酸堿處理去除血液制品中熱原工藝的探索

閔朝

【摘 要】酸堿去除血液制品中熱原的工藝，操作方便、簡單，一直在血液制品領域廣泛使用。可以說，處理血液制品中熱原是一個非常重要且復雜的問題。多年來，很多單位都在利用各種方法對熱原進行處理，都在積極探索酸堿處理去除血液制品中熱原的工藝，通過調整高熱原制品的PH、離子強度、蛋白濃度等參數，來實現在不同的溫度條件下來觀察熱原的種種變化。通過研究表明：酸堿處理是去除血液制品中熱原較為科學、有效的方法。

【關鍵詞】酸堿處理；血液制品；熱原；免疫球蛋白

一、引言

各種人血漿蛋白制品統稱為血液制品，其中包括人胎盤血白蛋白、人血白蛋白、靜脈注射用人免疫球蛋白、肌注人免疫球蛋白、組織胺人免疫球蛋白等等。健康人血漿是血液制品的原料，人血漿中的水份占有92%左右，而蛋白質則占有7%-8%，蛋白質通過分離提純制成了血液制品。自然環境中普遍存在熱原質，這也是目前很多大規模血液蛋白分離技術和方法，容易受到熱原污染，進而產生熱原反應的原因。熱原作為一種藥理活性很強的毒性反應物質，對血液制品有很深的影響。

二、方法

去除污染細菌毒素有很多方法，一般是根據血液蛋白相對分析的不同質量來去除細菌內毒素，常用的有超濾、分子篩等方法，這些方法主要適用于一些分子含量較低的輸液藥品中，比如生理鹽水和葡萄糖水等。【1】此外還有層析法，應用的較為廣泛，但是由于設備成本較高，因此處理量并不大。而酸堿處理方法，在血液制品和其化學條件相對穩定的條件下，則也有較為明顯的變化。把生理鹽水在注射前，平均分成均等的兩份，分別用lmol/LHCI或lmol/LNaOH調pH至4.0±0.5、10±0.5，分別加入一定量的標準內毒素，使內毒素濃度為4EU/而，除菌過濾后分成4份，分別放在57±0.5℃、37±0.5℃、20±0.5℃、（2—8）±0.5℃的溫度條件下孵放，分成不同的時間段，在相應的時間內進行取樣，然后對毒素含量進行測量。【2】

三、酸堿處理熱原的處理方法

血液作為人體的液體組織，有著一定的堿性，正常人的血液會將血液酸堿度保持一個相對恒定的狀態，通常是以PH值作為衡量標準，其范圍一般在7.35～7.45，而人體的生命活動耐受的最大變動的那個范圍是6.9～7.8，酸堿度對機體有著較為明顯的作用。一般情況下，酸堿度對神經肌肉組織的興奮程度可以產生一定的影響。當血液酸堿度變化不明顯時，說明人的血液酸堿度是正常的，這是由于人的血液中有著抗堿和抗酸的物質，能夠對人體系統形成一定的緩沖作用，對腎臟排泄、肺呼吸等都有一定的影響。一旦出現身體疾病或者其他不良的反應，身體就會出現酸堿失衡，導致系統紊亂，我們在臨床上把這樣的現象稱為酸堿中毒。結合我們日常酸堿處理的熱原方法，我們進行以下分析和論述。

（一）酸孵放

靜脈注射免疫球蛋白中內毒素在酸孵放中會產生影響，5%的低pH（pH4±0.2）靜脈注射丙種球蛋白中，分別按5SEU/ml及2.5EU/ml的量加入內毒素，搖勻，采用家兔法來對熱原取樣進行監測，另將樣品于24±1℃孵放24d，同樣用家兔法檢測熱原。

（二）堿處理

利用家兔法和鱟試法對熱源的合格度進行檢測，將20%的人血白蛋白制品利用注射鹽水或者其他水進行稀釋，將其稀釋成10%的濃度，用1mol/L的Na0H把PH調到10.0±0.2，之后加入一定量的標準內的毒素，分解成3份，每份濃度變成4EU/mL，其中兩份的Na十濃度調為40mol/L，進行除菌過濾，然后放于37±0.5℃、57±0.5℃孵放。而另外一份則將Na十濃度調為160mol/L，除菌過濾后則在37±0.5℃孵放，在不同的時間段來取樣進行測試，利用鱟試法來測量內毒素含量，并觀察其樣品外觀。

四、結果

內毒素濃度為4EU/mL的生理鹽水樣品，在不同PH（4、10）及不同的溫度下進行孵放。同時在不同的時間段，利用鱟試法進行檢測，檢測出的結果是：pH4，經不同溫度孵放24小時之內，內毒素含量均下降較快，至35h均降到1（EU/mL；PH10，孵放溫度越高內毒素下降越快，57℃孵放35h降為陰性，37℃孵放76h降為陰性，而20℃、28℃下%h內毒素濃度只下降到1EU/mL，見圖l、圖2。

五、結語

隨著血液制品分離純化工藝的發展，血液制品的種類在不斷增加，其適應癥也在不斷被發現，這些使得用于臨床疾病治療的血液制品數量顯著上升。根據國家食品藥品監督管理總局發布的相關指導原則，生產工藝要具有一定的去除/滅活部分病毒能力，生產過程中應有特定的去除/滅活病毒方法，以提高血液制品的安全性。通過上述酸堿處理的方法可以看出，酸堿處理的血蛋白制品，其檢測的熱原都符合我國相關生物制品的要求和規范，并且在酸孵化后的樣品（少了堿處理），高濃度的內毒素樣品都和孵放前后有著明顯的濃度差異。【3】同時，堿處理的3份高熱原人血白蛋白制品，進行檢測后均熱原合格，符合我國的關于生物制品的規格和要求。

【參考文獻】

【1】李軍英. 生物制品中常用滅活劑的研究進展[J]. 中國生物制品學雜志， 2018， 31（09）：117-120.

【2】耿軍曉， 趙紅星. 血液制品二次包裝工藝分析與研究[J]. 中國包裝工業， 2014（24）：6-7.

【3】蘇峰， 孔冬冬， 周海云，等. 血液制品中病毒去除和滅活方法概述[C]// 中國輸血協會輸血大會. 2014.