羅勒多糖對宮頸癌Hela細胞增殖凋亡的影響

王瑞 許曉義 張波 宋高臣

【摘 要】 目的：從細胞生物學角度觀察羅勒多糖體外對人宮頸癌Hela細胞增殖的抑制作用。方法：1）Hela細胞培養及傳代。2）Hela細胞分組及給藥處理：陰性對照組（不加任何藥物）、BPS低劑量組（25μg/mL）、BPS中劑量組（50μg/mL）、BPS高劑量組（100μg/mL）、陽性對照組（紫杉醇50μg/mL）。3）MTT法檢測細胞生長增殖情況;流式細胞技術檢測細胞凋亡。結果：陰性對照組、羅勒多糖25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL劑量及陽性對照組（紫杉醇50μg/mL）作用Hela細胞24h后的細胞抑制率分別為0.3%、18.1%、29.8%、85.2%、90.1%，羅勒多糖對Hela細胞增殖的抑制作用與藥物濃度正相關（P<0.01）;羅勒多糖25μg/mL劑量作用Hela細胞24h、48h、72h后，凋亡率分別為 2.8%、9%、29%，細胞凋亡率與藥物作用時間正相關（P<0.01）。結論：1）羅勒多糖體外對人宮頸癌Hela細胞增殖生長具有良好的抑制作用。2）羅勒多糖體外對人宮頸癌Hela細胞增殖作用和其濃度密切相關。

【關鍵詞】 羅勒多糖;Hela細胞;細胞凋亡;流式細胞術

羅勒多糖（Basil polysaccharide，BPS）系從中國傳統化淤名方中的一味具有抗血小板作用的藥物全草植物羅勒中經分離、提取得到的藥物有效成分[1]。雖然有研究表明羅勒多糖能抑制一些人腫瘤細胞增殖[2]、粘附[3]、遷移[4]并誘導其凋亡[5]，但關于其對于宮頸癌的治療作用研究較少，偶有報道。因此，本實驗以宮頸癌Hela細胞為研究對象，通過MTT檢測細胞生長增殖實驗、流式細胞技術來探討BPS對宮頸癌Hela細胞相關生物學行為的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

紫杉醇購自佳木斯市醫藥公司;羅勒多糖提取物由佳木斯醫學院天然藥物實驗室自提;RPMI 1640培養基（批號：8115400）購自美國Gibco公司;新生牛血清購自杭州四季青工程材料有限公司。人宮頸癌Hela細胞由佳木斯醫學院基礎醫學院實驗室提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 常規細胞培養人宮頸癌Hela細胞 按照常規細胞培養方法培養人宮頸癌Hela細胞。

1.2.2 藥物配制 羅勒多糖溶液：取1μL 10mg/mL羅勒多糖儲備液于EP管中，加入9μL DMSO 溶液稀釋至10μL，使之濃度為1mg/mL，再將稀釋后的藥物用2%的FBS-DMEM或RPMI 1640培養液稀釋，使藥物終濃度分別為25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL。另取紫杉醇母液，DMSO溶解稀釋成50μg/mL濃度。

1.2.3 MTT法檢測羅勒多糖對宮頸癌Hela細胞的抑制作用 取生長狀態為對數生長期的Hela細胞，胰蛋白酶消化，1000rpm離心5min，混勻制成懸液，調整濃度為5×104mL

3 討論

羅勒為唇形科羅勒屬植物（Ocimum basilicum L.var.pilosum（Willd.） Benth），又名九層塔、氣香草等。性溫昧辛。有疏風行氣，化濕消食、活血、解毒之功能。用于外感頭痛、食脹氣滯、脘痛、泄瀉、月經不調、跌打損傷、蛇蟲咬傷、皮膚濕瘡、癮疹痛癢等癥的治療[6]，羅勒多糖是其有效成分。

本實驗研究結果顯示，不同劑量羅勒多糖作用人宮頸癌Hela細胞24h后，相對陰性對照組，羅勒多糖各劑量組及陽性對照組（紫杉醇50μg/mL）的細胞增殖抑制率和凋亡率都升高，BPS干預Hela細胞后，24h、48h、72h各時間點用藥組細胞均出現明顯的凋亡，并且凋亡率隨作用時間延長而相應增加。所以羅勒多糖體外對人宮頸癌Hela細胞增殖生長具有良好的抑制作用而且增殖作用和其濃度密切相關。

參考文獻：

[1] Feng B，Zhu Y，Su Z，et al.Basil polysaccharide attenuates hepatocellular carcinoma metastasis in rat by suppressing H3K9me2 histone methylation under hepatic artery ligation-induced hypoxia[J].International Journal of Biological Macromolecules，2017，107（Pt B）：S0141813017326983.

[2] 李路，李蘭，肖麗，等.羅勒多糖對紫杉醇抑制肺腺癌A549細胞增殖作用的影響[J].山東中醫雜志，2016，35（06）：554-557.

[3] 羅勒多糖調節上皮間質轉化抑制肝癌侵襲轉移的機制研究[D].廣州中醫藥大學，2015.

[4] 朱慶均，閆丹丹，張成華，等.羅勒多糖抑制TGF-β誘導的A549細胞侵襲運動能力研究[J].中華腫瘤防治雜志，2017，24（13）：875-880.

[5] 朱慶均，連松剛，李蘭，等.羅勒多糖對HLECs中VEGFR-2/3表達的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2016，（03）：342-346.

[6] Lv J，Shao Q，Wang H，et al.Effects and mechanisms of curcumin and basil polysaccharide on the invasion of SKOV3 cells and dendritic cells[J].Molecular Medicine Reports，2013，08（05）：1580-1586.