苯職業暴露者的血小板功能變化研究

高燕華 張艷芳 王佃鵬 李培茂 張志敏

苯作為一種有機溶劑,是工業常見原料。低劑量接觸苯者在長期累積后很可能發展為苯中毒患者［1］。目前,苯中毒的主要生物學監測指標為外周血白細胞計數、分類及血小板計數。一些有苯職業暴露史的患者外周血白細胞和血小板數量基本正常,相關凝血功能檢測結果也在正常范圍之內,卻發生出血現象或嚴重的出血傾向,表明此時的血小板功能很有可能受到損害［2］。作者前期研究了正常人群、苯暴露人群和慢性苯中毒人群的血小板形態,發現苯職業暴露進程中血小板形態方面的一些指標已經發生變化［3］,而目前尚未見對苯職業暴露者血小板功能方面研究的報道。CD62p、CD63、PAC-1均被認為是特異性血小板活化功能標志物［4］,因此,本文對苯職業暴露不同時間的人員和早期苯中毒者和血小板的CD62p、CD63、PAC-1以及RP進行觀察研究,了解苯職業暴露后人體血小板功能的變化過程,從而探討苯對血小板功能的影響機制。報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2017年1～10月本院慢性苯中毒患者25例(苯中毒組)、苯職業暴露者25例(苯連續接觸時間＞3個月)(苯暴露組)與健康成人29例(健康組)作為研究對象。苯中毒患者符合《職業性苯中毒的診斷》(GBZ 68-2013)中的診斷標準。

1. 2 儀器設備和試劑 BD FACS calibur流式細胞儀 ,Sysmex XE-5000全自動血細胞分析儀,路科順KST340臺式離心機。使 用 BD公 司 的 CD62p-FITC、CD63-PE、PAC-1-FITC；Sysmex公司的鞘液和清洗液、溶血素、網織紅細胞熒光染色液。

1. 3 檢測方法 熒光染色結合流式細胞術檢測RP、CD62p、CD63和PAC-1。RP的檢測：上午采集空腹狀態受檢者1 ml EDTA抗凝靜脈血,在2 h內使用全自動血液分析儀檢測。CD62p、CD63和PAC-1檢測：采集1 ml枸櫞酸鈉抗凝血,2 h內混勻后分別取10 μl樣品至3個試管中(其中1管為對照 ),其中一管加 20 μl CD62p-FITC、CD63-PE 檢測試劑 ,另一管加 20 μl PAC-1-FITC 檢測試劑 ,然后每管加 100 μl PBS(pH7.2～7.4 磷酸鹽緩沖液 ),室溫 (20～30℃ )避光孵育 20 min,加 1.5 ml PBS 混勻后 1200 r/min 離心 5 min,棄上清 ,加 500 μl PBS搖勻使用流式細胞儀檢測。

1. 4 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件進行統計分析。呈正態分布計量資料以均數±標準差()表示,單因素檢測數據的比較應用獨立樣本t檢驗；多組檢測數據之間的比較應用單因素方差分析和Kruskal-Wallis檢驗；兩兩比較根據數據分布和方差情況應用LSD、dunnett’s T3檢驗和Mann-Whitney檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 健康組不同性別血小板指標比較 健康組男女之間的RP、CD62p、CD63和PAC-1檢測結果比較,差異均無統計學意義 (P＞0.05)。見表 1。

2. 2 三組血小板指標比較 三組RP檢測結果比較,差異無統計學意義 (P＞0.05)；三組 CD62p、CD63、PAC-1檢測結果比較,差異具有統計學意義(P＜0.05)。苯中毒組CD62p(56.41±19.35)%高于健康組的(41.22±10.99)%及苯暴露組(39.78±8.20)%,CD63(7.63±5.04)% 低于健康組的 (16.73±10.67)%及苯暴露組的(19.96±8.58)%,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。苯中毒組與健康組PAC-1檢測比較,差異具有統計學意義(P＜0.05)。苯暴露組與健康組的CD62p、CD63、PAC-1檢測結果比較,差異均無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

2. 3 苯暴露組(苯接觸時間≥24 個月)與健康組血小板指標比較 苯暴露組(苯接觸時間≥24 個月)與健康組的血小板RP、CD62p、CD63和PAC-1檢測結果比較,差異均無統計學意義(P＞0.05)。見表3。

表1 健康組不同性別血小板指標比較( ,%)

表1 健康組不同性別血小板指標比較( ,%)

注：與女性比較,aP＞0.05；PAC-1數據不是正態分布,數據表示為M(極小值,極大值)

12 2.55±1.41a 43.88±11.38a 19.05±7.88a 3.8(0.24,24.42)a女17 2.85±1.91 40.64±10.06 16.12±11.92 4.62(0.75,32.76)t/Z -0.462 0.809 0.743 -0.24 P 0.666 0.437 0.478 0.981性別 例數 RP CD62p CD63 PAC-1男

表2 三組血小板指標比較 ( ,%)

表2 三組血小板指標比較 ( ,%)

注 ：與健康組比較 ,aP＜0.05,bP＜0.01 ；與苯暴露組比較 ,cP＜0.01 ；PAC-1 數據不是正態分布 ,數據表示為 M(極小值 ,極大值 )

組別 例數 RP CD62p CD63 PAC-1健康組 29 2.70±1.68 41.22±10.99 16.73±10.67 4.6(0.24,32.76)苯暴露組 25 3.08±1.99 39.78±8.20 19.96±8.58 7.66(0.64,42.02)苯中毒組 25 3.42±1.36 56.41±19.35bc 7.63±5.04bc 1.73(0.84,27.36)a F/χ2 1.217 14.072 4.404 8.267 P＞0.05 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.05

表3 苯暴露組(苯接觸時間≥24 個月)與健康組血小板指標比較( ,%)

表3 苯暴露組(苯接觸時間≥24 個月)與健康組血小板指標比較( ,%)

注：與健康組比較,aP＞0.05；PAC-1數據不是正態分布,數據表示為M(極小值,極大值)

組別 例數 RP CD62p CD63 PAC-1健康組 29 2.70±1.68 41.22±10.99 16.73±10.67 4.6(0.24,32.76)苯暴露組 14 3.42±1.36a 39.69±8.06a 20.66±9.53a 3.71(1.06,42.02)a

3 討論

本次研究發現,血小板相關指標RP、CD62p、CD63和PAC-1在健康成人,男女之間檢測結果比較,差異均無統計學意義(P＞0.05)。苯中毒組的血小板CD62p、CD63、PAC-1與健康組比較 ,差異具有統計學意義 (P＜0.05),CD62p 升高 ,而CD63、PAC-1下降,說明苯職業中毒者血小板的功能標志物CD62p、CD63、PAC-1表達情況有明顯的變化,苯對血小板的功能有影響,進而影響到了苯中毒者的止血功能,與實際情況中苯中毒者的出血傾向增加相符［5-7］。但RP與健康組比較,差異無統計學意義(P＞0.05),說明該指標對苯中毒輔助診斷沒有意義。而接觸苯＞3個月的苯職業暴露者,甚至達到24個月的苯暴露者與健康組比較,其RP、CD62p、CD63和PAC-1檢測結果差異均無統計學意義(P＞0.05)。

此前研究發現,正常人群、苯職業暴露人群和慢性苯中毒人群的血小板計數、血小板分布寬度、血小板平均體積、大血小板比率等參數之間有顯著性差異［3］,說明苯職業暴露進程中血小板形態發生變化早于其血小板的功能,慢性苯中毒人群發病前其血小板形態通常已經發生變化,之后其血小板的功能也會發生改變［8,9］。

綜上所述,CD62p、CD63、PAC-1可以作為慢性苯中毒診斷的輔助指標,但苯對人體內血小板功能標志物CD62p、CD63、PAC-1影響敏感性不高。后續可對苯接觸劑量和接觸時間的苯暴露人群中PLT CD62p、CD63、PAC-1以及血小板其他功能指標進行研究,進一步研究苯對血小板功能影響的機制。