龍膽瀉肝湯抑制葡萄膜炎大鼠Notch信號通路活化的作用△

殷學偉 劉濱 魏慧霞 唐凱 畢宏生 郭大東

葡萄膜炎是一類臨床常見、反復發作的自身免疫性眼病，可造成眼組織不可逆性損害。輔助性T細胞17(T helper 17，Th17)和調節性T細胞(regulatory T cell，Treg)是近年來研究人員發現的CD4+T淋巴細胞亞群，其中Th17細胞介導免疫應答，而Treg細胞介導免疫抑制，二者在功能上互相拮抗[1]。在葡萄膜炎的發生發展過程中，Th17和Treg細胞發揮了重要作用。Notch信號通路是調節炎癥反應和自身免疫性疾病、維持機體免疫平衡的重要信號通路，可通過調控na?ve CD4+T 細胞向Th17、Treg細胞的分化而影響Th細胞的比例平衡[2]。有研究發現，龍膽瀉肝湯(Longdan Xiegan Decoction，LXD)具有較強的免疫調節作用，對前葡萄膜炎有較好的治療效果[3]。動物實驗表明，LXD可有效減少實驗性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)大鼠前房炎癥細胞浸潤，促進機體免疫功能恢復[4]，但是LXD對Notch信號通路的調控以及對Th細胞分化的影響尚未完全清楚。本研究擬通過檢測LXD對EAU大鼠脾臟、淋巴結和眼組織中Notch1、DLL4、白細胞介素10(interleukin 10，IL-10)、IL-17基因和蛋白的表達變化，探討LXD在葡萄膜炎發病過程中對Notch信號通路的調控及對Th17/Treg細胞比例平衡影響的作用，初步闡釋LXD治療葡萄膜炎的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料LXD配方顆粒(產品批號：1311007W，華潤三九醫藥股份有限公司)；FITC-CD4、PE-CD8、PE-IL-17、APC-CD25、 PE-Foxp3(eBioscience公司，美國)；固定破膜試劑盒(BD公司，美國)；miRNA組織/細胞快速提取試劑盒(艾德萊生物科技有限公司，北京)；cDNA逆轉錄試劑盒、2×SYBR Green I試劑盒(QIAGEN公司，德國)；β-巰基乙醇、谷氨酰胺(Amresco公司，美國)；胎牛血清、1640培養液(HyClone公司，美國)；淋巴細胞分離液(Solarbio公司，北京)；大鼠Notch1、DLL4、IL-10、IL-17蛋白ELISA試劑盒(基因美生物科技有限公司，武漢)。……