人參靈芝膠囊緩解體力疲勞小鼠的試驗

蘇婧婧，李慶林

(安徽中醫藥大學科研實驗中心，新安醫學教育部重點實驗室，安徽合肥 230038)

衛生部《保健食品檢驗與評價技術規范》對疲勞的定義是機體過用而引起的功能降低并出現機體不適的狀態[1]，主要表現為四肢無力、腰酸腿軟、氣力不足[2]。疲勞的產生主要生理本質是由于代謝產物蓄積，包括乳酸、肝糖原、氮的代謝產物、自由基等[3-4]。中醫認為，疲勞現象的出現與五臟的失調有密切的關系，四肢無力多與脾胃有關，腰酸腿軟多與腎臟有關，氣力不足多與肺臟有關，頭腦不清多與心臟有關[5-6]。人參味甘、微苦，性微溫，為多年生草本植物，具有滋陰補腎、扶正固本的作用，含多種皂苷和多糖類成分，適用于調整血壓、恢復心臟功能、神經衰弱及身體虛脫等癥[7]。靈芝味甘，性平，具有補氣安神、止咳平喘、滋補強身的功效，含氨基酸、多肽、蛋白質、三萜類、多糖類等，常組方用于神經衰弱、利尿益腎、虛勞咳喘、改善免疫等癥狀[7]。該研究旨在探討人參、靈芝2種原料配伍制成膠囊劑緩解體力疲勞的作用。

1 材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1試驗樣品。人參靈芝膠囊(自制)，由人參、靈芝水提、濃縮、干燥后加輔料制備而成，0.45 g/粒，每日食用4粒，相當于人體每日食用人參2 g、靈芝2 g。

1.1.2動物分組。 SPF級昆明小鼠，雄性，體重(20±2)g，由安徽醫科大學實驗動物中心提供，動物質量合格證：No.34000200000691，許可證號：SCXK(皖)2011-002。試驗選用健康小鼠160只，分為4個試驗組，各試驗組動物再分為4組(高、中、低3個劑量組及陰性對照組)，每組10只。經適應性喂養后進行后續試驗。

1.1.3主要儀器。ML303電子分析天平、DS-671電子秤、恒溫游泳箱、3K15冷凍離心機、TU-1901紫外可見分光光度計、AU400全自動生化儀、BHW2恒溫水浴鍋。

1.1.4主要試劑。尿素(UREA)測定試劑盒(紫外-谷氨酸脫氫酶法)，購自深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司；肝糖原測試盒、全血乳酸測試盒，購自南京建成生物工程研究所。

1.2試驗方法

1.2.1劑量選擇、受試樣品給予方式和時間。以人體推薦量的20倍換算為小鼠中劑量組，另設高、低劑量組。受試樣品連續灌胃30 d，每天1次，每次灌胃體積以20 mL/kg。高劑量組0.9 g/kg(人用劑量30倍)、中劑量組0.6 g/kg(人用劑量20倍)、低劑量組0.3 g/kg(人用劑量10倍)。每周根據小鼠體重調整灌胃劑量。

1.2.2負重游泳試驗。最后一次灌胃給藥30 min后，用手術線和膠布在小鼠尾部固定5%體重的鉛皮，各給藥組隨機抽取一只置于水深40 cm、水溫(25±2)℃的恒溫游泳箱中游泳，分別記錄各組小鼠自游泳開始至完全沒入水中10 s的時間。

1.2.3運動后血清尿素含量測定。最后一次灌胃給藥30 min后，將小鼠置于30 ℃的恒溫游泳箱中，進行90 min不負重游泳，休息60 min后摘眼球采全血約0.5 mL，分離血清2 000 r/min離心15 min，按照試劑盒的操作步驟，全自動生化儀測定血清中尿素含量。

1.2.4肝糖原含量測定。最后一次灌胃給藥30 min后，小鼠頸椎脫臼處死后，解剖取出肝臟，剪碎后稱取肝臟(90～100 mg)，按試劑盒的操作步驟，加入堿液沸水浴20 min，取一定量的檢測液加入顯色劑，沸水浴5 min，620 nm波長，1 cm光徑，比色測定各管吸光度，計算肝糖原含量。

1.2.5血乳酸含量測定。最后一次給藥30 min后，從小鼠內眥取血50 μL，將小鼠置于30 ℃的恒溫游泳箱中，游泳10 min，游泳結束后休息0、20 min后各取血50 μL，按照試劑盒操作說明，530 nm波長，1 cm光徑，比色測定各管吸光度，計算血乳酸含量及曲線下面積。

2 結果與分析

2.1人參靈芝膠囊對小鼠負重游泳時間的影響由表1可見，與陰性對照組比較，人參靈芝膠囊高、中劑量組小鼠的負重游泳時間明顯延長(P<0.01)，并呈一定的劑量依賴性。

表1 人參靈芝膠囊對小鼠負重游泳時間、運動后血清尿素含量和肝糖原含量的影響

注：與陰性對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

Note：Compared with the negative control group，*P<0.05，**P<0.01

2.2人參靈芝膠囊對小鼠運動后血清尿素含量的影響由表1可見，與陰性對照組比較，人參靈芝膠囊各劑量組均可降低小鼠游泳后的血清尿素含量(P<0.05)，以中劑量組作用最為明顯。表明人參靈芝膠囊可減少或抑制疲勞小鼠血清尿素的產生。

2.3人參靈芝膠囊對小鼠肝糖原含量的影響由表1可見，與陰性對照組比較，人參靈芝膠囊高、中、低各劑量組小鼠的肝糖原含量顯著升高(P<0.01)。表明人參靈芝膠囊具有促進小鼠肝糖原儲備的作用。

2.4人參靈芝膠囊對小鼠血乳酸曲線下面積的影響由表2可見，與陰性對照組比較，人參靈芝膠囊各劑量組小鼠游泳前血乳酸值、游泳后0 min血乳酸值均無顯著性影響(P>0.05)；中劑量組可明顯降低小鼠游泳后20 min血乳酸值(P<0.05)；中劑量組小鼠血乳酸曲線下面積顯著降低(P<0.01)。表明人參靈芝膠囊具有減少小鼠運動后乳酸生成的作用。

表2 人參靈芝膠囊對小鼠血乳酸值及曲線下面積的影響

注：與陰性對照組比較，*P<0.05，**P<0.01

Note：Compared with the negative control group，*P<0.05，**P<0.01

3 結論與討論

體力疲勞又稱運動性疲勞，是由于機體進行重體力勞動、大運動量活動，由于時間過長，肌肉過度緊張，生物能源消耗過多。疲勞直接的表現主要是運動耐力下降，力竭游泳時間是反映運動耐力的重要指標[8]。負重游泳試驗結果表明，與陰性對照組比較，人參靈芝膠囊高劑量組小鼠負重游泳時間顯著延長(P<0.01)，人參靈芝膠囊能夠提高小鼠的運動耐力，提高機體抗疲勞的功能，延長運動時間。

尿素是哺乳動物蛋白質分解代謝的終產物，隨著運動的進行，氨基酸分解代謝增強，血清尿素含量反映的是機體對運動后代謝產物的分解能力，人參靈芝膠囊高、中、低3個劑量組均能降低運動后小鼠血清尿素的含量(P<0.05)，表明人參靈芝膠囊能夠加速機體代謝產物的清除，加速疲勞的消解。在長時間游泳后，蛋白質和含氮化學物的分解代謝，體內尿素含量增加，機體對運動負荷能力降低。

在劇烈運動消耗大量血糖時，肌糖原分解供能，為維持血糖水平，機體啟用肝糖原，肝糖原的儲備量是反映抗疲勞程度的敏感指標[9]。試驗結果表明，人參靈芝膠囊高劑量組能顯著提高小鼠肝糖原含量(P<0.01)，為機體提供較好的能量儲備，延緩疲勞的產生，增強運動能力。

人參是傳統的珍貴滋補中藥，靈芝更具“仙草”的美譽，具有很高的藥用價值。該研究從現代藥理研究角度闡釋人參靈芝抗疲勞的作用。人參發揮抗疲勞作用的主要活性物質是人參皂苷[10]、人參多糖和人參蛋白。靈芝活性成分復雜，靈芝多糖是其發揮抗疲勞作用的主要活性物質。由于人參和靈芝幾乎無毒副作用，且臨床效果顯著，已開發成多種保健食品。

綜上所述，人參靈芝膠囊能明顯延長小鼠負重游泳時間，降低運動后血清中尿素和乳酸含量，增加肝糖原的儲備，具有緩解體力疲勞的作用。