溶血對(duì)化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法檢測(cè)胰島素與C肽結(jié)果的影響

錢(qián)穎 董學(xué)君

糖尿病是因胰島素分泌和（或）作用缺陷引起的以高血糖為主要特征的一種全身性代謝性疾病。長(zhǎng)期高血糖可導(dǎo)致多臟器損害或衰竭。胰島素與C肽釋放試驗(yàn)、口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（OGTT）在糖尿病診斷分型、胰島素抵抗、低血糖評(píng)估及β細(xì)胞功能評(píng)估中起著重要作用［1-2］。釋放試驗(yàn)與OGTT常同時(shí)進(jìn)行，在相應(yīng)的5個(gè)時(shí)間點(diǎn)各抽一次血，然后根據(jù)五次結(jié)果綜合分析。任何時(shí)間點(diǎn)的結(jié)果均應(yīng)準(zhǔn)確無(wú)誤，錯(cuò)誤結(jié)果會(huì)影響對(duì)胰島素、C肽是否出現(xiàn)峰值以及出現(xiàn)時(shí)間的判斷。準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果是保證臨床診療工作的重要條件，日常工作中，眾多因素會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的可靠性，比較常見(jiàn)的因素是溶血。溶血會(huì)使血清或血漿呈現(xiàn)紅色。當(dāng)血漿或血清游離血紅蛋白濃度＞0.3g/L（18.8μmoL/L）時(shí)，視覺(jué)可檢出粉紅色變化，即判斷為溶血［3］。溶血干擾生化項(xiàng)目檢測(cè)已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道，本文主要分析溶血對(duì)化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法檢測(cè)胰島素和C肽結(jié)果的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2018年3-4月行胰島素、C肽釋放試驗(yàn)的30例患者，其中男3例，女3例；年齡35～80歲，平均55.5歲。

1.2 試劑與儀器 美國(guó)Abbott公司ARCHITECT i2000化學(xué)發(fā)光免疫儀，胰島素與C肽檢測(cè)試劑為雅培公司配套試劑盒；胰島素采用一步法免疫測(cè)定，C肽采用兩步法免疫測(cè)定。真空采血管、一次性采血針由浙江康是醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)。離心機(jī)由安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法 清晨采集每位患者空腹靜脈血1支，該時(shí)間點(diǎn)作為0h。飲入250ml含75g無(wú)水葡萄糖，之后0.5h、1h、2h、3h，各時(shí)間點(diǎn)分別采血1支。每支標(biāo)本血量均約5ml。采血管于室溫靜止放置15min，待血液完全凝固后，3500r/min離心5min。離心后血清呈淡黃色，無(wú)肉眼可見(jiàn)溶血、黃疸及脂濁。每位患者五支血集齊后同時(shí)上機(jī)檢測(cè)。標(biāo)本檢測(cè)后馬上用吸管吹打攪拌紅細(xì)胞20次，人為溶血。3500r/min離心5min，肉眼可見(jiàn)溶血，血清呈淡紅色。溶血后血清中血紅蛋白濃度＜5g/L。立即上機(jī)檢測(cè)。30例標(biāo)本溶血前后，均按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程檢測(cè)胰島素與C肽，記錄結(jié)果。檢測(cè)時(shí)儀器運(yùn)行正常，室內(nèi)質(zhì)量控制在控，環(huán)境濕度、溫度適宜。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS l7.0統(tǒng)計(jì)軟件。經(jīng)正態(tài)分布檢驗(yàn)，胰島素與C肽檢測(cè)結(jié)果均呈偏態(tài)分布，結(jié)果用中位數(shù)（四分位數(shù)）［M（P25～P75）］表示；組間比較用Wilcoxon符號(hào)秩和檢驗(yàn)；率的比較采用χ2檢驗(yàn)。所有檢驗(yàn)均選用雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。按以下公式評(píng)價(jià)溶血對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響：｜F｜=（X0-X）/X0×100%。式中：｜F｜為溶血引起的改變；X0為溶血前血清待測(cè)物濃度；X為溶血血清待測(cè)物濃度。若｜F｜＞10%，表示存在明顯的溶血干擾［4］。

2 結(jié)果

標(biāo)本溶血可降低血清胰島素和C肽的檢測(cè)結(jié)果。本資料結(jié)果顯示，30例標(biāo)本（100%）溶血后血清胰島素水平均低于溶血前（下降幅度為1.1%～45.4%），23例標(biāo)本（76.7%）溶血后血清C肽水平低于溶血前（下降幅度為0.3%～12.8%）。其中15例標(biāo)本（50%）胰島素的降低幅度＞10%，1例標(biāo)本（3.3%）C肽的降低幅度＞10%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。30例標(biāo)本血清胰島素的檢測(cè)濃度為76.65（47.30～409.60）pmol/L，溶血后胰島素的檢測(cè)濃度為72.85（42.075～269.175）pmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-4.783，P＜0.01）。30例標(biāo)本血清C肽的檢測(cè)濃度為908.5（585.25～2374.25）pmol/L，溶血后C肽的檢測(cè)濃度為885.5（591.75～2378.25）pmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.952，P=0.003）

3 討論

胰島素是一種多肽類(lèi)激素，由α、β兩條肽鏈構(gòu)成，兩條肽鏈之間由兩個(gè)二硫鍵連接。胰島素在胰島β細(xì)胞功能評(píng)估中起著重要作用。C肽是由31個(gè)氨基酸組成的單鏈多肽，在胰島素前體分子（即胰島素原）中連接胰島素的α、β鏈。胰島素前體可分解產(chǎn)生相等摩爾量的胰島素和C肽，經(jīng)胰島β細(xì)胞分泌顆粒分泌后進(jìn)入血液循環(huán)［5］。檢測(cè)C肽同樣可評(píng)估胰島β細(xì)胞活性［6］。胰島素主要（約40%～50%）經(jīng)肝臟滅活，其半衰期約為5min。C肽不經(jīng)肝臟攝取而經(jīng)腎臟清除，較胰島素有更長(zhǎng)的半衰期（＞30min），且波動(dòng)幅度更小；同時(shí)，C肽不受外源性胰島素和胰島素自身抗體的干擾。因此在某些情況下C肽檢測(cè)比胰島素檢測(cè)更具有優(yōu)勢(shì)。

在胰島素C肽釋放試驗(yàn)日常檢測(cè)工作中常發(fā)現(xiàn)標(biāo)本溶血的情況。關(guān)于溶血對(duì)胰島素和C肽的影響，雅培配套試劑說(shuō)明書(shū)提示，不能使用溶血標(biāo)本檢測(cè)胰島素，但當(dāng)純化血紅蛋白含量達(dá)5g/L時(shí)不會(huì)對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生干擾；不能使用嚴(yán)重溶血（＞5g/L）的標(biāo)本檢測(cè)C肽。

多篇文獻(xiàn)報(bào)道，溶血可以導(dǎo)致血清胰島素檢測(cè)水平偏低［7-8］。然而溶血對(duì)C肽的影響，結(jié)果并不一致。本資料結(jié)果顯示，溶血組胰島素濃度低于非溶血組，溶血組C肽濃度低于非溶血組；溶血使化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法檢測(cè)的胰島素與C肽結(jié)果均降低。研究報(bào)道紅細(xì)胞中含有胰島素降解酶（IDE）［9］，胰島素降低的原因可能是，紅細(xì)胞膜破裂時(shí)胰島素降解酶被釋放入血清，特異高效地分解胰島素。胰島素的檢測(cè)濃度隨著溶血程度增加而降低［4］。溶血對(duì)C肽的影響程度各實(shí)驗(yàn)室報(bào)道不同，這可能與檢測(cè)方法、儀器、試劑以及標(biāo)本的溶血程度不同有關(guān)。

合格的標(biāo)本是保障實(shí)驗(yàn)室獲得及時(shí)、正確、有效檢測(cè)結(jié)果的重要條件。送檢標(biāo)本不合格的原因較多，其中溶血非常多見(jiàn)，溶血標(biāo)本比例占所有常規(guī)樣本的3.3%，占所有不合格標(biāo)本的40%～70%［10］。溶血嚴(yán)重影響分析前質(zhì)量控制，作者進(jìn)行標(biāo)本采集、處理、運(yùn)送等培訓(xùn)，建立了完整規(guī)范的標(biāo)本檢測(cè)前處理流程，提高標(biāo)本合格率，同時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行不合格標(biāo)本退回制度。但是實(shí)際工作中常出現(xiàn)患者靜脈條件差（如嬰幼兒、留置針）、多次靜脈穿刺（胰島素、C肽釋放試驗(yàn)）等導(dǎo)致的標(biāo)本溶血。此類(lèi)情況患者因采血困難常拒絕重采，即使重新采集也較難獲得滿(mǎn)意標(biāo)本；另外釋放試驗(yàn)對(duì)采血時(shí)間有要求，發(fā)現(xiàn)溶血時(shí)通常已來(lái)不及重新采集。這些情況需要正確分析溶血對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

單個(gè)分析30例樣本，肉眼可見(jiàn)溶血即能降低胰島素與C肽的檢測(cè)濃度，50%溶血標(biāo)本的胰島素濃度改變＞10%，3.3%溶血標(biāo)本C肽的降低幅度＞10%。溶血對(duì)胰島素檢測(cè)結(jié)果的影響更加顯著，溶血標(biāo)本胰島素檢測(cè)結(jié)果可能會(huì)影響醫(yī)生對(duì)患者病情的正確判斷。鑒于溶血對(duì)C肽影響較小，當(dāng)標(biāo)本溶血并無(wú)法重新采血時(shí)，需對(duì)檢測(cè)報(bào)告?zhèn)渥⒄f(shuō)明溶血，同時(shí)可以適當(dāng)結(jié)合C肽與胰島素檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合分析。

目前溶血影響胰島素濃度的主要原因在于紅細(xì)胞內(nèi)胰島素降解酶的存在，為了避免胰島素降解酶對(duì)胰島素檢測(cè)結(jié)果的影響，可以嘗試在真空采血管中加入胰島素酶抑制劑，其有效性待后續(xù)研究證明。