miRNA-23a表達與晚期乳腺癌全切除術后的預后關系分析

張 蘭 崔利民 付 倩 張文濤 金 焰 霍彥平

乳腺癌是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的惡性腫瘤[1]。目前，全切除術是晚期乳腺癌常見的外科手術，可有效的切除患者的腫瘤組織，抑制癌細胞擴散。但術后仍有部分患者病情惡化而出現復發轉移，故此其預后評估也逐漸受到關注和重視[2]。有研究顯示，miRNA是1種小分子的單鏈非編碼RNA，在調節細胞增殖、存活、腫瘤血管生成、入侵和轉移中具有重要作用，其中miRNA-23a表達在乳腺癌的轉移復發中存在異常，但其機制尚不明確[3-4]。對此，本研究通過檢測晚期乳腺癌全切除術后患者的miRNA-23a表達，探討其與晚期乳腺癌全切除術后患者的預后關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年3月至2017年3月本院晚期乳腺癌全切除術后患者160例，納入標準：①經臨床癥狀、實驗室、影像學等檢查證實為乳腺癌[5]；②就診前1個月無免疫、放化療、抗感染等治療史；③無精神病病史；④患者或家屬簽署知情同意書；排除標準：①妊娠及哺乳特殊人群；②血液性疾病；③有心、肝、腎等嚴重性疾病；④拒絕或終止本次研究者。其中年齡30～68歲，平均年齡(48.52±17.53)歲，體質量指數(BMI)(19.06～30.40)kg/m2，平均BMI(24.21±4.06)kg/m2，腫瘤類型：導管癌18例，小葉癌15例，腺癌伴粉刺樣癌12例，其他類型6例，同期選取健康人員160例，年齡26～72歲，平均年齡(48.53±17.55)歲，BMI(19.06～30.13)kg/m2，平均BMI(24.22±4.08)kg/m2，為本院體檢中心經健康體檢合格的正常人，輔助檢查中血、尿常規檢查，血清肝、腎功能生化指標，相關激素的標記免疫分析指標均在正常范圍，無心、肺、腎等器官器質性病變，本次研究已經我院倫理委員會審批且通過，兩組比較無顯著差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

血清抽取：給予所有患者術前(出院日)、術后及健康人員晨起空腹抽取上臂靜脈血3 ml于無菌試管中，室溫靜置30 min，待血液自然凝固后3 500 r/min離心 10 min，收集上層血清，標本置-80 ℃ 保存。總RNA提取：按照總RNA提取試劑(北京Tiangen公司)的說明書提取，水溶解后采用分光光度計測定RNA的濃度和純度，待吸光度(A260/280nm)位于1.8～2.1之間可用于后續逆轉錄。逆轉錄：按逆轉錄試劑盒說明書操作對miRNA-23a進行逆轉錄反應，miRNA-23a莖環逆轉錄反應引物為：5'-CGTCGCTACATCCAG7rrGAG-CATATGCGACGCTrC-CAGT-3'，由上海生工生物工程有限公司負責設計合成。反應條件：42 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，4 ℃ 10 min。反應產物置于-20 ℃保存。實時熒光定量PCR：應用SYBR Green FQ-PCR試劑盒(Applied Biosystems公司)進行檢測。miR-23a：上游引物(F)：5'-，ITIHCAGACCCCAGGCAG-GCACA-3'，下游引物(R)：5'-TCCATCAGCGTCAA-CACCATCA-3'；本實驗設置復孔3個，采用u6基因作為內參，每個樣品測定3次，miRNA表達量變化采用與u6基因循環閾值比較進行確定，U6 F：5'-GCGCGTCGTGAAGCGTYC-3'，R：5'-GTGCAGGGT-CCGAGGT-3'。PCR循環參數:95 ℃ 3 min，95 ℃12 s，62 ℃40 s，共40個循環。

1.3 觀察指標和標準

在62 ℃采集熒光信號，并用熒光定量PCR儀自帶軟件進行熔解曲線分析，miR-23a的相對表達水平以2-ΔCt法計算，公式：ΔCt =[(樣本CtmiRNA-23-樣本CtU6)。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 所有研究對象的血清miRNA-23a表達量比較

患者術后血清miRNA-23a表達量明顯低于健康人員，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 所有研究對象的血清miRNA-23a表達量比較

2.2 乳腺癌術前、術后患者血清miRNA-23a表達量比較

患者術后血清miRNA-23a表達量明顯高于術前，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 乳腺癌術前、術后患者血清miRNA-23a表達量比較

2.3 乳腺癌術后復發轉移血清miRNA-23a表達量及變化量比較

隨訪12個月后發現乳腺癌術后復發轉移有50例，無復發轉移110例，同時在術后3、6、9、12個月血清miRNA-23a表達量及變化量方面，復發轉移者明顯低于無復發轉移者，復發轉移者術后呈持續下降的趨勢，無復發轉移者術后呈持續升高的趨勢，差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

2.4 miRNA-23a與乳腺癌術后復發轉移的Logistic回歸性分析結果

Logistic回歸性分析結果顯示，血清miRNA-23a表達變化量<20%是患者復發轉移的獨立影響因素(P<0.05)，見表4。

組別例數3個月6個月9個月12個月變化量/%復發轉移者500.48±0.120.41±0.130.35±0.100.29±0.09-7.21±0.02無復發轉移者1100.58±0.200.95±0.331.22±0.231.65±0.4231.56±0.12t3.27411.16825.63422.6252266.504P<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05

表4 miRNA-23a與乳腺癌術后復發轉移的Logistic回歸性分析結果

3 討論

乳腺癌是發生在女性乳腺上皮組織的惡性腫瘤，隨著近年來生活節奏的加快和醫學知識的匱乏導致該發病率有明顯上升的趨勢，已成為當前社會的重大公共衛生問題，多數患者被確診時已是晚期狀態，嚴重危及患者的身體健康[6-7]。目前，臨床主要通過全切除術治療晚期乳腺癌，可有效切除腫瘤組織，控制癌細胞擴散，改善患者病情[8]。但有研究顯示，多數晚期乳腺癌患者的乳腺癌細胞喪失了正常細胞的特性，游離機體后易造成其他病變，從而引起病情復發轉移，故如何針對性確保患者術后預后轉歸有價值的指標具有重要的臨床意義[9]。

據相關研究報道，miRNA是1類短序列、非編碼的單鏈小分子RNA，通過堿基配對識別靶mRNA，引發靶基因的降解或者抑制其翻譯，從而在轉錄后水平負調控靶基因的表達，與癌組織的發生發展、侵襲和轉移有關[10]。其中miRNA-23a是存在脊椎動物的基因組中的1種抑癌因子，可參與基因轉錄后表達調控，從而抑制腫瘤細胞增殖、侵襲，其表達量在晚期乳腺癌的診斷及預后評估中具有重要的參考價值[11]。

對此，本研究通過檢測所有研究對象的血清miRNA-23a表達量，結果發現患者血清miRNA-23a表達量明顯低于健康人員，此與Zhu等[12]的研究結果基本相同，表明血清miRNA-23a表達量與晚期乳腺癌的病理發展有密切關系。這可能由于隨著乳腺癌患者病情的惡化，導致體內的癌細胞嚴重擴散，從而使miRNA對靶基因的降解或者抑制其翻譯的負性調控能力降低，繼而降低miRNA-23a發揮調節正常細胞增殖的能力。同時本研究中，患者術后血清miRNA-23a表達量明顯高于術前(出院日)，此與Shaker等[13]的研究結果基本相同，表明晚期乳腺癌患者行全切除術可有效改善血清miRNA-23a表達量。這有可能由于通過全切除術可有效的切除腫瘤組織，遏止癌細胞的擴散，從而恢復miRNA對靶基因的正常調控，促進miRNA-23a的表達趨于平衡。此外，兩組術后患者均有復發轉移，且在術后3、6、9、12個月血清miRNA-23a表達量及變化量方面，復發轉移者明顯低于無復發轉移者，復發轉移者術后呈持續下降的趨勢，無復發轉移者術后呈持續升高的趨勢，此與胡聶等[14]的研究結果基本相同，表明血清miRNA-23a表達量變化與患者術后的發轉移有關。這有可能由于部分患者術后的癌組織無法被抑制殺死，且隨著病情的發展會加劇擴散分化，進一步侵襲miRNA-23a，使其參與的基因轉錄后表達調控失衡，從而使miRNA-23a的表達量降低。同時，本研究的Logistic回歸性分析結果顯示，血清miRNA-23a表達變化量<20%是患者復發轉移的獨立影響因素，此與Kleivi等[15]的研究結果基本相同，表明miRNA-23a的表達量可作為晚期乳腺癌患者術后復發轉移的評估因子，故術后監測miRNA-23a的表達量對患者的復發轉移有重要意義，若術后患者的miRNA-23a的表達量明顯降低，應及時檢查預防，確保病情穩定。

綜上所述，miRNA-23a與晚期乳腺癌的發生及其全切除術后預后轉歸有關，術后監測血清miRNA-23a表達量可作為評估患者預后的重要指標。