哮喘患兒外周血Th17、Th22、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及相關(guān)因子變化情況分析

孫麗好

洛陽北方企業(yè)集團(tuán)有限公司職工醫(yī)院兒科，河南省洛陽市 471000

支氣管哮喘是以氣道重塑和炎性反應(yīng)為主要病理特征的慢性呼吸道疾病，高發(fā)于兒童[1]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國兒童支氣管哮喘發(fā)生率為2%～5%，且發(fā)病年齡呈逐漸減小趨勢[2]。支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制目前仍未完全明確，其中T淋巴細(xì)胞亞群異常活化為效應(yīng)T細(xì)胞被認(rèn)為是支氣管哮喘發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，也是氣道炎性反應(yīng)擴(kuò)大的重要因素[3]。本文以支氣管哮喘初診患兒為觀察對象，檢測了外周血Th17、Th22、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在哮喘發(fā)病、緩解中的變化情況，為哮喘發(fā)病機(jī)制的研究提供參考。

1 對象與方法

1.1 觀察對象 選取2016年6月—2017年10月間本院收治的支氣管哮喘初診患兒116例為初診組，其中男64例，女52例，平均年齡(6.85±2.18)歲。另取90例經(jīng)哮喘治療后癥狀緩解的患兒為緩解組，其中男49例，女41例，平均年齡(6.63±1.84)歲。初診組和緩解組均符合兒童支氣管哮喘診治指南(中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會，2016版)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；排除肺結(jié)核、肺炎、支原體感染等疾病。選取同期在本院行常規(guī)體檢的健康兒童60例為對照組，其中男32例，女28例，平均年齡(6.90±1.42)歲。各組性別構(gòu)成、年齡之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；本文經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)，受試兒童或其監(jiān)護(hù)人均簽署知情同意書。

1.2 方法 抽取兒童空腹肘靜脈血3ml，肝素抗凝，96孔板中分別加入100μl靜脈血和100μl DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基，滴加刺激劑和阻斷劑各20μl，放入37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中孵育5～8h，取200μl加入流式細(xì)胞管，分別滴加10μl的CD3-H7、CD4-Fitc單克隆抗體，避光反應(yīng)45min，依次加入固定劑、破膜劑各100μl，分別避光反應(yīng)20min，分別滴加10μl的IL-17-Cy5、IL-22-Pe單克隆抗體，避光反應(yīng)30min，磷酸緩沖液重懸細(xì)胞，上流式細(xì)胞儀檢測，以CD3+CD4+IL-17+IL-22-為Th17細(xì)胞，CD3+CD4+IL-17-IL-22+為Th22細(xì)胞。另取100μl靜脈血加入流式細(xì)胞管，滴加CD4-Fitc、CD25-Pe、CD127-Cy5單克隆抗體，避光反應(yīng)20min，滴加細(xì)胞裂解液300μl，2 000r/min離心10min，棄去上清，磷酸緩沖液重懸細(xì)胞，計算CD4+細(xì)胞中CD4+CD25+CD127+百分率為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平。酶標(biāo)法常規(guī)檢測血漿中IL-17、IL-21、IL-22、IL-35水平。

2 結(jié)果

2.1 各組Th17、Th22、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞水平比較 初診組外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平明顯低于緩解組和對照組，Th17細(xì)胞、Th22細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞水平明顯高于緩解組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；緩解組外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平明顯低于對照組，Th17細(xì)胞、Th22細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 各組T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子水平比較 初診組外周血IL-17、IL-21、IL-22水平明顯高于緩解組和對照組，IL-35水平明顯低于緩解組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；緩解組外周血IL-17、IL-21、IL-22水平明顯高于對照組，IL-35水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 各組Th17、Th22、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞水平比較

注：與對照組相比，aP<0.05；與緩解組相比，bP<0.05。

表2 各組T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子水平比較

注：與對照組相比，aP<0.05；與緩解組相比，bP<0.05。

2.3 嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)與Th17、Th22、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平的相關(guān)性 Pearson相關(guān)性分析顯示，外周血嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)與Th17、Th22水平呈正相關(guān)(r=0.864、0.928，P<0.05)，與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.675，P<0.05)。

3 討論

支氣管哮喘是兒童常見的慢性氣道炎性疾病，自身免疫系統(tǒng)功能紊亂與病情的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其中T淋巴細(xì)胞亞群平衡失調(diào)發(fā)揮關(guān)鍵作用[4]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可通知多種細(xì)胞因子，對抗原特異性免疫反應(yīng)發(fā)揮直接或間接的抑制作用，誘發(fā)機(jī)體出現(xiàn)免疫耐受[5]。Th17細(xì)胞是可特異性分泌IL-17的輔助性T細(xì)胞亞群，細(xì)胞因子IL-17可聚集并活化中性粒細(xì)胞，發(fā)揮修復(fù)受損組織、抗病原微生物等生理活性[6]；Th17細(xì)胞還可分泌IL-21，通過自分泌方式經(jīng)STAT3通路刺激Th0細(xì)胞向Th17細(xì)胞的分化，同時誘導(dǎo)CD4+Th0細(xì)胞分泌IL-17，可維持并增強(qiáng)Th17細(xì)胞的生理作用[7]。Th22細(xì)胞是可特異性分泌IL-22的輔助性T細(xì)胞亞群，在胃癌、肺癌、肝癌等腫瘤及自身免疫性疾病、病毒感染的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[8]。

本結(jié)果顯示，支氣管哮喘患兒外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和細(xì)胞因子IL-35水平均較正常兒童明顯減少，且隨病情的緩解調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和IL-35水平明顯升高。提示調(diào)節(jié)性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫耐受參與了病情的進(jìn)展，且與呼吸道炎癥存在關(guān)聯(lián)。支氣管哮喘患兒嗜酸性粒細(xì)胞水平較正常兒童明顯升高，且與哮喘嚴(yán)重程度相關(guān)，與Th17、Th22水平呈正相關(guān)，與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平呈負(fù)相關(guān)。本文中Th17細(xì)胞及細(xì)胞因子IL-17、IL-21水平在支氣管哮喘患兒中明顯升高，可能與Th17細(xì)胞經(jīng)IL-17、IL-21加重體內(nèi)病理性免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)哮喘癥狀加重有關(guān)。相關(guān)研究顯示，支氣管哮喘患者活檢、痰標(biāo)本、肺泡灌洗液中IL-17表達(dá)水平明顯高于健康人群，與本文結(jié)果一致[9]。本文中支氣管哮喘患兒初診和緩解者外周血Th22細(xì)胞水平均較正常兒童明顯上升，提示Th22細(xì)胞水平與哮喘患兒病情嚴(yán)重程度相關(guān)，可能參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。