老年高危型人乳頭瘤狀病毒感染后宮頸微環境中細胞因子變化

趙書利 李晨 蘭露莎 劉雨思 楊紅宇 何志旭 舒莉萍

(1貴州醫科大學組織工程與干細胞實驗中心 貴州醫科大學基礎醫學院免疫學教研室 中國醫學科學院成體干細胞轉化研究重點實驗室 貴州醫科大學實驗動物中心，貴州 貴陽 550004;2貴陽市婦幼保健院；3大連醫科大學基礎醫學院)

宮頸癌的發病率及死亡率均占我國女性生殖系統惡性腫瘤的首位，嚴重威脅女性的身心健康〔1,2〕。同各種惡性腫瘤的發病年齡相似，宮頸癌的主要受累人群以老年人群為主。流行病學研究表明，宮頸癌的發生、發展和人乳頭瘤狀病毒(HPV)的感染密不可分，尤其是高危型HPV(HR-HPV)的持續感染〔3,4〕。隨著HPV預防性疫苗的上市及宮頸癌篩查手段的不斷更新普及，目前我國宮頸癌的發病率及死亡率已有所降低〔5,6〕。據報道女性一生有70%～80%概率感染HPV，但大多數人會依靠自身免疫將病毒清除，并不會發展至宮頸上皮內瘤變或宮頸癌，因此早期預判宮頸病變的發展方向并采取正確治療措施尤為重要〔7〕。但目前我國宮頸癌篩查項目只能單一時間節點判斷病變程度，尚不能早期預測疾病的發展，且花費高、痛苦大。研究表明，HR-HPV持續性感染可造成宮頸局部白細胞介素(IL)-2、IL-4等免疫炎性因子的變化，使輔助性T細胞(Th)中的Th1型/Th2平衡失調，輔助HR-HPV感染細胞免疫逃避，使病變持續發展〔8〕。本研究擬通過宮頸局部微環境中免疫炎性因子水平的變化對老年女性HR-HPV持續感染后疾病發生發展方向進行預測。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2018年6月就診于貴陽市婦幼保健院行門診陰道鏡檢查HR-HPV感染的老年女性患者150例，根據病理活檢結果分為無宮頸上皮內病變(NSIL)組、低級別宮頸上皮內病變(LSIL)組和高級別宮頸上皮內病變(HSIL)組各50例。納入標準：①年齡>60歲；②有性生活史；③有完整子宮。排除標準：①急性生殖道炎癥；②3 d內有性生活及陰道給藥；③非宮頸組織惡性腫瘤；④半年內使用免疫抑制劑或免疫調節劑等。3組一般資料比較均無統計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 3組一般資料比較

1.2 標本采集 標本采集均經患者及其家屬同意。患者取膀胱截石位，窺陰器打開陰道，無菌注射器抽取5 ml生理鹽水沖洗宮頸及陰道上1/3，保留10 s后于后穹窿處抽取3～4 ml，室溫狀態下以2 000 r/min離心5 min，保留上清液于-80℃，備炎性因子的檢測。宮頸刷收集脫落細胞保存于4℃，用于DNA的檢測及HPV分型。上述標本收集后取宮頸組織固定于甲醛溶液中用于病理檢測分組，觀察無出血后取出窺陰器結束標本收集。

1.3 細胞因子的檢測 使用BD CBA人細胞因子Th1/Th2/Th17試劑盒(美國BD公司)檢測IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素(IFN)-γ、IL-17A。人轉化生長因子(TGF)-β采用酶聯免疫吸附試驗試劑盒(德國IBL公司)檢測。用巢式聚合酶鏈式反應及焦磷酸測序法對HPV陽性樣本進行分型檢測。

1.4 統計學方法 使用SPSS23.0軟件進行單因素方差分析、LSD-t檢驗、χ2檢驗。

2 結 果

2.1 各組細胞因子的比較 IL-2含量隨宮頸病變分級增加而逐漸降低，各組間比較具有顯著差異(P<0.01)；IL-6含量隨宮頸病變分級增加而逐漸升高，各組間比較具有顯著差異(P<0.01)；其余6種細胞因子含量隨宮頸病變分級增加無顯著變化(P>0.05)。見表2。

表2 各組細胞因子比較

與NSIL組比較:1)P<0.001；與LSIL組比較:2)P<0.001

2.2 各組HPV感染分型的比較 只針對HR-HPV進行分型檢測，以HPV16單獨感染最常見〔65例(43.3%)〕，其次為其他HR-HPV混合感染〔59例(39.4%)〕，而包含HPV16型的混合感染最為少見〔26例(17.3%)〕。3組HPV感染分型總體比較差異無統計學意義(χ2=2.68，P=0.16)。見表3。

2.3 HPV亞型間細胞因比較 HPV亞型間各細胞因子比較差異均無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表3 各組感染HPV類型情況〔n(%)，n=50〕

表4 HPV亞型間細胞因子水平的比較

3 討 論

世界范圍內每年新發宮頸癌患者約50萬例，其中約半數患者死亡，宮頸癌已成為繼乳腺癌后的第二大女性健康殺手〔9〕。HPV為雙鏈環狀DNA病毒，具有較強的宿主特異性及組織特異性，能夠引起人體皮膚黏膜細胞的增殖，從而引發癌變〔10,11〕。根據HPV致病力強弱又可將其分為低危型和高危型，HR-HPV包括HPV16、HPV18、HPV58等型，其與女性的宮頸癌、男性陰莖癌及頭頸部鱗狀細胞癌等密切相關。HR-HPV持續性感染造成宮頸局部微環境中免疫炎性因子如IL-2、IL-6及IFN-γ等變化，使得Th1/Th2平衡漂移，即Th1因子劣勢發展而Th2因子優勢發展，削弱自身免疫對腫瘤細胞發展的抑制作用，從而使病毒感染持續存在及病變進一步發展。相關研究表明，隨著宮頸病變分級的增加，Th1向Th2漂移程度越明顯，因而Th1/Th2漂移程度可側面反映疾病發展程度，可用于監視病情進展〔12〕。目前我國宮頸癌篩查流程復雜且花費較高，并不能監測宮頸病變的發展方向，可能延誤疾病最佳治療時機。老年患者體內雌激素水平下降，機體抵抗力降低，更易受HPV病毒感染，且老年患者健康檢查意識薄弱，常常發現疾病時已至病程晚期〔13〕。

Th細胞在適應性免疫應答過程中發揮重要作用，Th1相關細胞因子包括IL-2、IFN-γ、TNF等，主要參與細胞免疫，用以抵抗宮頸細胞病毒的侵襲；Th2相關細胞因子包括IL-4、IL-6、IL-10 等，具有抑制機體免疫殺滅腫瘤細胞的作用；Th17細胞主要分泌IL-17，包括IL-17A～17E，其中IL-17A主要發揮腫瘤免疫作用，而TGF-β在Th17細胞與T細胞調節細胞(Treg)的平衡作用中發揮重要作用。正常情況下，Th1/Th2、Treg/Th17 處于動態平衡，維持機體的正常免疫功能。本研究說明Th1細胞因子降低，而Th2細胞因子升高，隨著病變分級的增加Th1/Th2發生漂移的程度增加，機體免疫調節失去平衡，更利于腫瘤細胞的生長；而其余6種細胞因子組間差異無統計學意義，可能與IL-2和IL-6炎性因子對疾病的變化較為敏感，檢測靈敏度較高有關。HR-HPV分型檢測結果較為符合我國宮頸HPV病毒感染總體分布情況，且各亞型感染人數總體不具有統計學差異，并不會干擾各組中細胞因子的檢測。在亞組分型中感染不同HPV類型的患者中，被檢測的8種細胞因子均不具有統計學差異，進一步說明不同HR-HPV類型不會對細胞因子產生影響。但本研究為單中心、小樣本研究，尚需多中心、大樣本研究加以驗證。

綜上，老年女性HR-HPV感染后宮頸微環境中細胞因子的變化與腫瘤細胞生長有關，定期檢測可以預測宮頸疾病的發展方向。