VEGF及基質金屬蛋白酶與卵巢癌臨床分期的相關性分析

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(華中科技大學同濟醫學院附屬協和醫院婦產科，湖北 武漢 430000)

卵巢癌是臨床上最常見的婦科惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率有逐年升高的趨勢，已成為威脅女性健康和生存的重要殺手[1]。卵巢癌早期患者通常可進行手術治療，但中晚期患者或發生轉移的患者通常無特效的治療手段，患者預后較差[2-3]。因此，分析卵巢癌患者臨床分期及是否發生淋巴轉移的相關生物分子對臨床診斷和治療具有重要的參考價值。血管內皮生長因子及其受體是特異性的促血管內皮生長因子，調控了細胞的增殖、分化和遷移等過程[4]；基質金屬蛋白酶及其抑制劑參與了惡性腫瘤的發生、發展等過程，且與腫瘤細胞的增殖和凋亡及轉移過程密切相關[5-6]。本文分析血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及基質金屬蛋白酶與卵巢癌臨床分期及淋巴轉移的相關性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

以本院2006年1月至2009年4月期間診治的卵巢癌患者為研究對象。根據國際抗癌聯盟UICC(2002年)的分期及診斷標準，140例卵巢癌患者Ⅰ期40例，Ⅱ期30例，Ⅲ期30例，Ⅳ期40例；發生淋巴轉移患者70例，未發生淋巴轉移患者70例。所有患者均經過病理學診斷確認。卵巢癌患者年齡56～72歲，平均(64.6±10.3)歲。所有患者均知情并簽署知情同意書，并經過醫院倫理委員會批準。

1.2 分析指標及方法

140例不同臨床分期卵巢癌患者(卵巢癌組，n=140)血清中VEGF及基質金屬蛋白酶水平的變化，并分析發生淋巴轉移(發生淋巴轉移組)及未發生淋巴轉移(未發生淋巴轉移組)患者血清中上述因子水平的變化。VEGF及血管內皮生長因子受體( VEGFR，vascular endothelial growth factor receptor) 檢測試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，基質金屬蛋白酶2( metalloproteinase2，MMP-2)檢測試劑盒購自R&D公司，MMP-9(metalloproteinase9，MMP-9)檢測試劑盒購自Santa Cruz公司，基質金屬蛋白酶抑制劑1( the inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1)檢測試劑盒購自R&D公司。檢測采用酶聯免疫吸附測定法進行，所有操作均按照試劑盒說明書進行。

酶聯免疫吸附測定法步驟：用移液器加入標準品和樣品20 μL到各自微孔中，每個標準品和樣品做兩孔平行，再按每孔80 μL加入單抗工作液，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置20 ℃恒溫箱中反應30 min;小心揭開蓋板膜，在洗板機上用洗滌液洗板，8孔8道，每孔250 μL，2點吸液，洗板5次，最后在吸水紙上將殘余液滴拍干；每孔加入酶標二抗100 μL，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板置20 ℃恒溫箱中反應25 min，取出重復上述洗板步驟;顯色:每孔加入底物A液50 μL，再加B液50 μL，振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后，置20 ℃恒溫箱中20 min;測定:每孔加入終止液50 μL，振蕩混勻，用雙波長450 nm/630 nm檢測，測定每孔OD值。按上述程序重復操作2次，將加入100 μL酶標二抗后的孵育時間分別改為30 min和35 min。

1.3 統計分析

數據統計采用SPSS20.0統計軟件完成，計量資料用均數±標準差表示，兩組比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，總體比較有差異再采用LSD-t檢驗進行兩兩比較，相關性分析采用Spearman進行。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同臨床分期卵巢癌患者血清中VEGF及基質金屬蛋白酶水平變化

與對照組相比，卵巢癌組患者血清中VEGF、VEGFR、MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平均明顯升高(P<0.05)，且隨著臨床分期的增加，上述因子水平明顯升高(P<0.05)，見表1。

2.2 發生淋巴轉移卵巢癌患者血清中VEGF及基質金屬蛋白酶水平變化

與未發生淋巴轉移組患者相比，發生淋巴轉移組患者的VEGF、VEGFR、MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平均明顯升高(P<0.05)，見表2。

2.3 VEGF及基質金屬蛋白酶與臨床分期的相關性分析

VEGF及基質金屬蛋白酶與臨床分期密切相關：VEGF、VEGFR、MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平與患者臨床分期呈明顯的正相關(相關系數分別為0.446、0.309、0.354、0.411和0.432)，見表3。

表1 不同臨床分期卵巢癌患者血清中VEGF及基質金屬蛋白酶水平變化 (pg/mL)

表2 發生淋巴轉移卵巢癌患者血清中VEGF及基質金屬蛋白酶水平變化 (pg/mL)

表3 VEGF及基質金屬蛋白酶與臨床分期的相關性分析

3 討 論

卵巢癌給患者和家庭帶來沉重的負擔。中晚期卵巢癌患者治療效果差，患者的預后不盡如人意。因此，分析卵巢癌臨床分期及是否發生淋巴轉移相關的生物大分子對臨床診斷和治療具有重要的參考價值。血管內皮生長因子及其受體參與調控了多種惡性腫瘤的病理及生理學過程，且可作為藥物治療的潛在靶點[7-8]。在分析VEGF在子宮內膜樣腺癌中的表達及其臨床意義時也證實VEGF表達在子宮內膜樣腺癌組織中增高，可能促進子宮內膜樣腺癌的發生發展及轉移浸潤[9]。以往的研究也證實乳腺癌組織中VEGF均呈陽性表達，且與乳腺癌組織的發生、浸潤、轉移密切相關[10]，VEGF水平異常與多發性骨髓瘤患者疾病進展及預后相關[11]。本文卵巢癌組患者血清中VEGF、VEGFR水平均明顯升高，且發生淋巴轉移組患者的VEGF、VEGFR水平均明顯升高，提示VEGF與卵巢癌患者臨床分期及淋巴轉移密切相關。基質金屬蛋白酶及其抑制劑在多種惡性腫瘤中表現異常，且已有的證據顯示其可能與惡性腫瘤的發生及發展過程密切相關[12-13]。沈樹娜等[14]也指出腹水中MMP-2和MMP-9水平可能成為鑒別卵巢良惡性病變的標記物，且與卵巢惡性腫瘤患者預后有關。基質金屬蛋白酶及其抑制蛋白共同參與了細胞外基質的重構過程，而腫瘤細胞快速增殖的過程中伴隨有基質的降解和重構以適應細胞的快速增殖，同時腫瘤細胞的轉移也需要基質降解后腫瘤細胞在新的位點進行基質重構進而增殖形成新的病灶。這與本文中卵巢癌組發生轉移患者血清中MMP-2、MMP-9及TIMP-1水平升高的結論一致。