鴨源糞腸球菌感染雛鴨的病理性試驗

(聊城市動物疫病與控制中心，山東 聊城 252000)

腸球菌是一種重要的革蘭氏陽性球菌，也是一種重要的人畜共患病原體，某些腸球菌可以通過感染的畜禽直接傳染給人，甚至可以引起人的發病死亡。同時，腸球菌可以污染乳類和肉類等動物性食品，人們常常因為食用未加熱或煮熟的污染性食品而出現食物中毒。作為一種典型的機會性致病病原體，腸球菌具有極強的抵抗力，對多種臨床上常用的抗生藥物產生明顯的耐藥性，特別是近年來抗萬古霉素的腸球菌菌株不斷的增加，加之侵入性治療以及抗菌藥物廣泛應用等因素，導致腸球菌耐藥菌感染的病例不斷增多，人們治療腸球菌所引起的感染難度逐漸增大，因此在臨床醫學上日漸引起廣泛的關注，該類細菌在食品和公共衛生方面具有非常重要的意義。

國內外對禽類的腸球菌病的研究大部分是關于細菌的分離和鑒定以及耐藥性的分析，對該菌的致病性研究微乎其微。本試驗通過實驗室保存的一株鴨源糞腸球菌，建立人工感染雛鴨的病理模型，觀察雛鴨的病理變化，研究鴨源糞腸球菌對雛鴨的致病特點，為進一步認識鴨源糞腸球菌的致病機理、建立病理學及臨床診斷方法提供可借鑒的參考資料。

1 實驗方法

1.1雛鴨接種實驗 10羽1日齡櫻桃谷雛鴨在飼養7 d之后，隨機分為試驗組和對照組，每組5羽。對試驗組5羽雛鴨采取左側關節注射制備好的糞腸球菌懸液(重新復蘇，菌液濃度稀釋至3.0×108CFU/mL)0.2 mL。對照組5羽雛鴨經相同的途徑接種0.2 mL相同條件下振蕩后的TSB培養基，雛鴨接種后常規飼養管理。

1.2雛鴨發病情況與臨床癥狀的觀察 接種后每天觀察兩組雛鴨的發病情況，包括精神、食欲、活動情況、體格情況、被毛是否光滑以及糞便和其他分泌物性狀的觀察，每天觀察3-4次，記錄雛鴨最早發病的時間和發病時的具體病理癥狀，詳細觀察發病雛鴨病例癥狀的發展過程。

1.3雛鴨的病理學觀察 對死亡的鴨子及時剖檢，未死亡的鴨子于接種兩周后頸靜脈放血致死，并進行剖檢。所有的鴨子在進行剖檢之前首先觀察鴨子體表有無炎癥反應，用手術刀劃開趾關節腔，觀察腔內有無積液。然后按順序打開腹腔，胸腔、口腔和顱腔，觀察肝臟、心臟、肺臟、脾臟、胃、腸管、胰臟、腎臟、法氏囊、胸腺和腦等臟器的大體眼觀病變。采取所有剖檢雛鴨的主要臟器組織，將其放入10%中性福爾馬林溶液中固定。

1.4細菌學檢查 無菌條件下取血液、心臟、脾臟組織、關節材料，用接種環深入切口涂抹并劃線接種在含5% BSA的TSA培養基平板上，置于細菌培養箱37 ℃恒溫培養18-24 h，觀察菌落形態，從TSA平板中挑取單個的典型菌落涂片，進行革蘭氏染色，光學顯微鏡下觀察細菌形態，若觀察到的細菌與試驗所用的接種菌具有一致的細菌形態，則可以認為該病料中分離出的細菌來自于左側關節注射的供試菌液，判斷細菌分離為陽性。

1.5雛鴨的組織病理學檢查 對固定好的各個組織切取疑似病變的部位進行梯度脫水、透明、浸蠟、包埋。制作石蠟切片，常規H.E染色。在光學顯微鏡下觀察各組織的病理變化。

2 實驗結果

2.1雛鴨發病情況與臨床癥狀 實驗組雛鴨5羽雛鴨接種2 d后均開始出現明顯的臨床癥狀，主要表現為精神沉郁，羽毛蓬松，食欲不振，體型消瘦，喜臥惡動，扎堆嗜睡，關節明顯腫大充血，腳蹼紅腫，腳蹼下方出現綠豆大小的紅斑，站立不穩，跛行明顯。感染5 d后關節腫大略微消退，腳蹼彎曲，腳蹼處的紅斑轉變為疤痕組織，腳蹼皮膚壞死和脫落。感染一周后，雛鴨關節恢復正常，但腳蹼仍彎曲，跛行。至感染后14 d試驗結束時，未出現死亡現象。

對照組5羽雛鴨從接種至試驗結束時未出現任何臨床癥狀，正常采食飲水，活潑好動，羽毛光滑鮮亮，生長速度快，無死亡現象。

2.2雛鴨的病理學變化

實驗組雛鴨：

心臟：眼觀心包腔內有少許液體(3/5)，液體呈淺黃色。

肝臟：眼觀肝臟略微腫大，質地較脆(2/5)，顏色鮮紅。

脾臟：眼觀脾臟明顯腫大，邊緣鈍圓，切面濕潤(4/5)。

肺臟：眼觀肺臟表面有輕微的淤血(3/5)。

關節：眼觀關節明顯腫脹，觸摸有波動感，切開后關節腔內有黃色粘稠的液體(5/5)，關節軟骨中央有一棕黃色病灶(2/5)。

腎臟：眼觀腎臟略微腫脹(4/5)。

腳蹼：眼觀腳蹼明顯紅腫，腳蹼皮膚龜裂脫落(5/5)，左側腳蹼中央有一綠豆樣大小的病灶(2/5)。

卵黃囊：眼觀卵黃吸收不良(2/5)。

法氏囊：眼觀法氏囊輕微水腫(5/5)。

胸腺、胰臟、腎臟、胃、腸管和腦：眼觀均未見明顯的異常。

對照組5羽雛鴨：各器官組織均未見明顯的眼觀病理變化。

2.3細菌學檢查

實驗組5羽雛鴨血液樣品細菌分離均為陰性，心臟樣品細菌分離均為陰性，脾臟樣品細菌分離均為陰性，關節樣品細菌分離均為陽性。

對照組5羽雛鴨血液樣品、心臟樣品、脾臟樣品、關節樣品細菌分離均為陰性。

2.4組織病理學變化

實驗組：

心臟：有輕微的心包炎。

肝臟：肝細胞出現脂肪變性，中央靜脈周圍有大量淋巴細胞和異嗜性粒細胞浸潤。

脾臟：脾臟淋巴小結減少，可見大量橢球樣的結構。

肺臟：肺臟淤血明顯，小葉間隔間質增寬，三級支氣管內有許多漿液性的滲出。

腎臟：腎小葉邊緣有大量異嗜性粒細胞浸潤，腎小管上皮細胞變性腫脹。

法氏囊：淋巴小結間隙增寬，淋巴小結皮質區變薄、髓質區淋巴細胞減少。

關節：關節囊滑膜層有大量異嗜性粒細胞浸潤。

對照組：各器官組織未見明顯的組織病理變化。

3 討論

雛鴨感染腸球菌后，根據雛鴨的臨床癥狀，分為急性和亞急性或慢性兩種病型。本實驗通過左側關節接種7日齡的雛鴨，感染2 d后就出現了明顯的臨床病理癥狀，感染5 d后病情已經開始好轉，感染一周后雛鴨幾乎完全恢復正常，試驗結束時未出現死亡病例。受感染的雛鴨發病急但是病程短，且未出現死亡，病理學觀察到的病鴨的病理變化特點與相關文獻報道的慢性感染病例的病變特征大致相同[1]，因此判斷本試驗鴨源糞腸球菌的感染屬于亞急性感染。

根據細菌學檢查的結果，從所有病鴨的血液、心臟和脾臟中并未分離到原試驗細菌，而從所有病鴨的關節內都可以分離到原試驗細菌；同時根據臨床癥狀的觀察，腳蹼出現了明顯的病理變化，表明病癥可以蔓延，也就是說試驗過程中試驗組雛鴨出現了菌血癥癥狀。從此分析得出兩種可能，一是雛鴨接種病原菌后，出現菌血癥，但菌血癥并不持續存在，隨著疾病的發展，菌血癥經過一段時間后消失；二是菌血癥持續存在于受感染的病鴨體內，但是在疾病的后期，病鴨接近康復，各組織器官功能逐漸恢復，對疾病的抵抗力增加，病鴨體內的細菌含量很少，大部分殘留在關節部位，以致從其他樣品中難以分離到原試驗細菌。

本實驗中致病菌經左側關節接種雛鴨，主要引起關節和腳蹼的炎癥反應。在感染初期，關節明顯腫脹，觸之有波動感，關節囊有許多漿液性的滲出，關節軟骨也出現了壞死現象，腳蹼紅腫，并有壞死；在感染中后期，組織器官的功能不斷恢復，機體抵抗力增加，關節和腳蹼腫脹消退，腳蹼上的壞死組織也轉變為疤痕組織。亞急性感染的病禽病理變化隨感染部位的不同而不同，可見關節腫大，關節囊內有大量纖維素性滲出物蓄積，腳蹼腫脹和壞死[2]。分析認為，在疾病的發展過程中，出現菌血癥，病原菌或毒素隨著血液循環侵害機體，炎癥主要蔓延到腳蹼組織。到疾病后期，隨著菌血癥減弱或消失，炎癥反應逐漸減弱，病癥也隨之恢復。

4 實驗結論

鴨源糞腸球菌經關節注射雛鴨后表現出明顯的致病性，主要為亞急性的感染，引起關節發炎、腫大；腳蹼炎癥、腫脹和壞死；并附有輕微的漿液性心包炎；但不引起雛鴨死亡。