奧卡西平對兒童病毒性腦炎繼發(fā)癲癇患者的炎性因子、免疫功能及氧化應(yīng)激的影響

夏順剛 盧 紅

(淄博市婦幼保健院兒科,淄博255029)

癲癇是神經(jīng)元的異常放電導(dǎo)致神經(jīng)功能短暫失調(diào)的慢性疾病，具有反復(fù)發(fā)作等特點(diǎn)。癲癇中有一部分是因?yàn)橹袠猩窠?jīng)系統(tǒng)感染引發(fā)。兒童病毒性腦炎則是中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染常見的疾病，兒童中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染后的免疫炎癥反應(yīng)在兒童癲癇發(fā)生和進(jìn)展過程中起重要作用。臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究也證實(shí)了機(jī)體免疫功能紊亂是癲癇患者常見的癥狀，且許多學(xué)者認(rèn)為機(jī)體的免疫系統(tǒng)參與了癲癇的發(fā)病過程[1-4]。因此，免疫治療癲癇可能也是有效治療癲癇的途徑。目前，治療癲癇的主要手段仍然是藥物治療。奧卡西平是一種新型抗癲癇藥物，對于局灶性發(fā)作癲癇具有療效好、副作用小、藥物保留率高、耐藥性低等特點(diǎn)[5]。本研究旨在了解奧卡西平對兒童病毒性腦炎繼發(fā)癲癇患者治療效果、免疫功能、炎性因子和氧化應(yīng)激功能的影響。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1臨床資料 選取于2014年 4 月至2017年10月我院的新診斷癲癇兒童患者59例作為實(shí)驗(yàn)組，其中男27例，女32例，年齡2.6～15歲，平均(6.88±7.11)歲。其中全身性發(fā)作28例，局部性發(fā)作31例。根據(jù)國際抗癲癇聯(lián)盟的2014診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選。本次研究由我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。另取同期收集的健康兒童35例作為對照。

1.1.2入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn) 入選標(biāo)準(zhǔn)：①首次診斷為癲癇，無抗癲癇藥物服用史；②無明確器質(zhì)性病變；③有過病毒性腦炎病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有進(jìn)展性神經(jīng)系統(tǒng)疾病或精神疾病患者；②奧卡西平過敏者；③心肝腎功能不全或器官衰竭；④合并全身感染或其他疾病。

1.2方法

1.2.1治療方案 給予奧卡西平口服起始濃度為5～10 mg/kg體重，1周后每天劑量增加5 mg/kg體重，劑量維持在20～30 mg/kg體重，持續(xù)給藥8個(gè)月；期間不得給予其他抗癲癇藥物。

1.2.2觀察指標(biāo)及檢測方法 ①治療前6周癲癇發(fā)作的次數(shù)和治療后半年月發(fā)作次數(shù)比較。分為完全控制、顯效、有效、無效及惡化[6]。②在治療前后抽取患者及對照人群血液，空腹肘靜脈血3 ml，2 ml血離心后取上清，置于-20℃保存待檢。ELISA檢測IL-1β、IL-8、IL-6及TNF-α表達(dá)，immunoway ELISA試劑盒購自北京致力生科科技有限公司。BD 全自動(dòng)多色分析儀分析CD3+、CD4+及CD8+等T細(xì)胞亞群，試劑由BD配套并通過北京致力生科科技有限公司訂購。1 ml血進(jìn)行機(jī)體活性氧(Reactive oxygen species，ROS)、丙二醛(Malondi-aldehyde,MDA)及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)檢測，試劑盒購自南京檢測生物技術(shù)研究所。

2 結(jié)果

2.1治療效果 經(jīng)奧卡西平治療后，隨訪觀察6個(gè)月，發(fā)現(xiàn)患者病情完全控制的有18例(全身性發(fā)作6例，局限性發(fā)作12例)，占30.51%；顯效的有16例(全身性發(fā)作9例，局限性發(fā)作7例)，占27.11%；有效的有15例(全身性發(fā)作6例，局限性發(fā)作9例)，占25.42%；無效為10例(全身性發(fā)作7例，局限性發(fā)作3例)，占16.95%；沒有發(fā)現(xiàn)經(jīng)奧卡西平治療后病情繼續(xù)惡化的患者。

2.2治療前后病毒性腦炎繼發(fā)癲癇患者血清炎性因子的變化情況 實(shí)驗(yàn)組患者血清中的炎性因子IL-1β、IL-8、IL-6及TNF-α在治療前后都高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療后患者的IL-1β、IL-8、IL-6及TNF-α水平均顯著低于其治療前，并且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.3治療前后病毒性腦炎繼發(fā)癲癇患者T淋巴細(xì)胞亞群的變化情況 患者治療前后的外周血CD3+、CD4+及CD8+T淋巴細(xì)胞亞群與健康組人群比較發(fā)現(xiàn)：無論治療前或治療后患者的CD3+、CD4+T細(xì)胞數(shù)量均低于健康組人群，并且治療前患者外周血的CD3+、CD4+T細(xì)胞數(shù)量均低于治療后；CD8+T細(xì)胞數(shù)量則在患者治療前后的外周血中均高于健康組，同時(shí)發(fā)現(xiàn)治療后的CD8+T細(xì)胞數(shù)量低于治療前(見圖1)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.4治療前后病毒性腦炎繼發(fā)癲癇患者氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化情況 治療前和治療后患者的氧化應(yīng)激指標(biāo)ROS、MDA及SOD與健康組人群比較發(fā)現(xiàn)：無論治療前或治療后患者的ROS、MDA均高于健康組人群，并且治療前患者的ROS、MDA均高于治療后；SOD則在患者治療前后低于健康組，同時(shí)發(fā)現(xiàn)治療后的SOD高于治療前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表1 治療前后患者與健康人群炎性因子的比較(pg/ml)

Tab.1 Comparison of inflammatory factors in patients and controls before and after treatment(pg/ml)

GroupsTimeIL-1βIL-8IL-6TNF-αControl group(n=35)6.75±0.324.08±0.405.57±0.537.45±0.91Exprimental group(n=59)Before treatment26.73±4.031)26.09±2.351)30.66±3.641)42.05±5.781)After treatment11.22±2.881)2)11.04±2.211)2)15.69±1.951)2)21.34±2.751)2)

Note：Compared to the control group,1)P<0.05;compared to before treatment,2)P<0.05.

表2 治療前后患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群與健康人群的比較(%)

Tab.2 Comparison of peripheral blood T lymphocyte subsets in patients before and after treatment and controls(%)

GroupsTimeCD3+T cellCD4+T cellCD8+T cellControl group(n=35)68.75±4.3547.11±2.3920.12±1.09Experimental group(n=59)Before treatment53.21±3.711)28.44±2.141)33.12±3.361)After treatment62.11±2.891)2)39.12±2.871)2)25.53±2.881)2)

Note：Compared to the control group,1)P<0.05;compared to before treatment,2)P<0.05.

表3 治療前后患者氧化應(yīng)激指標(biāo)與健康人群的比較(%)

Tab.3 Comparison of oxidative stress indexes in patients before and after treatment and controls(%)

GroupsTimeROSMDA(μmol/ml)SOD(U/ml)Control group(n=35)4 536.32±298.325.62±1.95161.27±19.89Experimental group(n=59)Before treatment10 210.58±400.901)20.12±2.531)66.74±15.121)After treatment6 855.41±354.121)2)11.11±3.361)2)96.12±17.511)2)

Note：Compared to the control group，1)P<0.05；compared to before treatment，2)P<0.05.

圖1 治療前后T淋巴細(xì)胞亞群流式檢測結(jié)果Fig.1 Results of Flow test for T lymphocyte subsets before and after treatment

3 討論

癲癇是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染后常發(fā)的疾病，其發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜。越來越多的研究認(rèn)為免疫功能紊亂是其發(fā)病機(jī)制之一[7]。兒童病毒性腦炎是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染。 中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染后干擾了神經(jīng)免疫系統(tǒng)的正常作用，促使腦實(shí)質(zhì)、腦膜的炎癥改變，并導(dǎo)致神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞凋亡、壞死，最后引發(fā)局部中樞神經(jīng)組織的變性。這既有病毒本身對神經(jīng)細(xì)胞的破壞又有免疫介導(dǎo)的炎癥損害參與其中，這些損害后遺癥容易導(dǎo)致癲癇的發(fā)生[8]。另外，炎癥的發(fā)生能促使機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，氧化應(yīng)激又會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng)。這種閉環(huán)式的促進(jìn)作用能夠加劇損傷。有研究顯示脂質(zhì)過氧化及自由基反應(yīng)在癲癇發(fā)生與發(fā)展的過程中起到了重要作用[9，10]。綜上所述，細(xì)胞因子、氧化應(yīng)激等均參與了癲癇的病理過程。因此，了解神經(jīng)免疫功能及氧化應(yīng)激在兒童病毒性腦炎繼發(fā)癲癇中的作用，為治療和預(yù)防此類疾病奠定基礎(chǔ)。

奧卡西平是一種抗癲癇的新型藥物，對部分性發(fā)作類型治療效果明顯。它是卡馬西平的酮基衍生物，具有高抗驚活性，能較好地抑制強(qiáng)制性痙攣，起效快，及時(shí)阻斷神經(jīng)元異常放電，穩(wěn)定鎮(zhèn)靜。奧卡西平對兒童毒性小，對肝臟損害弱，不會(huì)影響兒童的生長發(fā)育。奧卡西平單藥治療可取得與卡馬西平、丙戊酸鈉相當(dāng)?shù)呐R床療效[11]。奧卡西平對兒童病毒性腦炎繼發(fā)癲癇患者的免疫系統(tǒng)及氧化應(yīng)激反應(yīng)臨床研究相對較少，本研究旨在探討奧卡西平在兒童病毒性腦炎繼發(fā)癲癇患者的治療作用及對其免疫功能和氧化應(yīng)激等生化指標(biāo)的影響。

本研究表明在奧卡西平治療后，總有效率高達(dá)83.05%，說明奧卡西平治療兒童病毒性腦炎癲癇可消除或緩解患者的臨床癥狀，降低發(fā)作頻率，有效控制癲癇復(fù)發(fā)。

已有的研究證實(shí)兒童癲癇發(fā)作可激活神經(jīng)細(xì)胞并刺激神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞釋放大量炎癥介質(zhì)，包括IL-1β、IL-6、TNF-α。兒童癲癇患者的海馬中檢測到IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性指標(biāo)，而在正常對照組的標(biāo)本中未發(fā)現(xiàn)[12-15]。還有研究發(fā)現(xiàn)兒童癲癇發(fā)作時(shí),IL-1β、TNF-α可誘導(dǎo)IL-8的表達(dá)，引起免疫細(xì)胞在組織內(nèi)浸潤、積聚和釋放相關(guān)的生物活性物質(zhì)進(jìn)而導(dǎo)致組織的炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果證實(shí)了兒童病毒性腦炎繼發(fā)癲癇患者機(jī)體中的炎性因子表達(dá)、免疫功能異常現(xiàn)象，檢測發(fā)現(xiàn)兒童癲癇患者IL-1β、IL-8、IL-6及TNF-α表達(dá)增高，利用奧卡西平治療兒童病毒性腦炎癲癇患者能有效降低機(jī)體中的這些炎癥因子的水平。免疫功能改變可以從細(xì)胞免疫改變和體液免疫兩方面來闡述，T淋巴細(xì)胞不僅是細(xì)胞免疫的承擔(dān)者也對體液免疫有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用，而 CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞則是反映T淋巴細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)CD3+、CD4+T細(xì)胞在兒童病毒性腦炎癲癇患者數(shù)量低于健康兒童，經(jīng)奧卡西平治療后患者的CD3+、CD4+T細(xì)胞數(shù)量高于治療前；而CD8+T細(xì)胞在患者血液中數(shù)量高于健康者，治療后CD8+T細(xì)胞數(shù)量比治療前有所降低。這些結(jié)果說明奧卡西平不僅治療病毒性腦炎癲癇患者的發(fā)病，也有效降低了癲癇病引發(fā)的炎癥和改善系統(tǒng)免疫功能。

炎癥反應(yīng)增強(qiáng)會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激的發(fā)生，導(dǎo)致機(jī)體ROS異常增多。研究證實(shí)ROS在癲癇病理過程中發(fā)揮重要作用，癲癇發(fā)作時(shí)ROS 含量顯著增加、SOD明顯降低[16，17]，脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA增高。本研究發(fā)現(xiàn)兒童病毒性腦炎繼發(fā)癲癇患者的ROS、MDA水平高于健康人群，而SOD活力低于健康兒童；經(jīng)過奧卡西平治療后兒童癲癇患者的ROS、MDA含量低于治療前，而SOD高于治療前。

綜上所述，奧卡西平不僅能從癥狀上治療兒童癲癇，也能有效降低兒童癲癇引發(fā)的炎癥和免疫功能紊亂及降低氧化應(yīng)激水平，從另一個(gè)角度有效保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)揮治療和減輕癲癇癥狀的作用。