不同濃度枸杞多糖對腎間質纖維化大鼠腎組織TGF-β1的影響

摘要：目的：探究不同濃度枸杞多糖（Lycium Barbarum Polysaccharides，LBP）對腎上皮細胞間質腎纖維化時TGF-β1表達的影響，探討與分析其對腎纖維化的保護機制。方法：通過單側輸尿管結扎手術（UUO）對40只12周齡雄性大鼠建立腎間質纖維化模型，將其隨機分為LBP高劑量（800mg/kg）組、中劑量組（650mg/kg）、低劑量組（450mg/kg）和實驗組，每組各10只。實驗組采用LBP（空白組用生理鹽水）連續灌胃三周。取左腎切片應用HE染色法和Masson三色染色觀察組織學變化，取血清用免疫組化法檢測各組TGF-β1分布水平。結果：1.實驗組腎間質中炎性浸潤及腎小管損傷明顯，造模成功。2.顯示TGF-β1在各腎組織中與對照組相比均下降，以實驗組中高劑量組明顯。結論：LBP能夠降低大鼠血清中TGF-β1的水平，且一定范圍內較高者濃度表現明顯，故推測LPB可能由此抑制腎間質纖維化進展，對腎纖維化起一定保護作用。

關鍵詞：枸杞多糖;腎間質纖維化;TGF-β1

枸杞的主要有效成分為枸杞多糖，其主要功效為滋補肝腎、益精明日^[1]，在臨床中主要用于腎虛所致的衰老、生殖功能障礙以及機體免疫力低下^[2]。研究證表明LBP還可通過改善腎微循環延緩腎臟衰老改善腎結構，能顯著改善衰老腎臟血液循環和腎組織形態，對腎臟具有保護作用^[3]。枸杞多糖在臨床中預防和治療慢性腎臟病有重大意義。

近年來慢性腎臟病的發病率越來越高，普遍認為腎間質細胞的纖維化造成的腎臟實質性損傷是導致慢性腎臟病的常見治病因素。Lan等^[4]表明TGF-β1是導致進展性腎小管間質纖維化的關鍵通路。有研究表明，TGF-β1可誘導肌成纖維細胞激活并導致細胞外基質生成，進而導致腎纖維化和腎小管萎縮^[5]。同時TGF-β1蛋白可以直接激活一些間質細胞相關基因如波形蛋白、纖連蛋白和膠原蛋白的表達^[6～7]。TGF-β1、smad蛋白介導腎上皮間質細胞的發生和發展，調控腎間質纖維化的進程^[8]，導致腎纖維化引起慢性腎疾病。

1材料與方法

1.1動物處理及標本制作

選取SPF12周雄性SD大鼠40只，隨機分為一個對照組和三個實驗組，每組各10只;實驗組高劑量組每天灌胃枸杞多糖800mg/kg/d、中劑量組每天灌胃枸杞多糖650mg/kg/d、低劑量組每天灌胃枸杞多糖450mg/kg/d，對照組灌胃0.9%的生理鹽水，維持21d，收集各組大鼠血清取及對各組大鼠左側腎臟切片。

1.2 HE染色和Masson三色染色形態學觀察

取大鼠左側腎臟進行石蠟標的本制作：腎臟組織經4%多聚甲醛固定后沖洗，再常規梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、石蠟包埋。

1.3血清中TGF-β1的測定

用TGF-β1檢測試劑盒用于定量檢測血清中TGF-β1的含量，取血清離心20分鐘（2000-3000轉/分），收集上清液，每只大鼠血清做5張涂片，在40 倍物鏡下隨機取10 個不同視野，用Motic Images Advanced 3.2 圖像分析系統，測定TGF-β1蛋白陽性反應物相對含量的平均光密度值。

1.4 統計學處理

計量資料用均數±標準差（x ± s）表示，用SPSS17.0 統計軟件進行統計分析，計量資料進行正態性檢驗后進行方差分析，Plt;0.05 認為差異有統計學意義。

2結果

2.1組織學觀察

對照組、實驗低劑量組和中劑量組腎小管明顯擴張，部分萎縮，間質基質沉淀，實驗高劑量組腎小管稍有擴張，部分萎縮，間質基質可見少許沉淀。

2.2血清中TGF-β1測定結果

高中低劑量組中大鼠血清TGF-β1在對照組中均呈陽性反應，尤其以高劑量組為強陽性反應（Plt;0.05），將其進行平均光密度統計分析，具體見表1。

表1大鼠血清TGF-β1陽性反應的平均光密度（x ± s）

*高劑量組與對照組中其他細胞比較，Plt;0.05

3討論

目前隨著慢性腎病的發病率越來越高，研究者對腎纖維化的保護處于熱門討論話題。腎纖維化的發病機制復雜，與多種治病因素有關，作為腎小管纖維化的關鍵通道TGF-β1，其能誘導細胞因子促進細胞外基質的大量堆積形成腎間質纖維化，最終引起慢性腎衰竭^[9-10]。本次研究通過單側輸尿管結扎建立腎纖維化模型，用HE染色法和Masson三色染色常規觀察LBP干預后腎臟組織的變化，通過對各組檢測TGF-β1的表達進行檢測分析.每組均相應的有所下降，尤其以高濃度組為較明顯;而從組織學觀察來看，高濃度組的腎纖維化相比其他組有明顯減輕。故此可推測，LBP在干預腎纖維化對其起到保護作用時，很可能是通過對TGF-β1的表達從來對其起到保護作用。

綜上所述，LBP能減輕UUO模型對大鼠腎間質纖維化的影響，其中LBP高劑量的作用效果優于LBP低、中劑量組，且在TGF-β1的陽性表現來看，高濃度組的陽性反應較為強，LBP可調控TGF-β1蛋白在上皮細胞間質轉化中的作用，緩解腎間質纖維化的進程，從而為臨床預防和治療慢性腎臟病提供新的科學參考依據。

參考文獻：

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