血清TK1、FOLR1在卵巢癌患者中的表達(dá)及臨床意義*

楊 琴，李雪鋒，龔 鈿，趙紅利，孟宜波

(眉山市人民醫(yī)院：1．婦科；2．ICU，四川眉山 620010)

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)3大惡性腫瘤之一，多發(fā)生于圍絕經(jīng)期的婦女[1]。由于卵巢深陷于盆腔，且卵巢癌患者在發(fā)病早期缺乏特異臨床表現(xiàn)，大部分患者在確診時(shí)已處于晚期。據(jù)統(tǒng)計(jì)報(bào)道[2]，早期卵巢癌患者在得到及時(shí)有效的治療后，其5年生存率在92%左右，而晚期的卵巢癌患者即使進(jìn)行了針對性治療，其5年生存率也只有30%左右，早診斷、早治療是改善卵巢癌患者生存率的重要舉措。胸苷激酶1(TK1)是與細(xì)胞分裂、增殖密切相關(guān)的酶，參與了DNA的合成和損傷修復(fù)[3]，其在胃癌、肝癌、乳腺癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá)[4-6]，并且可以直接通過檢測血清中TK1的水平來反映細(xì)胞增殖情況，方便快捷，因此，TK1對惡性腫瘤診斷和預(yù)后評(píng)估的作用逐漸受到重視。葉酸結(jié)合蛋白1(FOLR1)是一種膜蛋白，可通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用來吸收葉酸[7]，LI等[8]的研究顯示，F(xiàn)OLR1可影響鼻咽癌的耐性藥，魚志琪等[9]的研究顯示，F(xiàn)OLR1的表達(dá)水平與卵巢癌的發(fā)展密切相關(guān)。目前，較少關(guān)于血清TK1、FOLR1與卵巢癌的研究報(bào)道，本研究分析了TK1、FOLR1在卵巢癌患者血清中的表達(dá)及其對卵巢癌的診斷價(jià)值，以期為臨床診治卵巢癌提供新的思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2012年1月至2017年12月在眉山市人民醫(yī)院接受治療的卵巢癌患者50例作為卵巢癌組，另根據(jù)卵巢癌組的一般資料匹配同期在本院接受治療的良性卵巢腫瘤患者50例作為良性卵巢腫瘤組。卵巢癌組患者年齡36～67歲，平均(52.97±9.45)歲。體質(zhì)量42～71 kg，平均體質(zhì)量(48.62±4.21)kg。絕經(jīng)情況：絕經(jīng)38例，未絕經(jīng)12例。國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)分期：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期32例。分化程度：高分化16例，中低分化34例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。腫瘤最大徑：≥5 cm 28例，<5 cm 22例。組織分型：漿液性腺癌38例，黏液性腺癌7例，其他5例。良性卵巢腫瘤組患者年齡33～69歲，平均(53.51±9.69)歲。體質(zhì)量41～70 kg，平均體質(zhì)量(49.38±4.54)kg。絕經(jīng)情況：絕經(jīng)39例，未絕經(jīng)11例。組織分型：黏液性囊腺瘤22例，漿液性囊腺瘤16例，其他12例。2組患者的年齡、體質(zhì)量、絕經(jīng)情況等差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，均衡可比。所有研究對象對本次研究均知情同意，且本研究已通過本院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2納入、排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)卵巢癌組和良性卵巢腫瘤組患者所患疾病均經(jīng)過臨床病理檢驗(yàn)確診；(2)入組前未接受過放化療；(3)卵巢癌組患者均為新發(fā)病例；(4)病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并有其他惡性腫瘤者；(2)預(yù)計(jì)生存時(shí)間低于3個(gè)月者；(3)存在血液系統(tǒng)疾病者；(4)不同意此次研究者。

1.3檢測方法 抽取2組研究對象的空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min，提取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清中TK1、FOLR1的水平。TK1試劑盒購自上海恒斐生物科技有限公司；FOLR1試劑盒購自武漢博士德生物有限公司；全自動(dòng)酶標(biāo)儀為680酶標(biāo)儀，購自美國Bio-Rad公司。嚴(yán)格按照試劑盒說明書指導(dǎo)相關(guān)操作。

1.4實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 由于本研究前后歷時(shí)5年，故按中國藥典2010版附錄XIX B藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則之《生物樣品分析方法的基本要求》制訂實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量控制方法，主要為：每半年更新測試樣本的標(biāo)準(zhǔn)物，每年替換一次新的質(zhì)控樣品，按質(zhì)控樣品水平對測試結(jié)果進(jìn)行修正，使新舊標(biāo)準(zhǔn)物對照的樣本水平相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)控制在RSD10%以內(nèi)，回收率控制在85%～115%，并由本院高年資的檢驗(yàn)醫(yī)師具體負(fù)責(zé)。

2 結(jié) 果

2.1TK1、FOLR1在卵巢癌患者和良性卵巢腫瘤患者血清中的表達(dá) 卵巢癌組患者血清中TK1、FOLR1水平均明顯高于良性卵巢腫瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 TK1、FOLR1在卵巢癌患者和良性卵巢腫瘤患者血清中的表達(dá)

2.2卵巢癌患者血清中TK1、FOLR1水平與臨床病理特征的關(guān)系 卵巢癌患者血清中TK1水平與年齡、絕經(jīng)情況、腫瘤最大徑、組織分型無關(guān)(P>0.05)，與FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。卵巢癌患者血清中FOLR1水平與年齡、絕經(jīng)情況、腫瘤最大徑無關(guān)(P>0.05)，與FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分型有關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 卵巢癌患者血清中TK1、FOLR1的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系

2.3血清TK1、FOLR1對卵巢癌的診斷價(jià)值 將血清TK1、FOLR1指標(biāo)數(shù)據(jù)劃分成若干組段，建立對卵巢癌診斷價(jià)值的ROC分析模型。ROC結(jié)果顯示，血清TK1取1.21 pmol/L時(shí)診斷卵巢癌的靈敏度為0.701，特異度為0.782，ROC曲線下面積為0.786。血清FOLR1取224.16 pg/mL時(shí)診斷卵巢癌的靈敏度為0.883，特異度為0.871，ROC曲線下面積為0.891。見圖1。

注：A為TK1；B為FOLR1

圖1血清TK1、FOLR1診斷卵巢癌的ROC曲線

2.4血清TK1、FOLR1聯(lián)合診斷對卵巢癌的診斷價(jià)值 本研究進(jìn)一步設(shè)計(jì)了TK1、FOLR1聯(lián)合診斷模式：以達(dá)到各指標(biāo)的閾值(TK1=1.21 pmol/L、FOLR1=224.16 pg/mL)為陽性檢出，當(dāng)樣本被判斷2個(gè)指標(biāo)均陽性或均陰性時(shí)，做出陽性或陰性的診斷。若一陽一陰時(shí)則進(jìn)行復(fù)查，復(fù)查不變時(shí)給以FOLR1指標(biāo)結(jié)果。經(jīng)計(jì)算，TK1、FOLR1聯(lián)合診斷模式能進(jìn)一步提高診斷的靈敏度和特異度，分別達(dá)到0.895和0.889。見圖2。

注：A表示偏陽診斷界點(diǎn)(1個(gè)指標(biāo)達(dá)到閾值即給陽性診斷)；B表示偏陰診斷界點(diǎn)(1個(gè)指標(biāo)未達(dá)閾值即給陰性診斷)；C表示聯(lián)合診斷界點(diǎn)(2個(gè)指標(biāo)均達(dá)或不達(dá)閾值，給陽或陰性診斷；若1個(gè)指標(biāo)達(dá)1個(gè)指標(biāo)不達(dá)閾值行復(fù)查，復(fù)查不變?nèi)OLR1結(jié)果)

圖2血清TK1、FOLR1聯(lián)合診斷卵巢癌的ROC曲線

3 討 論

TK1是一種細(xì)胞增殖標(biāo)志物，以三磷酸腺苷為底物，在鎂離子的參與下，可將胸腺嘧啶核苷轉(zhuǎn)化為單磷酸胸腺嘧啶，在合成 DNA 前體中起到重要的作用[10]。TK1是細(xì)胞周期中S期的關(guān)鍵酶，其表達(dá)水平受到S期DNA合成速度的影響，具有細(xì)胞周期依賴性，在G1期表達(dá)水平較低，在G1/S期交界時(shí)TK1水平逐漸升高，一直持續(xù)到G2/M期，之后TK1的表達(dá)水平開始明顯下降[11-12]。由于腫瘤細(xì)胞失去正常細(xì)胞周期性，具有無限增殖的特點(diǎn)，因此，處于S期、G2期的細(xì)胞比例高，腫瘤細(xì)胞內(nèi)大量的TK1被釋放入血，導(dǎo)致血清中的TK1水平升高[13]。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組患者血清中TK1水平均明顯高于良性卵巢腫瘤組(P<0.05)，這主要是因?yàn)槁殉舶┦菒盒阅[瘤，與良性卵巢腫瘤相比，腫瘤細(xì)胞增殖旺盛，DNA合成劇增，血清中的TK1水平更高。此外，本研究結(jié)果顯示，卵巢癌患者血清中TK1的表達(dá)水平與年齡、絕經(jīng)情況、腫瘤最大徑、組織分型無關(guān)(P>0.05)，與FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，可見血清中TK1的表達(dá)水平可反映卵巢癌的FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，這可能是因?yàn)镕IGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均受到細(xì)胞增殖的影響。薄維波[14]的研究顯示，卵巢癌患者血清中TK1水平與FIGO分期、分化程度有關(guān)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，與本研究存在一定差異，這可能是由于2個(gè)研究TK1檢測方法不一致所導(dǎo)致，并且該研究還顯示TK1是卵巢癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這提示TK1對卵巢癌患者的預(yù)后有較好的預(yù)測價(jià)值，在后續(xù)的研究中將進(jìn)一步驗(yàn)證。

FOLR1定位于染色體11q13.3～14.1上，相對分子質(zhì)量為(38～40)×103，其蛋白分子暴露在胞外，由糖基化磷脂酰肌醇錨定在細(xì)胞膜上[15]。FOLR1對葉酸及其衍生物具有高度親和力，可介導(dǎo)細(xì)胞外葉酸進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，由于葉酸可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分裂，當(dāng)葉酸缺乏時(shí)可對腫瘤細(xì)胞的DNA復(fù)制、修復(fù)產(chǎn)生重大的影響，因此，F(xiàn)OLR1的表達(dá)對細(xì)胞分裂、增殖有重要的作用[16]。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌組患者血清中的FOLR1水平均明顯高于良性卵巢腫瘤組(P<0.05)，這說明FOLR1在卵巢癌患者血清中呈高表達(dá)，曾正蓮等[17]的研究顯示，F(xiàn)OLR1在卵巢癌組織中呈高表達(dá)，由于FOLR1可以從細(xì)胞表面脫落至血液中，卵巢癌組織中的FOLR1表達(dá)水平也會(huì)影響到血清中FOLR1的表達(dá)。本研究結(jié)果還顯示，卵巢癌患者血清中FOLR1的表達(dá)水平與年齡、絕經(jīng)情況、腫瘤最大徑無關(guān)(P>0.05)，與FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分型有關(guān)(P<0.05)，這說明卵巢癌患者血清中FOLR1的表達(dá)水平可反映FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分型情況，可能在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。SARA等[18]的研究顯示，卵巢癌患者FOLR1的高表達(dá)與順鉑的靈敏度有關(guān)，可評(píng)估卵巢癌化療耐藥情況，可見FOLR1還有望成為提高卵巢癌化療靈敏度的新靶點(diǎn)。

由于卵巢癌患者在疾病早期無特異性的臨床表現(xiàn)，大部分患者在確診時(shí)已進(jìn)入中晚期，延誤了最佳的治療時(shí)機(jī)，尋找高效的診斷方法一直是臨床關(guān)注的重點(diǎn)。血清腫瘤標(biāo)志物可用于腫瘤的診斷、鑒別、療效評(píng)估、預(yù)后預(yù)測等，且具有檢測方便、重復(fù)檢查性好等特點(diǎn)。TK1、FOLR1均可以通過測量血清中的表達(dá)水平來進(jìn)行相關(guān)診斷，并且均可通過酶聯(lián)免疫吸附法來進(jìn)行測定，具有方便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示，血清TK1取1.21 pmol/L時(shí)對卵巢癌的靈敏度為0.701，特異度為0.782，曲線下面積為0.786。血清FOLR1取224.16 pg/mL時(shí)對卵巢癌的靈敏度為0.883，特異度為0.871，曲線下面積為0.891。若將TK1、FOLR1這2個(gè)指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用，則靈敏度和特異度還有一定的升高。糖類抗原125(CA125)是臨床廣泛應(yīng)用的卵巢癌血清腫瘤標(biāo)志物，吳磊等[19]的研究結(jié)果顯示，血清CA125對卵巢癌的靈敏度為76.67%，特異度為60.00%，曲線下面積為0.683，與之對比，說明血清TK1、FOLR1對卵巢癌具有較高的診斷價(jià)值，且FOLR1的靈敏度、特異度和曲線下面積均高于TK1、CA125，說明其漏診率、誤診率更低，診斷價(jià)值更高。

綜上所述，TK1、FOLR1在卵巢癌患者血清中呈高表達(dá)，且TK1的表達(dá)水平與患者的FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，F(xiàn)OLR1的表達(dá)水平與患者的FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分型有關(guān)。血清TK1、FOLR1對卵巢癌具有較高的診斷價(jià)值，兩者聯(lián)合診斷時(shí)能夠一定程度提高靈敏度和特異度。由于本研究選取病例數(shù)較少，且為單中心研究，血清TK1、FOLR1在卵巢癌中的應(yīng)用價(jià)值還有待多中心、大樣本量的研究進(jìn)行驗(yàn)證。

4 結(jié) 論

TK1、FOLR1在卵巢癌患者血清中呈高表達(dá)，且表達(dá)水平可反映患者的部分臨床病理參數(shù)，尋找卵巢癌靈敏度和特異度較高的診斷指標(biāo)是臨床醫(yī)生關(guān)注的重點(diǎn)，目前未見TK1聯(lián)合FOLR1診斷卵巢癌的報(bào)道，本研究發(fā)現(xiàn)聯(lián)合診斷模式可以進(jìn)一步提高對卵巢癌的診斷價(jià)值。