苦參堿調控肝癌細胞HepG2自噬作用機制研究

郭 浩，周淑妮，冉瑞智

（湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫院，湖北 恩施 445000）

全球每年有超過60萬患者死于肝癌，其中50%發生在中國[1-2]。目前，肝癌的有效治療方法是手術切除和肝移植，再輔助放射治療、化學治療（簡稱放化療），但患者5年生存率僅為5%[3]。加之大部分肝癌患者合并肝硬化，限制了化療藥物的使用[4]，有必要尋找同時具有抗腫瘤和抗纖維化活性的藥物。目前，苦參堿已被廣泛應用于肝炎、肝纖維化、癌癥等疾病的治療[5]，但對其抗腫瘤作用的確切機制研究還不夠深入[6-7]。研究發現，苦參堿可誘導腫瘤細胞發生Ⅱ型程序性死亡，即自噬[8]，但機制尚不清楚。有研究證實，磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶 B（Akt）/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路在腫瘤細胞自噬過程中發揮關鍵作用[9]。本研究中將不同劑量苦參堿作用于肝癌細胞HepG2，確認肝癌細胞HepG2是否發生了自噬，同時初步探討其分子機制?，F報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

試藥：苦參堿（西安天園生物制劑公司，批號為16092317，純度≥99%）；DMEM高糖培養基、胎牛血清（武漢普諾賽生命科技有限公司，批號分別為PM150210B，164210-100）；胰酶（美國 Gibco公司，批號為 11080907）；單丹磺酞戊二胺（MDC，美國 Sigma公司，批號為15596018）；Trizol ReagentRNA提取試劑盒（美國Invitrogen公司，批號為15596018）；逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）RNA反轉錄試劑盒（大連TaKaRa公司，批號為RR047A）；熒光定量PCR試劑盒（寶生物工程<大連>有限公司，批號為TK08045）；細胞蛋白抽提試劑（碧云天生物技術研究所，批號為P0033）；鼠抗p-Akt（Ser473）抗體，兔抗 Akt、mTOR、自噬相關蛋白 LC3B 抗體，均購自美國Santa Cruz公司，批號分別為HZ-0670R2，HZ-0670R1，HZ-0670R22，HZ-0673R6；辣根過氧化物酶（HRP）標記抗小鼠IgG、HRP標記抗兔IgG和鼠抗GAPDH抗體均購自武漢艾美捷科技有限公司（批號分別為 115-035-003，C1313）?！?br>