNP位點基因型與非賁門胃癌的關聯分析

續表2 各SNP位點基因型與非賁門胃癌的關聯分析

表3 MUC6基因單體型與胃癌的關系(%)

3 討 論

2015年中國胃癌新發病例約為67.9萬例，胃癌死亡病例約為49.8萬例〔3〕，死亡率為73.3%，形勢嚴峻，仍是嚴重危害中國居民健康的主要疾病〔13〕。 在我國，超過90%的胃癌患者發現時已是中晚期，因此進一步深入研究我國胃癌的發病原因〔14〕，重視胃癌篩查工作〔3〕，重點預測胃癌的患病風險基因，早期做出診斷并及時干預，對提高患者預后具有重要意義〔15〕。胃癌包括賁門癌和非賁門癌，賁門癌在流行病學特征、病因及分子生物學特征等方面更接近食管癌；為了保證臨床標本的均質性，我們把研究對象限定為非賁門胃癌患者〔9〕。MUC6是一種黏蛋白基因，定位于染色體11p15.5〔16〕，這一區域在胃癌中經常顯示雜合性丟失〔17〕。此外，幽門螺旋桿菌(H.pylori)引發的慢性炎癥與胃癌的發生和發展關聯密切〔18，19〕。汪榮泉等〔20〕研究發現，胃癌患者H.pylori 感染后，導致其癌旁胃黏膜組織中的MUC6黏蛋白明顯地表達降低，提示破壞胃黏膜的保護屏障。本研究發現： rs11246386位點與胃癌易感性相關：攜帶T等位基因者罹患胃癌的風險降低； CT和TT基因型對非賁門胃癌有保護作用。 Jia等〔21〕研究顯示， 在高加索人群中，標記的 MUC6基因14個不同的 SNPs和胃癌的發生沒有關聯，同樣Marín等〔22〕研究發現，在西班牙人群中采用 Tag-SNPs的篩選的6個 SNPs與胃癌的發生均無關聯； 這與本研究不太一致，這種結果的差異可能與樣本量的大小和遺傳亞結構、環境因素有關，亦可能與人種、地域差異有關〔9〕。 總之，關于MUC6基因多態性與非賁門胃癌發病風險的確切關系還需進一步擴大樣本量、篩查MUC6基因的其他SNPs來研究證實。