不同年份陳艾的總黃酮、總多糖研究

龔 敏，盧金清

（湖北中醫藥大學／湖北省藥用植物研發中心，武漢 430065）

艾（Artemisia argyi）又名冰臺、醫草、黃草艾蒿，為菊科蒿屬植物，易繁衍生長，是一味藥用和食用歷史悠久的民俗藥材。入藥多用生艾，灸多用熟艾，又稱陳艾，一般保存一年以上的艾葉謂之陳艾。在許多古籍和民間均有對陳艾的流傳，如《孟子·離婁上》中記載“七年之病，求三年之艾”。艾葉中的活性成分包括揮發油、黃酮、多糖、有機酸等，目前針對化學成分的研究以揮發油最多。艾葉中的總黃酮和總多糖均具有抗氧化作用［1，2］，此外艾葉 多糖 具有 降 血糖作用［3］，且對體外培養巨噬細胞具有免疫調節功能［4］。試驗對不同儲存年份陳艾中的總黃酮和總多糖進行含量測定，闡明陳艾中總黃酮和總多糖含量隨時間變化的趨勢，從科學的角度完善論證了陳艾的使用價值。

1 材料與方法

1.1 藥材

藥材采摘于湖北省蘄春縣蘄艾基地，經湖北中醫藥大學張秀橋教授鑒定為菊科植物艾的干燥葉。

1.2 儀器

Sartorius CPA225D型電子分析天平，d＝0.01 mg；JY1002 型電子天平，d＝0.01 g；HH-S4 型數顯恒溫水浴鍋，常州普天儀器制造公司；UV-3200型紫外可見分光光度計，MAPADA儀器有限公司；SHZ-D（Ⅲ）型循環水真空泵。

1.3 試劑

蘆丁對照品 （批號為 YM0316SA13，HPLC≥98%）、無水葡萄糖對照品（批號為B21882，HPLC≥98%）購自上海源葉生物科技有限公司，95%乙醇、氫氧化鈉、九水合硝酸鋁、亞硝酸鈉、苯酚、濃硫酸等，以上試劑均為分析純。

1.4 總黃酮含量的測定

1.4.1 對照品溶液的制備 精密稱定蘆丁對照品適量于容量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，精密量取2 mL至5 mL量瓶中，加60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，得 0.25 mg／mL 對照品溶液［5］。

1.4.2 供試品溶液的制備 精密稱定樣品 （剪碎）1.0 g至錐形瓶中，精密加入60%乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率 250 W，頻率 40 kHz）0.5 h，放冷，加乙醇補足重量，搖勻，濾過，取續濾液1 mL置于20 mL容量瓶中，加醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.4.3 標準曲線的制備 精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL［6］，分別置于 25 mL 容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，各加水至7 mL，混勻，放置6 min，再加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min；再加氫氧化鈉溶液10 mL，最后加水至刻度，搖勻，放置15 min，以等量水替代供試液為空白校正，紫外-可見分光光度法在510 nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1.5 總多糖含量的測定

1.5.1 對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對照品1.00 mg至10 mL量瓶中，加適量水溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（每1 mL中含無水葡萄糖0.1 mg）。

1.5.2 供試品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的樣品0.5 g至50 mL燒瓶中，加25 mL水，回流2 h，濾過，濾渣加25 mL水，回流1 h，濾過，合并2次濾液，濃縮至20 mL，加100 mL 95%乙醇至含乙醇量不低于80%，靜置12 h，減壓抽濾，沉淀用熱水溶解，移至50 mL容量瓶中定容，濾過，取續濾液0.5 mL至10 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

1.5.3 標準曲線的制備 精密吸取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL［7］，分別置于具塞試管中，分別加水至2.0 mL，各精密加入5%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速精密加入濃硫酸5 mL，搖勻，放置10 min，置于40℃水浴中保溫15 min，取出后迅速冷卻至室溫，以相應的試劑為空白。按紫外-可見分光光度法在487 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

2 結果與分析

2.1 總黃酮含量的測定

2.1.1 測定波長的選擇 根據顯色后對照品溶液和供試品溶液在紫外-可見分光光度的測定，總黃酮對照品溶液與蘄艾中總黃酮制成的供試品溶液在510 nm處均有最大且穩定吸收，故選擇測定波長為510 nm。

2.1.2 標準曲線的繪制 按紫外-可見分光光度法在510 nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，計算回歸方程為A＝11.853 0C-0.001 7（r＝0.999 3）， 蘆丁在 0.009 7～0.048 6 mg／mL 與吸光度呈良好線性關系。

2.1.3 精密度、穩定性、重復性和加樣回收率考察為了對該分析方法進行綜合評估，進行了精密度試驗、穩定性試驗、重復性試驗和加樣回收率試驗，RSD值均小于3%，紫外-可見分光光度計精密度符合要求，供試品溶液在60 min內穩定，該分析方法可靠、重復性良好。加樣回收率試驗結果見表1。

表1 總黃酮加樣回收率試驗結果

2.1.4 樣品測定 精密吸取供試品溶液2.0 mL至25 mL 量瓶中，加水至 6.0 mL，照“1.4.3”的方法，自“加5%亞硝酸鈉溶液1 mL”起測定吸光度，同時取供試品溶劑2 mL，除不加供試品溶液外，其余操作同上，作為空白，根據標準曲線計算出供試品溶液中蘆丁含量，測定結果見表2。

2.2 總多糖含量測定

2.2.1 測定波長的選擇 根據顯色后對照品溶液和供試品溶液在紫外-可見分光光度的測定，無水葡萄糖對照品溶液與蘄艾中總多糖制成的供試品溶液在487 nm處均有最大穩定吸收，故選擇測定波長為487 nm。

2.2.2 標準曲線的繪制 經計算，得回歸方程為A＝58.958 0C-0.041 1（r＝0.999 3），葡萄糖在 0.108 9～0.713 8 mg／mL與吸光度呈良好線性關系。

2.2.3 精密度、穩定性、重復性和加樣回收率考察為了對該分析方法進行綜合評估，進行了精密度試驗、穩定性試驗、重復性試驗和加樣回收率試驗，RSD值均小于3%，紫外-可見分光光度計精密度符合要求，供試品溶液在60 min內穩定，該分析方法可靠、重復性良好。加樣回收率試驗結果見表3。

表2 陳艾中總黃酮含量測定結果

表3 總多糖加樣回收率試驗結果

2.2.4 樣品含量測定 精密吸取供試品溶液1.0 mL，加水至 2.0 mL，按“1.5.3”的方法，自“各精密加入5%苯酚溶液1 mL”起測定吸光度，根據標準曲線計算出供試品溶液中總多糖含量，測量結果見表4。

3 討論

不同年份蘄艾總黃酮和總多糖含量隨儲存時間變化趨勢如圖1所示，總黃酮含量逐年升高，第3年到達峰值，后急劇下降；總多糖含量逐年下降。

已有藥理研究證明，艾葉中的總黃酮和總多糖均具有良好的抗氧化、清除自由基和有效阻止脂質過氧化引起細胞破壞的功效［8］，且不良反應較小，有望作為天然抗氧劑甚至發揮抗癌防癌的作用而得到廣泛開發應用。古有記載，“凡用艾葉，須用陳久者，治令細軟，謂之熟艾，若生艾灸火，則傷人肌脈”，陳艾應用于艾灸的歷史悠久，從傳統艾灸發展到現代艾灸，傳統艾灸有煙和火，安全性不夠且操作不便，現代艾灸根據需要在艾條中添加藥物粉末或隔姜、蒜、鹽等使用，應用范圍更加廣泛，陳艾灸火燃燒時艾絨熱力溫和，直達深部，功效強勁。艾灸產生的煙霧成分復雜，除揮發油成分及其氧化產物外［8，9］，還有抗自由基成分［10］，這些具有清除自由基和過氧化脂質作用的物質包括艾葉中的總黃酮和總多糖成分。隨著儲存時間的延長，三年陳艾中的總黃酮含量達到峰值，總多糖含量還未劇烈下降。市面上很多普通消費者甚至商家錯誤地認為艾葉放置時間越久越好，造成了市場混亂的現象，不利于艾產業的健康發展，試驗從總黃酮和總多糖兩個方面為三年陳艾的使用價值提供了佐證，具有一定指導意義。

表4 陳艾中總多糖含量測定結果

圖1 不同年份陳艾總黃酮、總多糖含量變化趨勢