一例鋅缺乏患者的SLC39A4基因突變檢測并文獻復習

王小伶 尚盼盼 付希安 孫樂樂 施仲香 周桂芝 劉 紅 張福仁

鋅是人體生長和發育的重要物質，缺鋅會導致皮炎、腹瀉、脫發、神經癥狀和限制生長發育。鋅缺乏按病因學可分為腸病性肢端皮炎(Acrodermatitis enteropathica, AE; OMIM 201100)和獲得性鋅缺乏兩類。AE是一種常染色體隱性遺傳病，到目前為止，發病率還不清楚，但統計數據顯示大約30%患者的同胞也會出現這種疾病。2002年，Kury[1]首次在8個AE家系中檢測到SLC39A4基因突變，提出該基因為AE的致病基因。獲得性鋅缺乏是除AE之外由其他許多原因引起的鋅缺乏癥，其發病與SLC39A4基因無關。我們利用PCR擴增和直接測序方法對1例6歲的鋅缺乏患兒進行SLC39A4基因突變檢測，現將患兒的臨床資料及SLC39A4基因檢測結果報道如下。

1 對象與方法

1.1 病例資料 患兒，男，6歲。因陰囊、肛周、口周及四肢出現紅斑瘙癢1年，加重1周來我院就診。患兒于1年前無明顯誘因口周出現紅斑脫屑，伴瘙癢，皮損漸蔓延至陰囊、肛周及四肢。發病以來患兒精神及食欲不佳，注意力不集中。否認傳染病史，否認食物及藥物過敏史，患者為第一胎足月順產，否認近親結婚，家族無類似皮膚病史。體格檢查：患兒一般情況好，體型偏瘦，各系統檢查未見異常，全身淺表淋巴結未觸及腫大。皮膚科檢查：患兒發質黃、細軟，伴少量脫發；口周、陰囊、肛周及四肢紅斑，表面脫屑，伴瘙癢(圖1a)。實驗室檢查血、尿、糞常規，C反應蛋白，補體C3、C4和電解質均正常，血清銅、鈣、鎂、鐵均正常，血清鋅59.43 μmol/L(正常值76.5～150 μmol/L)。組織病理學檢查示：患兒左手皮損表皮輕度角化過度、角化不全，棘層增厚，棘層上部見蒼白樣細胞，散在角化不良細胞，真皮淺層少許單一核細胞(圖2)。根據患兒的臨床表現，血清學檢查和病理結果診斷為鋅缺乏。給以葡萄糖酸鋅口服液10mL，2次/天，20天后患兒皮損明顯消退(圖1b)，4個月后，患兒皮損基本消退(圖1c)，停止補鋅后，無復發。對患者隨訪2年余，皮損無復發。通過患兒臨床表現和補鋅治療有效的預后情況，作者初步診斷患兒為獲得性鋅缺乏，為進一步診斷，對該患兒進行SLC39A4基因突變檢測。

1a：治療前;1b：補鋅治療20天后;1c：停藥3個月后

圖1 患兒皮損

圖2 表皮輕度角化過度、角化不全，棘層增厚，棘層上部見蒼白樣細胞，散在角化不良細胞，真皮淺層少許單一核細胞(HE,×100)

1.2 標本收集與測序 經患兒家屬簽署知情同意書后抽取該患兒的外周靜脈血5 mL于EDTA抗凝管中。采用TGuide大體積血液基因組DNA提取試劑盒提取患者基因組DNA，并以100名健康人的基因組DNA為對照以排除基因的正常多態性。參考之前發表過的SLC39A4基因引物序列[2]進行PCR擴增SLC39A4基因的全部外顯子及其兩端側翼序列。25 μL的PCR反應體系經變性、退火、延伸后，與緩沖液混合，加入瓊脂凝膠的樣品槽中，回收擴增出的目的片段。純化后的PCR產物采用3500xL Genetic Analyzer自動測序。在Chromas軟件上分析測序結果，判斷是否存在突變。

2 結果

對患兒SLC39A4基因的全部編碼序列及剪切區域測序后并未發現有害突變，根據基因檢測及患兒預后情況將其診斷為獲得性鋅缺乏。

3 文獻復習

以“鋅缺乏”和“Zinc deficiency”為關鍵詞在中國知網數據庫和pubmed數據庫檢索近10年來國內外報道的鋅缺乏共139例，結合本院1例，共140例。總結鋅缺乏的臨床特點：①男性多發，男女比例6∶4。②典型皮損表現為：所有患者均表現“AE”樣皮損，口周、肢端和會陰部紅斑、水皰、丘皰疹，個別患者有糜爛現象。③患者年齡從剛出生至89歲不等，平均年齡為25歲。④所有患者均行補鋅治療。

診斷為“腸病性肢端皮炎”的患者有84例。總結腸病性肢端皮炎的臨床特點：①39例患者進行SLC39A4基因檢測并檢測出有害突變，檢出突變率為100%，其中34例患者需要長期補充鋅治療，其余5例患者預后不詳。②30例患者未進行基因檢測且沒有家族史，短期補鋅有效。③13例患者未進行基因檢測且有家族史，需要長期補鋅治療。④1例患者未進行基因檢測且有家族史，短期補鋅有效。⑤1例患者未進行基因檢測且沒有家族史，需要長期補鋅治療。⑥未經基因檢測即診斷為腸病性肢端皮炎的病例78%(35例/45例)來自中國。

診斷為“獲得性鋅缺乏”的患者有56例。總結獲得性鋅缺乏的臨床特點：①19例患者進行了基因檢測，檢出突變率為0%，所有患者補鋅治療有效且停藥不復發。②其余未進行基因檢測的37例患者中35名患者短期補鋅有效；1例患者因再次飲食不均復發；1例患者因其他疾病死亡。③導致患者缺鋅的原因包括：神經厭食癥或飲食不均、胃腸道手術或疾病、長期腸外營養、酗酒、母乳鋅含量低等。

4 討論

鋅缺乏是一種以口腔周圍及四肢末端對稱性紅斑、水皰及糜爛、脫發、間歇性腹瀉為主要臨床特征的罕見皮膚病[3]，根據病因學可分為腸病性肢端皮炎和獲得性鋅缺乏。

腸病性肢端皮炎是一種罕見的常染色體隱性遺傳病，該病于1943年由Danbolt和Closs首次報道[4]。2002年，Kury首次發現遺傳性腸病性肢端皮炎的發病與位于染色體8q24.3區域的SLC39A4基因突變有關[1]，該基因突變可能會導致鋅結合配體的異常，從而影響腸道鋅吸收，血清鋅水平降低[5，6]。至今為止，大約有52種突變位點報道，突變類型包括：錯義突變、無義突變、移碼突變、剪切位點突變等。遺傳性腸病性肢端皮炎由于基因突變導致，常常有家族史，病情反復，需要長期補鋅治療[7]。文獻報道的腸病性肢端皮炎的患者一旦中斷補鋅均會導致復發[8-10]，這與作者對10年來腸病性肢端皮炎文獻的總結一致，進行SLC39A4基因檢測并檢測出攜帶致病突變的患者幾乎都需要長期補鋅治療。

獲得性鋅缺乏的臨床表現與遺傳性腸病性肢端皮炎相同，可由多種疾病導致，包括囊性纖維病、腸道吸收不良綜合征、Crohn病、腎小管功能障礙、惡性腫瘤及大面積燒傷等[11]。兒童獲得性鋅缺乏多見于嬰兒，多發生于哺乳期未添加輔食或斷奶后，平均年齡為9個月[12]，同樣地，也不排除兒童和成年時期因飲食不均衡導致的缺鋅。與遺傳性腸病性肢端皮炎不同的是：獲得性鋅缺乏患者不存在SLC39A4基因突變，所以在短期補鋅治療痊愈后停藥不復發[13]。汪盛等[14]對18例暫時性癥狀性鋅缺乏進行臨床分析及SLC39A4基因檢測，并未發現任何有害突變，并且在對患兒給予補鋅治療后，所有患兒均在2周內皮損愈合，癥狀改善，堅持補鋅1～2個月后停用，癥狀均未復發，因此判定該18例患者為暫時性癥狀性鋅缺乏。暫時性癥狀性鋅缺乏是獲得性鋅缺乏的一種特殊類型，患兒在母乳喂養期間表現鋅缺乏的皮損癥狀，原因是母親攜帶ZnT2基因突變導致母乳中低鋅，患兒斷奶后正常飲食不久就會痊愈[15]。

由于遺傳性腸病性肢端皮炎和獲得性鋅缺乏臨床表現相同，在臨床表現上無法相互鑒別，只能根據患者的臨床表現、血清鋅水平及患者補鋅有效這一特點來初步診斷為鋅缺乏。但是，二者的分子學機制完全不同，前者是由于SLC39A4基因突變導致的遺傳病，后者是由于暫時的鋅補充或吸收不足導致的營養性疾病。所以，SLC39A4基因篩查是鑒別這兩種疾病的重要手段。此外，文獻復習中提到腸病性肢端皮炎患者的預后往往都很差，停藥即復發；而獲得性鋅缺乏患者的預后良好，停藥不會復發。在沒有基因篩查條件下，患者預后情況也可以輔助鑒別這兩種疾病[8]。

本文患兒根據皮損及血清鋅降低的情況初診為鋅缺乏，經過補鋅治療20天后體重明顯增長、皮損明顯改善，4個月后隨訪患者皮損基本痊愈，至今沒有復發；并且SLC39A4基因檢測未發現致病突變，最終診斷患者為獲得性鋅缺乏，患兒皮損痊愈后無需繼續補鋅治療。筆者認為，文獻復習中診斷為“腸病性肢端皮炎”的患者中除了①可明確診斷為腸病性肢端皮炎外，②和③應分別診斷為獲得性鋅缺乏和腸病性肢端皮炎，這需要SLC39A4基因檢測來驗證。未進行基因檢測即診斷為腸病性肢端皮炎的78%病例來自中國，以獲得性鋅缺乏為關鍵詞檢索國內數據庫僅有4篇文獻報道。這說明，在國內臨床醫生對獲得性鋅缺乏的認識不夠，往往以“腸病性肢端皮炎”的診斷代替鋅缺乏而忽視進一步明確診斷，所以通過對患者進行SLC39A4基因篩查來鑒別遺傳性腸病性肢端皮炎和獲得性鋅缺乏有利于幫助臨床醫生確定患者治療方案，判斷患者預后。