?26種殺菌劑對(duì)柑橘砂皮病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定?

摘 要：為了篩選出對(duì)柑橘砂皮病有良好防效的殺菌劑，采用生長(zhǎng)速率法比較26種殺菌劑對(duì)柑橘砂皮病菌（Diaporthe citri）的室內(nèi)毒力。測(cè)定結(jié)果表明：26種殺菌劑對(duì)柑橘砂皮病菌的生長(zhǎng)均表現(xiàn)出不同程度的抑制作用。在治療性殺菌劑中，毒力最高的是250 g/L吡唑醚菌酯EC，EC50為0.200 1 mg/L;在保護(hù)性殺菌劑中，毒力最高的是80%代森錳鋅WP，EC50為3.394 6 mg/L。將2種殺菌劑按照一定比例混配，聯(lián)合毒力測(cè)定和評(píng)價(jià)結(jié)果表明兩者以1∶5混配對(duì)抑制柑橘砂皮病菌的生長(zhǎng)增效作用最強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：柑橘砂皮病菌;殺菌劑;毒力測(cè)定;混配

中圖分類號(hào)：S436.661 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-060X（2018）12-0060-03

Toxicity Determination of 26 Fungicides on Diaporthe citri in Laboratory

ZHANG Yue1，XIE Shen-xi2，YI Tu-yong2，HE Ke-jia1

（1. College of Plant Protection， Hunan Agricultural University， Changsha 410128， PRC; 2. College of Horticulture and Landscape，

Hunan Agricultural University， Changsha 410128， PRC）

Abstract： In order to screen out the fungicides with good prevention and control effects on Diaporthe citri， the toxicity of 26 fungicides against Diaporthe citri in laboratory was measured by means of mycelium growth rate method. According to the results， the 26 fungicides show different degrees of inhibition on the growth of Diaporthe citri. Among the curative fungicides， the one of the highest virulence is 250 g/L Pyraclostrobin EC， with EC50 of 0.2001 mg/L; among the protective ones， 80% Mancozeb WP is the most virulent， with EC50 of 3.3946 mg/L. Mixing the two fungicides in a certain proportion， the test and evaluation of combined toxicity show that at the mixing ratio of 1：5， the strongest synergistic inhibiting effect on the growth of Diaporthe citri can be obtained.

Key words： Diaporthe citri; fungicides; determination of toxicity; mixing

柑橘砂皮病是柑橘樹脂病的一種，其發(fā)生在幼果和葉片上稱為砂皮病[1]。該病病原有性態(tài)為柑橘間座菌（Diaporthe medusaea），無(wú)性態(tài)為柑橘擬莖點(diǎn)霉菌 （Phomopsis citri），為弱寄生菌[2]。其在樹勢(shì)強(qiáng)健的情況下不易發(fā)病，只有在樹勢(shì)衰退時(shí)才易誘發(fā)該病[3]。病菌在冬季氣溫低時(shí)侵入柑橘樹，而后在感病的樹皮、枯枝內(nèi)越冬[4]。低溫凍害也是誘發(fā)該病的主要原因，凍害后若樹勢(shì)不能正常恢復(fù)，則容易加劇該病的暴發(fā)[5]。

柑橘砂皮病是我國(guó)柑橘產(chǎn)區(qū)主要的病害之一，且危害情況呈逐年上升趨勢(shì)。感病果實(shí)長(zhǎng)滿黑色小點(diǎn)，嚴(yán)重影響了柑橘的品質(zhì)和外觀，造成柑橘大量減產(chǎn)。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)柑橘砂皮病的防治措施研究較少，生產(chǎn)上也并沒有出現(xiàn)抗性品種，化學(xué)防治仍然是當(dāng)前控制病害的主要手段。因此，篩選出高效的殺菌劑或殺菌劑組合是當(dāng)務(wù)之急，對(duì)柑橘砂皮病的防治具有重要意義。

筆者選用了26種殺菌劑，采用生長(zhǎng)速率抑制法對(duì)柑橘砂皮病菌進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定，并測(cè)定了吡唑醚菌酯TC和代森錳鋅TC 2種殺菌劑不同比例混配的抑菌效果，為以后的柑橘砂皮病田間防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌種來源

供試菌株為柑橘砂皮病菌，由湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院植物病理系實(shí)驗(yàn)室提供。試驗(yàn)前將菌株在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上進(jìn)行活化。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

SW-CJ-1D型單人凈化工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司產(chǎn)品），MJP-250D型霉菌培養(yǎng)箱（上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）以及電子天平、移液槍、量筒、玻璃棒、容量瓶、培養(yǎng)皿、接種針、打孔器、封口膜、直尺、鉛筆等。

1.3 供試藥劑

供試藥劑見表1（劑型代碼：可濕性粉劑為WP，水分散粒劑為WDG，水乳劑為EW，懸浮劑為SC，乳油為EC，原藥為TC）。

1.4 試驗(yàn)方法

采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定殺菌劑對(duì)柑橘砂皮病菌的毒力，根據(jù)殺菌劑的性質(zhì)和登記使用劑量參考，用無(wú)菌水配制成不同濃度的藥液，每種殺菌劑設(shè)置5個(gè)濃度梯度。取1 mL藥液（1 mL無(wú)菌水作為對(duì)照）與27 mL PDA培養(yǎng)基混合均勻制成含藥平板，再平均倒入5個(gè)（即5次重復(fù)）直徑為7 cm且無(wú)菌的培養(yǎng)皿中。用直徑5 mm的打孔器在砂皮病菌的菌落上打取帶菌培養(yǎng)基柱（菌餅），并用無(wú)菌或消毒的接種針或金屬鑷子將菌餅接入冷凝后的培養(yǎng)平板中央。接種培養(yǎng)皿置于27℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5 d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率，并采用DPS軟件進(jìn)行生物測(cè)定分析，求得不同比例的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)（r）和EC50值。

菌絲生長(zhǎng)抑制率=（對(duì)照組的菌落直徑-處理組的菌落直徑）/對(duì)照組的菌落直徑×100%。

吡唑醚菌酯TC和代森錳鋅TC殺菌劑混配聯(lián)合毒力測(cè)定：根據(jù)單劑毒力測(cè)定結(jié)果，將殺菌劑中毒力最高的吡唑醚菌酯TC和代森錳鋅TC進(jìn)行混配，有效成分配比為1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8、1∶9，每個(gè)配比制成相應(yīng)5個(gè)濃度梯度。計(jì)算混配劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率，并采用DPS軟件進(jìn)行生物測(cè)定分析，求得不同比例的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)（r）和EC50值。采用Wadley法進(jìn)行增效作用評(píng)價(jià)。當(dāng)增效系數(shù)SR>1.5時(shí)為增效作用，0.5≤SR≤1.5為相加作用，SR<0.5為拮抗作用。

式中：A、B分別代表兩種殺菌劑，a、b分別代表2種殺菌劑在混配劑中所占比例，ob為實(shí)際值，th為理論值。

2 結(jié)果與分析

2.1 26種殺菌劑對(duì)柑橘砂皮病菌菌絲生長(zhǎng)的毒力測(cè)定

結(jié)果如表2所示，供試的26種殺菌劑對(duì)柑橘砂皮病菌菌絲生長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用，但各殺菌劑之間存在比較明顯的差異。其中250 g/L吡唑醚菌酯EC、50%吡唑醚菌酯WDG和12%苯甲·氟酰胺SC對(duì)柑橘砂皮病菌菌絲生長(zhǎng)抑制作用較強(qiáng)，EC50都在0.3 mg/L以下。250 g/L吡唑醚菌酯EC對(duì)柑橘砂皮病菌的抑制活性最高，EC50為0.200 1 mg/L。在80%代森錳鋅WP、50%啶酰菌胺WDG和70%丙森鋅WP這3種保護(hù)性殺菌劑中，80%代森錳鋅WP對(duì)柑橘砂皮病菌的抑制作用最高，EC50為3.394 6 mg/L。因此選用吡唑醚菌酯TC和代森錳鋅TC進(jìn)行復(fù)配聯(lián)合毒力測(cè)定。

2.2 吡唑醚菌酯TC和代森錳鋅TC混配聯(lián)合毒力測(cè)定

由表3可知，吡唑醚菌酯TC與代森錳鋅TC以1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8和1∶9的比例混配對(duì)柑橘砂皮病菌的EC50分別為0.122 9、0.155 9、0.124 0、0.092 0、0.084 2、0.107 0、0.124 2、0.141 4、0.130 6 mg/L，各比例均表現(xiàn)出了明顯的抑菌作用。且各比例的EC50均小于吡唑醚菌酯TC單劑和代森錳鋅TC單劑的EC50，表明所有比例的混配劑對(duì)柑橘砂皮病菌的抑制效果明顯強(qiáng)于單劑。從增效系數(shù)（SR）來看，所有比例的SR均大于1.5，都表現(xiàn)為增效作用，其中增效作用最強(qiáng)的為1∶5，增效系數(shù)（SR）為7.629 5，其次為1∶9，增效系數(shù)（SR）為7.036 0。

3 結(jié) 論

菌絲生長(zhǎng)速率抑制法的毒力測(cè)定結(jié)果表明，26種殺菌劑對(duì)柑橘砂皮病菌的EC50由大到小的順序?yàn)椋?50 g/L吡唑醚菌酯EC>50%吡唑醚菌酯WDG>12%苯甲·氟酰胺SC>450 g/L咪鮮胺EW>70%甲基硫菌靈WDG>42.8%氟菌·肟菌酯SC>22%抑霉唑EW>75%多·錳鋅WP>17%唑醚·氟環(huán)唑SC>10%己唑醇SC>18%松脂酸銅EC>27.8%噻呋·己唑醇SC>75%百菌清WDG>4%四氟醚唑EW>50%苯菌靈WP>60%錳鋅·腈菌唑WP>65%代森鋅WP>16%咪鮮·異菌脲SC>430 g/L戊唑醇SC>80%代森錳鋅WP>20%烯肟·戊唑醇SC>40%丁香·戊唑醇SC>325 g/L苯甲·嘧菌酯SC>50%啶酰菌胺WDG>80%克菌丹WDG>70%丙森鋅WP，其中250 g/L吡唑醚菌酯EC對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制作用最強(qiáng)，EC50為0.200 1 mg/L;70%丙森鋅WP對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制作用最弱，EC50為16.181 9 mg/L。在本試驗(yàn)中，對(duì)吡唑醚菌酯TC和代森錳鋅TC進(jìn)行復(fù)配，結(jié)果表明，吡唑醚菌酯TC和代森錳鋅TC以質(zhì)量比為1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8和1∶9復(fù)配時(shí)都表現(xiàn)出增效作用，其中1∶5的增效作用最明顯，增效系數(shù)（SR）為7.629 5。表明二者復(fù)配協(xié)同效果非常好，具有開發(fā)潛力，可作為農(nóng)業(yè)上防治柑橘砂皮病的參考依據(jù)。

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