曲格列酮對低氧狀態(tài)下肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的作用機(jī)制研究*

楊中靜，皮衛(wèi)峰，朱萍萍

（上海建工醫(yī)院呼吸科，上海 200083）

形成肺動(dòng)脈高壓的機(jī)制非常復(fù)雜，其中低氧引起的肺血管收縮和肺血管重塑（PVR）是一個(gè)重要機(jī)制。低氧可導(dǎo)致肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（PASMCs）過度增殖，從而導(dǎo)致PVR[1]。增殖體過氧化物酶激活受體γ（PPARγ）激動(dòng)劑是一種平滑肌細(xì)胞生長的負(fù)性調(diào)節(jié)劑，在體內(nèi)外均能抑制平滑肌細(xì)胞增殖。既往研究顯示，PPARγ激動(dòng)劑在多種細(xì)胞內(nèi)均能通過對抑癌基因PTEN的調(diào)節(jié)作用影響細(xì)胞的代謝、增殖和凋亡[2-4]，但對低氧狀態(tài)下的PASMCs能否通過調(diào)節(jié)PTEN發(fā)揮作用則尚未見報(bào)道。因此，本研究中觀察了PPARγ激動(dòng)劑曲格列酮對低氧狀態(tài)下PASMCs的增殖、凋亡及PTEN/Akt表達(dá)的影響，并進(jìn)一步通過PTEN抑制劑阻斷PTEN/Akt通路觀察對此作用的影響，以明確其是否通過調(diào)節(jié)PTEN發(fā)揮作用。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試藥

人 PASMCs及細(xì)胞培養(yǎng)液（美國 ScienCell實(shí)驗(yàn)室）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）試劑盒（美國Fermentas公司）；CyQUANT細(xì)胞增殖檢測試劑盒（美國 Invitrogen公司）；小鼠抗 GAPDH、小鼠抗人PTEN（一抗）和羊抗小鼠IgG-HRP（二抗）（美國Santa Cruz公司）。

PTEN和GAPDH引物均由1st base公司（Singapore）合成，PTEN 上游序列：5′-tcaccaactgaagtggctaaaga-3′，下游序列：5′-ctccattcccctaacccga-3′，GAPDH 上游序列：5′-agccacatcgctcagacac-3′，下游序列：5′-taaaagcaggcctggtgac-3′。

曲格列酮（湖北巨勝科技有限公司，批號(hào)為20161009，規(guī)格為每瓶 10 mg）；GW9662（美國 Sigma 公司，批號(hào)為 011M4616V）；bpV（HOpic）（德國 Merck 公司，批號(hào)為 S865101）。

1.2 方法

分組：人PASMCs分別加入0.5～60 μmol/L的曲格列酮培養(yǎng)72 h，將培養(yǎng)的PASMCS分為正常對照組、模型組、曲格列酮（20μmol/L）組、曲格列酮（20μmol/L）+GW9662（1 μmol/L）組及曲格列酮（20 μmol/L）+bpV（HOpic，2.5 μmol/L）組。除正常對照組在常氧下培養(yǎng)，其余組均于1%氧體積分?jǐn)?shù)、5%CO2條件下培養(yǎng)。

PASMCs增殖檢測：細(xì)胞培養(yǎng)48 h后使用細(xì)胞增殖檢測試劑盒檢測PASMCs增殖情況，操作步驟按照說明書進(jìn)行。……