N-Cadherin、sCD40水平變化與多發(fā)性骨髓瘤患者臨床分期的關聯(lián)性分析

賈新勇，郭改玲，王秋平，申燕

(漯河醫(yī)學高等專科學校第二附屬醫(yī)院檢驗科，河南 漯河462300)

多發(fā)性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）是惡性漿細胞病的一種常見類型，該病起病緩慢、病情隱匿，且骨髓瘤細胞增生程度、浸潤程度及部位不同，致使臨床表現(xiàn)復雜，缺乏特異性。MM不同臨床分期預后不同，治療方案的選擇及實施亦有差異，故對MM進行準確的臨床分期，可為治療方案的制定提供客觀依據(jù)，對改善患者預后極其重要。近年隨臨床對MM研究深入發(fā)現(xiàn)，骨髓微環(huán)境與細胞因子在其發(fā)病及進展中均有重要參與[1，2]。神經(jīng)鈣黏素（N-Cadherin）是鈣黏附分子家族中的一員，其介導的細胞與細胞間黏附調(diào)節(jié)著細胞行為，故研究發(fā)現(xiàn)N-Cadherin可通過介導成骨細胞及骨髓瘤細胞相互黏附而對成骨細胞分化產(chǎn)生抑制作用，最終導致骨質(zhì)疏松，參與骨髓瘤黏附、遷移、定居[3]。白細胞分化抗原40（CD40）為腫瘤壞死因子受體超家族Ⅰ型跨膜蛋白，其與表達在CD4+T細胞上的配體結合后可發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，同時參與炎癥反應等生理病理過程，且研究發(fā)現(xiàn)MM患者血清可溶性白細胞分化抗原40（sCD40）呈異常表達狀態(tài)[4]。本研究選取我院79例MM患者，以探討N-Cadherin及血清sCD40與其臨床分期的相關性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年8月-2017年9月我院收治的79例MM患者設為觀察組，均符合《中國多發(fā)性骨髓瘤工作組.中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南(2013年修訂)》中MM診斷標準[5]，其中男35例，女 44 例，年齡 36～67 歲，平均（50.22±10.43）歲；ISS臨床分期[6]：Ⅰ期22例，Ⅱ期29例，Ⅲ期28例。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核同意，且入組對象均知情同意；排除妊娠期或哺乳期女性、合并自身免疫性疾病或其他惡性腫瘤疾病。

1.2 方法

1.2.1 N-Cadherin表達 穿刺抽取0.2ml骨髓液樣本，注入肝素抗凝管內(nèi)，取50μl骨髓液置入流式試管，同時加入單克隆抗體，避光環(huán)境下放置20min，再于試管內(nèi)加入1ml紅細胞裂解液，室溫下放置10min；離心（1000r/min，5min）后舍棄上清液，并于試管中注入1.5ml 0.9%氯化鈉溶液，再離心（1000r/min，5min）棄去上清液；試管內(nèi)加入 500μl 0.9%氯化鈉溶液，上機待檢，儀器為Epics XL型流式細胞儀（美國Beckman Coulter公司），以CD45/SSC設門法直接檢測，計算N-Cadherin（CD325）陽性細胞在CD38+/CD138+細胞中比例。

1.2.2 血清sCD40水平 抽取空腹狀態(tài)下肘靜脈血 3ml，離心（3000r/min，10min）后上層血清液立即送檢或-70℃凍存待檢；以酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清sCD40水平，儀器為Bio-Rad iMark酶標儀（美國Bio-Rad公司），試劑盒購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司，具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 觀察指標 ⑴對比MM不同臨床分期之間NCadherin表達及血清sCD40水平，分析N-Cadherin表達及血清sCD40水平與MM臨床分期的相關性；⑵根據(jù)不同臨床分期選擇手術、化療、放療等方案進行治療，根據(jù)預后情況分為預后良好組（n=53）及預后不良組（n=26），治療有效、疾病轉歸或病情穩(wěn)定為預后良好，治療無效、疾病進展為預后不良。

1.4 統(tǒng)計學方法 以SPSS 18.0軟件統(tǒng)計分析，計量資料（±s）表示，t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗，采用Spearman進行相關性分析，計數(shù)資料 n（%）表示，χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不同臨床分期N-Cadherin表達及血清sCD40水平 MM不同臨床分期N-Cadherin表達無顯著差異（P＞0.05），血清 sCD40水平隨臨床分期增加呈增高趨勢，兩兩比較差異具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05），見表 1。

表1 不同臨床分期N-Cadherin表達及血清sCD40水平比較（±s）

表1 不同臨床分期N-Cadherin表達及血清sCD40水平比較（±s）

臨床分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期F值P值例數(shù) N-Cadherin（%） sCD40（pg/ml）22 29 28/ /10.72±2.18 11.54±1.19 11.17±1.63 5.514 0.227 236.21±36.24 416.22±62.25 651.46±83.16 256.04 0.000

2.2 N-Cadherin表達及血清sCD40水平與MM臨床分期的關聯(lián)性 N-Cadherin表達與MM臨床分期無明顯相關性（P＞0.05），血清sCD40水平與MM床分期呈明顯正相關（P＜0.05），見表 2。

表2 N-Cadherin表達及血清sCD40水平與MM臨床分期的關聯(lián)性（n=79）

2.3 不同預后治療前后N-Cadherin表達及血清sCD40水平 治療前，預后良好組N-Cadherin表達與預后不良組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），血清sCD40水平低于預后不良組（P＜0.05）；治療后，預后良好組N-Cadherin表達及血清sCD40水平較治療前顯著下降（P＜0.05），預后不良組N-Cadherin表達及血清sCD40水平較治療前無顯著差異（P＞0.05），見表 3。

表3 不同預后治療前后N-Cadherin表達及血清sCD40水平比較（±s）

表3 不同預后治療前后N-Cadherin表達及血清sCD40水平比較（±s）

注：與本組治療前比較，*P＜0.05。

預后 例數(shù)N-Cadherin（%） sCD40（pg/ml）預后良好組預后不良組t值P值53 26/ /治療前11.09±1.35 11.52±1.27 1.356 0.179治療后 治療前 治療后6.35±1.04*10.89±1.25 17.043 0.000 414.25±53.63 574.69±62.22 10.305 0.000 285.31±20.14*565.71±65.87 29.636 0.000

3 討論

MM是血液系統(tǒng)常見腫瘤疾病，由于其治療方案的制定與實施主要由臨床分期決定，故早期診斷并進行準確的臨床分期對指導臨床治療、促進患者預后改善至關重要[7]。目前，MM發(fā)病機制尚不清楚，可能與細胞內(nèi)信號通路傳導異常、骨髓微環(huán)境異常等因素有關，因此對MM診斷及臨床分期可從此方向切入研究。

MM患者多伴有骨質(zhì)破壞，且研究證實骨髓瘤病主要由成骨細胞及破骨細胞功能失調(diào)所致[8，9]。動物學試驗則發(fā)現(xiàn)，N-Cadherin可表達于成骨細胞，且其過度表達會抑制成骨細胞分化，而在沉默N-Cadherin表達后，可顯著削弱其對骨細胞標志物生成的抑制作用[10]。上述間接提示N-Cadherin可能參與MM發(fā)生。此外，亦有研究指出，在MM微環(huán)境中，表達于骨髓瘤細胞與基質(zhì)細胞的NCadherin可介導二者相互作用，以維持MM干細胞靜息狀態(tài)，誘導疾病復發(fā)[11-13]。細胞因子網(wǎng)絡對骨髓瘤細胞生長、發(fā)育有調(diào)節(jié)作用，腫瘤壞死因子-α可誘導骨髓瘤細胞產(chǎn)生白介素-6，并與白介素-6形成細胞因子網(wǎng)絡，以發(fā)揮生物學效應。研究發(fā)現(xiàn)，骨髓瘤細胞中CD40及其配體共表達對白介素-6分泌及調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子-α功能具有重要作用，提示CD40參與亦有可能參與MM發(fā)病過程[14-16]。本研究中，觀察組N-Cadherin表達及血清sCD40水平較高，證實N-Cadherin及sCD40在MM發(fā)病中有重要參與作用。研究結果還顯示，NCadherin表達與MM臨床分期無明顯相關性 （P＞0.05），而血清sCD40水平隨臨床分期增加而上升，呈明顯正相關（P＜0.05），提示 N-Cadherin 過度表達雖參與了MM的發(fā)生，但不隨臨床分期而變化，血清sCD40水平則可用于MM臨床分期的診斷與評估。此外，由于預后不良患者多為Ⅲ期患者，且N-Cadherin表達與臨床分期無明顯關聯(lián)性，而血清sCD40水平則與臨床分期密切相關，故治療前不同預后MM患者N-Cadherin表達無差異，血清sCD40水平有差異。此外，治療后預后良好組NCadherin表達及血清sCD40水平較治療前降低（P＜0.05），預后不良組則無明顯變化（P＞0.05），提示N-Cadherin及血清sCD40隨疾病轉歸其異常表達有恢復正常的趨勢，故其水平變化預示著MM預后轉歸情況。

綜上，血清sCD40水平隨MM臨床分期增加呈升高趨勢，與臨床分期呈明顯正相關，且可評估預后情況，N-Cadherin表達則與MM臨床分期無明顯相關性，N-Cadherin表達及血清sCD40水平隨預后轉歸而降低，故聯(lián)合檢測可為臨床診斷、疾病分期或預后評估提供客觀依據(jù)。