絕經后女性2型糖尿病患者的DKK1蛋白表達水平及其臨床意義*

徐海洋，周瓊，李軍，李思源，孫侃，常向云，王曉麗，胡穎

（1.石河子大學醫學院第一附屬醫院 內分泌代謝科，新疆 石河子 832000；2.新疆第二師二十九團醫院 新疆 庫爾勒市841000；3.石河子大學醫學院，新疆 石河子 832000；4.新疆醫科大學第四附屬醫院，新疆 烏魯木齊 830000）

2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus, T2DM）是一種遺傳和環境因素共同作用而形成的多基因遺傳性疾病，主要在基因缺陷的基礎上存在胰島素抵抗（insulin resistance,IR）和胰島素分泌障礙[1]。LIU等[2]研究表明Wnt信號通路異常可能與器官纖維化、代謝綜合征、骨相關疾病及腫瘤等多種疾病的發生密切相關。DKK1蛋白是Wnt信號通路拮抗劑，可抑制信號的傳導，導致Wnt信號通路異常。Wnt信號通路中DKK1在絕經后女性體內的表達水平乃至在絕經后T2DM女性體內的表達水平都鮮有報道。本文通過觀察Wnt信號通路中DKK1蛋白在絕經后T2DM女性患者體內的表達并分析其與IR及胰島β細胞功能的關系，為絕經后女性T2DM的臨床防治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年10月-2017年10月于石河子大學第一附屬醫院和新疆維吾爾自治區石河子市第十五社區衛生服務中心住院的絕經后女性患者作為研究對象，行OGTT試驗后分為T2DM組和糖耐量正常（normal glucose tolerance,NGT）組。其中T2DM組患者50例，平均年齡（65.40±4.60）歲；NGT組患者50例，平均年齡（66.66±5.84）歲。納入標準：①T2DM的診斷符合1999年世界衛生組織制定的糖尿病診斷準則；②意識清楚，語言表達能力正常。排除標準：①1型糖尿病、自身免疫性疾病；②嚴重肝腎功能異常、嚴重心腦血管疾患、腫瘤、風濕免疫病及血液病等。患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料及常規生化指標測定 按統一標準對患者進行臨床資料的測量，包括年齡、身高、體重、收縮壓（systolic blood pressure, SBP）及舒張壓（diastolic blood pressure, DBP）；計算BMI=體重（kg）/[身高（m）]2；全自動生化分析儀(日本日立株式會社，型號：7071型)測定空腹血糖（fasting plasma glucose, FPG）、果糖胺（Froctosamine, FMN）、膽固醇（total cholesterol,TC）、三酰甘油（Triglyceride, TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein-C, LDL-C）及高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein-C, HDL-C）等生化指標；D10全自動糖化血紅蛋白測定儀用高壓液相色譜法（美國伯樂公司）測定糖化血紅蛋白（hemoglobin a1c, HbA1c）。

1.2.2 IR及胰島β細胞功能測定及計算 全自動電化學發光分析儀（德國羅氏公司，型號：E710型）測定空腹胰島素（fasting insulin, FINS）、空腹C肽（fasting C-peptide, FCP）；胰島素敏感指數（insulin sensitivity index, ISI）=1/FPG（mmol/L）×FINS（mIU/L）[3]；胰島素抵抗指數（insulin resistance index, HOMA-IR）=FPG（mmol/L）×FINS（mIU/L）/22.5；胰島素β細胞 功 能（insulin βcell function index, HOMA-β）=20×FINS（mIU/L）/[FPG（mmol/L）-3.5]（%）[4]。

1.2.3 DKK1蛋白測定 按照試劑盒說明書進行操作，采用雙抗體夾心ELISA法測定DKK1蛋白，試劑盒購于廣東伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.3 統計學方法

數據分析采用SPSS 20.0統計學軟件，計量資料以均數±標準差（±s）或中位數和四分位間距M（P25，P75）表示，比較用t檢驗或秩和檢驗。相關性分析采用Pearson法或Spearman法，影響因素分析采用逐步回歸分析法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者一般臨床資料比較

兩組患者年齡、SBP、DBP、BMI、TG、LDL-C及HDL-C比較，差異無統計學意義（P＞0.05），說明基線齊，具有可比性；兩組患者FPG、FMN、HbA1c及TC比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 兩組患者IR及胰島β細胞功能比較

兩組患者FCP、HOMA-β、ISI及HOMA-IR比較，差異有統計學意義（P＜0.05），與NGT組相比，T2DM組HOMA-IR水平較高；FCP、ISI及HOMA-β水平降低。見表2。

2.3 兩組患者血清DKK1蛋白比較

NGT 組 DKK1 蛋白水平為（209.37±32.35）pg/ml，T2DM組為（232.97±39.31）pg/ml。兩組患者血清DKK1蛋白比較，差異有統計學意義（t=2.438，P=0.017），T2DM 組較 NGT組高。見附圖。

2.4 DKK1蛋白與IR及胰島β細胞功能指標的相關性

對DKK1蛋白與IR及胰島β細胞功能指標的相關性分析，結果顯示，DKK1蛋白與FCP呈負相關（r=-0.280，P=0.022），與 HOMA-IR呈正相關（r=0.256，P=0.037）。

表1 兩組患者一般臨床資料比較 （n =50，±s）

表1 兩組患者一般臨床資料比較 （n =50，±s）

FMN/（umol/L，±s）NGT組 66.66±5.84 133.78±13.23 81.22±14.33 25.83±3.74 5.63（4.91，5.99） 239.74±36.54 T2DM組 65.40±4.60 134.08±8.00 78.40±11.69 26.07±2.33 9.36（7.88，10.40） 337.66±87.31 t/Z值 1.199 -0.137 1.055 -0.379 -7.332 -7.315 P值 0.234 0.891 0.294 0.705 0.000 0.000組別 年齡 /（歲，±s）SBP/（mmHg，±s）DBP/（mmHg，±s）BMI/（kg/m2，±s）FPG/[mmol/L，M（P25，P75）]HDL-C/（mmol/L，±s）NGT 組 6.23±0.92 1.78±0.54 4.57±0.75 2.84±0.59 1.18±0.34 T2DM 組 8.70±1.76 1.99±0.58 5.01±0.98 3.08±0.83 1.21±0.31 t/Z值 -8.814 -1.873 -2.507 -1.703 -0.409 P值 0.000 0.064 0.014 0.092 0.683組別HbA1c/（%，±s）TG/（mmol/L，±s）TC/（mmol/L，±s）LDL-C/（mmol/L，±s）

表2 兩組患者IR及胰島β細胞功能比較 （n =50）

附圖 兩組患者血清DKK1蛋白水平比較 （n =50，±s）

2.5 多元線性逐步回歸分析

以FCP為應變量，以年齡、SBP、DBP、BMI、FPG、FMN、TG、TC、LDL-C、HDL-C 及 DKK1為自變量，進行多元線性逐步回歸分析，結果顯示FPG、FMN及DKK1是FCP的影響因素（P＜0.05）。以HOMA-IR為應變量，以年齡、SBP、DBP、BMI、FPG、FMN、TG、TC、LDL-C、HDL-C及 DKK1為自變量，進行多元線性逐步回歸分析，結果顯示FPG、DKK1是 HOMA-IR 的影響因素（P＜0.05）。見表 3、4。

表3 以FCP為應變量的多元線性回歸分析

表4 以HOMA-IR為應變量的多元線性回歸分析

3 討論

T2DM作為多基因、多因素且具有高度的遺傳異質性的全身性疾病，可損害機體眾多器官、組織，其發病機制至今還沒有完全闡明，主要表現為IR和胰島素分泌障礙[5]。我國糖尿病患者數已躍居世界第一，且患病率呈逐年遞增趨勢，其中T2DM占大多數，世界衛生組織預測，到2025年我國T2DM患者將超過1.3億[6]。對T2DM發病機制的進一步進行研究，有利于對該疾病的診治。

多數T2DM患者同時存在嚴重的糖代謝紊亂和明顯的脂代謝紊亂，它們有共同的代謝改變基礎——IR[7]。IR的發生涉及多個信號通路，是一種多位點、多層次胰島素信號共同作用異常的狀態[8]。近年研究發現，Wnt信號通路參與調節胰島β細胞的形態及功能，影響胰腺細胞功能，調節胰島素分泌[9]。異常的Wnt信號通路與IR和T2DM的發生發展密切相關[10-11]。DKK1蛋白作為Wnt信號通路中的抑制蛋白可抑制Wnt信號的激活。

本研究結果顯示，與NGT組相比，T2DM組FPG、FMN、HbA1c及TC水平較高，存在著明顯的糖代謝及脂代謝紊亂，與張臻等報道一致，并且絕經后女性T2DM組HOMA-IR水平增高，FCP水平、ISI水平、HOMA-β水平降低，表明絕經后女性T2DM患者存在著IR和胰島素分泌功能障礙[12]。本研究還發現，絕經后女性T2DM組與NGT組相比，T2DM組DKK1蛋白表達水平較高，在絕經后女性中，DKK1蛋白表達水平與FCP呈負相關，與HOMA-IR呈正相關。多因素回歸分析表明DKK1蛋白是影響FPG、HOMA-IR的因素，隨著DKK1蛋白表達水平的提高，FPG水平降低，HOMAIR水平增高，說明絕經后女性T2DM患者DKK1蛋白的高表達可能與IR及胰島β細胞分泌功能障礙密切相關。孫婧等[13]研究發現，胰島素信號的傳導及調控與Wnt信號通路及其信號傳導通路的多個信號分子密切相關。DKK1蛋白異常高表達可能抑制了經典Wnt信號通路的激活，導致Wnt信號通路代謝異常，進而對絕經后女性T2DM患者IR及胰島β細胞分泌功能障礙產生了影響。但是DKK1蛋白在體內調控機制、細胞內信號通路及其在糖尿病中的作用機制有待進一步研究。

綜上所述，絕經后女性T2DM患者體內DKK1蛋白的高表達可能參與患者IR及胰島β細胞功能減退的發生發展過程，進而導致患者T2DM的糖代謝及脂代謝紊亂。以其為靶點，有利于絕經后女性T2DM發病的研究，為糖尿病的防治提供依據。