miR-146a、miR-375聯合AFP檢測在診斷原發性肝癌中的應用

陳澤衍 陳曉靜 鄭文斌 黃漢蓮 蘭希 吳云風 馬雯

【摘要】 目的：探究微小核糖核酸146a（miR-146a）、微小核糖核酸375（miR-375）聯合甲胎蛋白（AFP）檢測在診斷原發性肝癌中的應用價值。方法：選取2017年2月-2019年4月在本院治療的53例原發性肝癌患者作為肝癌組，將本院同期收治的53例肝臟良性疾病患者作為良性組。檢測所有患者的血清AFP含量及miR-146a、miR-375相對表達量。比較兩組血清AFP含量及miR-146a、miR-375相對表達量。對肝癌組miR-375、miR-146a及AFP檢測結果進行ROC曲線分析，根據ROC曲線得miR-375、miR-146a的最佳臨界值。對肝癌組進行miR-375、miR-146a、AFP檢測及聯合檢測，比較各個檢測方法的敏感度、特異度和ROC曲線下面積（area under curve，AUC）。結果：肝癌組miR-146a、miR-375相對表達量及AFP含量均高于良性組（P<0.05）;聯合檢測敏感度均高于miR-146a與AFP檢測，且特異度高于miR-375檢測（P<0.05）;聯合檢測AUC大于AFP、miR-146a及miR-375檢測（P<0.05）。結論：miR-146a、miR-375聯合AFP檢測在診斷原發性肝癌中具有較高的敏感度、特異度。

【關鍵詞】 微小核糖核酸146a 微小核糖核酸375 甲胎蛋白 原發性肝癌

[Abstract] Objective： To explore the value of detection of microRNA 146a （miR-146a）， microRNA 375 （miR-375） and alpha fetoprotein （AFP） in the diagnosis of primary liver cancer. Method： A total of 53 patients with primary liver cancer treated in our hospital from February 2017 to April 2019 were selected as the liver cancer group， and the 53 patients with benign liver diseases admitted to our hospital during the same period were selected as the benign group. The serum AFP content and the relative expression of miR-146a and miR-375 were detected in all patients. The serum AFP content and relative expressions of miR-146a and miR-375 in the two groups were compared. ROC curve analysis was performed on the detection results of miR-375， miR-146a and AFP in the liver cancer group， and the optimal critical values of miR-375 and miR-146a were obtained according to the ROC curve. Result： The relative expressions and AFP content of miR-146a and miR-375 in the liver cancer group were higher than those in the benign group （P<0.05）. The sensitivity of combined detection were higher than those of miR-146a and AFP detection， and the specificity was higher than that of miR-375 detection （P<0.05）. The AUC of combined detection were higher than those of AFP， miR-146a and miR-375 detection （P<0.05）. Conclusion： The detection of miR-146a and miR-375 combined with AFP have high sensitivity and specificity in the diagnosis of primary liver cancer.

[Key words] miR-146a miR-375 AFP Primary liver cancer

First-authors address： Shenzhen Hospital of Southern Medical University， Shenzhen 518110， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.36.033

原發性肝癌是常見的惡性腫瘤之一，多發于40～50歲人群，男性多于女性，早期癥狀不明顯，一經發現已是中晚期。有研究指出，早期肝癌患者手術治療的效果及預后遠高于中晚期，因此提高早期原發性肝癌的診斷準確率至關重要[1]。臨床上常采用血清甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）診斷原發性肝癌，但AFP診斷的敏感性僅為40%～60%[2]。微小核糖核酸146a（miR-146a）、微小核糖核酸375（miR-375）屬于非編碼RNA，可調控腫瘤細胞的增殖、分化，與腫瘤細胞的發生、發展密切相關。目前，國內雖有關于miR-146a、miR-375診斷原發性肝癌的報道，但對miR-146a、miR-375聯合AFP診斷原發性肝癌的報道較少。因此本研究采用miR-146a、miR-375聯合AFP檢測診斷原發性肝癌，旨在探究聯合檢測在原發性肝癌診斷中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年2月-2019年4月在本院治療的53例原發性肝癌患者作為觀察組，將本院同期收治的53例肝臟良性疾病患者作為良性組。納入標準：（1）符合《原發性肝癌規范化病理診斷指南》中關于原發性肝癌的診斷[3];（2）均屬于首次發病;（3）臨床資料完整者;（4）未接受過化療及放療治療。排除標準：（1）存在其他惡性腫瘤及轉移癌者;（2）嚴重心、腎功能異常者;（3）妊娠期或哺乳期婦女;（4）酒精肝及其他類型肝臟疾病者。所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書，本研究已經醫院倫理委員會批準。

1.2 方法 于清晨抽取患者靜脈血3 mL，對血樣進行離心處理，取血清標本。（1）miR-375、miR-146a檢測：用Rneasy MiNi Kit（50）總RNA提取試劑盒取血清中總RNA，用試劑盒合成cDNA，以GAPDH抗體為內參，采用2-△△Ct表示miR-375、miR-146a相對表達量，采用熒光定量PCR法檢測兩組血清miR-375、miR-146a相對表達量[4]。（2）AFP檢測：采用放射免疫法檢測血清AFP含量，據《原發性肝癌規范化病理診斷指南（2015年版）》中顯示，AFP≥400 μg/L即可診斷為原發性肝癌。（3）聯合檢測：三種指標聯合檢測時其中任何一種指標大于正常參考上限即可診斷為原發性肝癌。

1.3 觀察指標（1）比較兩組血清miR-375、miR-146a相對表達量及AFP含量。（2）對檢測結果進行ROC曲線分析，比較miR-375、miR-146a、AFP單獨檢測及聯合檢測的敏感度、特異度和ROC曲線下面積（AUC）。

1.4 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗;對三種檢測方法及聯合檢測制作ROC曲線，進行ROC曲線分析，計算AUC，AUC>0.5代表該檢測方法具有檢測價值;采用Z檢驗比較AUC的差異性。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 肝癌組男27例，女26例;年齡40～75歲，平均（61.74±5.39）歲;腫瘤直徑平均（4.21±1.05）cm。良性組男33例，女20例;年齡42～78歲，平均（59.32±6.08）歲。兩組性別、年齡一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組血清miR-375、miR-146a相對表達量及AFP含量比較 肝癌組miR-375、miR-146a相對表達量及AFP含量均高于良性組，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.3 各檢測方法對原發性肝癌的診斷價值比較 據ROC曲線得miR-375、miR-146a的最佳臨界值分別為12.55、3.86;AFP檢測的AUC均低于聯合檢測（P<0.05）;聯合檢測敏感度均高于miR-146a、AFP檢測，特異度高于miR-375檢測（P<0.05），見表2、圖1。

3 討論

早期原發性肝癌患者一般無明顯不適感，等患者感受到疼痛時已進入中晚期，但中晚期治療效果不佳，晚期肝癌患者5年存活率不足10%，因此，提高原發性肝癌的早期確診率是延長患者存活時間的關鍵[5]。AFP是一種糖蛋白，主要由胎兒肝細胞及卵黃囊合成，AFP在胎兒血清中具有較高的濃度，胎兒分娩后AFP含量迅速下降，到出生后2～3月AFP會完全被白蛋白替代，故在成人血清中含量極低。AFP因與多種腫瘤的發生密切相關，并在肝臟腫瘤中含量較高，是臨床上診斷原發性肝癌的檢測標志物[6-8]。有研究指出，大多數原發性肝癌患者體內AFP含量遠高于正常個體及其他肝臟疾病患者[9]。本研究中，肝癌組血清AFP值高于良性組（P<0.05），說明原發性肝癌患者體內AFP含量遠高于其他肝臟疾病患者，與上述研究一致[10]。微小核糖核酸是一條長約22nt的非編碼RNA，能與mRNA相結合，阻礙蛋白編碼基因的表達，抑制蛋白翻譯過程miR-375、miR-146a基因屬于基因間型的miRNA，其位于Cryba2基因和Ccdc108基因之間，與腫瘤的增殖分化密切相關，并參與腫瘤發生、發展等過程[11-12]。有研究顯示，miR-146a、miR-375與肝癌等惡性腫瘤關系密切，能進入線粒體控制其基因表達，且肝癌患者體內miR-146a、miR-375表達水平均高于正常個體[13]。本研究中，肝癌組miR-375、miR-146a相對表達量高于對良性組（P<0.05），說明原發性肝癌患者體內miR-375、miR-146a表達水平高于肝臟良性疾病患者。

國外有研究指出，miR-375、miR-146a檢測對多種惡性腫瘤疾病均具有較高的敏感度，但仍存在原發性肝癌患者體內miR-375、miR-146a表達呈正常水平的情況[14-15]。有相關研究表明，AFP對早期原發性肝癌患者的敏感度較低，有近40%的早期肝癌患者AFP檢測呈陰性，因此尋求對早期原發性肝癌敏感度高的血清診斷方法越來越有必要[16-18]。較為理想的腫瘤標志物不僅對晚期腫瘤具有較高的特異度，并能將早期肝癌與肝炎等肝臟良性疾病區分開。有研究表明，采用AFP檢測及微小RNA聯合診斷原發性肝癌敏感度、特異度較高[19]。本研究中，聯合檢測敏感度均高于miR-146a、AFP檢測，特異度高于miR-375檢測（P<0.05），說明聯合檢測診斷原發性肝癌具有較高的敏感度和特異度。黃述婧等[20]采用miR-375、miR-146a聯合AFP診斷原發性肝癌，證實了聯合診斷具有較高的敏感度和特異度，與本研究結果相同。在ROC曲線分析中，聯合檢測的AUC均大于miR-375、miR-146a、AFP單獨檢測，可認為在對原發性肝癌的診斷中，聯合檢測價值高于單獨檢測，與文獻[21]研究一致。

綜上所述，采用miR-375、miR-146a聯合AFP診斷原發性肝癌敏感度、特異度高，具有較高的臨床價值。

參考文獻

[1]於琳，張開炯，柴利，等.原發性肝癌患者癌組織、血清miR-202表達變化及其意義[J].山東醫藥，2017，57（7）：1-4.

[2]王攀，莫經剛，朱杰，等.微滴數字PCR檢測血清miR-21和miR-4429在肝癌診斷中的應用[J].浙江醫學，2017，39（3）：170-172.

[3]叢文銘，步宏，陳杰，等.原發性肝癌規范化病理診斷指南（2015年版）[J].解放軍醫學雜志，2015，21（6）：833-839.

[4]趙文淘，韓留鑫，夏加偉，等.血清miR-26a、miR-122、AFP聯合檢測對肝癌的診斷效能[J].山東醫藥，2018，58（7）：73-75.

[5]何伯圣，石偉湘，龔沈初，等.外周血miR-122檢測聯合MRI擴散加權成像評價肝癌射頻治療的療效[J].中華實用診斷與治療雜志，2017，31（10）：998-1001.

[6]劉沖，唐浩，鄧霖，等.血清miRNA-186，miRNA-30 c在肝細胞性癌中診斷價值的研究[J].現代檢驗醫學雜志，2016，31（6）：44-47.

[7]陳浩宇，嘉紅云，吳曉蔓.肝細胞癌患者外周血中miR-26b的表達及意義[J].中華實用診斷與治療雜志，2016，30（12）：1215-1216.

[8]任雪維，張吉才.肝細胞肝癌患者血漿miR-29a水平的變化及其臨床意義[J].現代檢驗醫學雜志，2017，32（32）：35-36.

[9]毛玉環，譚黎明，李建英，等.血清殼多糖酶3樣蛋白1和甲胎蛋白及鐵蛋白檢測在原發性肝癌診斷中的應用評價[J].實用預防醫學，2018，25（4）：401-404.

[10]黃裔程.AFP、AFU、GGT、D-D聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值[J].檢驗醫學與臨床，2018，15（10）：38-40.

[11]鄭園園，郭傳勇，周瑩群，等.微小核糖核酸調控通路基因多態性與原發性肝癌相關性的研究進展[J].世界臨床藥物，2017，40（7）：489-495.

[12]楊永飛，孫運秀，蔡鈞.肝細胞癌患者血清miR-301表達變化及意義[J].山東醫藥，2018，58（24）：72-74.

[13]郜艷芳，尹金明，王進.磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和AFP聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值[J].河北醫學，2015，21（4）：687-689.

[14] He X X，Chang Y，Meng F Y，et al.MicroRNA-375 targets AEG-1 in hepatocellular carcinoma and suppresses liver cancer cell growth in vitro and in vivo[J].Oncogene，2012，31（28）：3357-3369.

[15] Zhang Q，Zhi Y，Shan J，et al.MicroRNA-449a maintains self-renewal in liver cancer stem-like cells by targeting Tcf3[J].Oncotarget，2017，8（66）：110187-110200.

[16]吳存造，王涌，彭承宏.甲胎蛋白信使核糖核酸與原發性肝癌（文獻綜述）[J].國際外科學雜志，2002，29（5）：265-267.

[17]趙之聰，王健東.微小RNA與肝癌肝移植術后腫瘤復發的研究進展[J].器官移植，2017，8（3）：238-241.

[18]翟璐.血清AFP聯合GP73、Vimentin、SCCA-IgM IC對HBV相關早期HCC的診斷價值[D].天津：天津醫科大學，2014.

[19]馬軍朋，盧偉，陳軍麗，等.數字減影血管造影與超聲對微小肝癌診斷價值的比較研究[J].醫療衛生裝備，2019，40（1）：66-68.

[20]黃述婧，姜菲菲，王穎，等.AFP與PIVKA-Ⅱ聯合檢測在原發性肝癌診斷中的應用研究[J].標記免疫分析與臨床，2016，23（10）：1134-1138，1128.

[21]甘雨，于新發，周成宇，等.甲胎蛋白在原發性肝癌的診斷和預后判斷中的臨床價值[J].海南醫學，2016，27（6）：891-894.

（收稿日期：2019-6-19）（本文編輯：田婧）