豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌PCR檢測方法的建立及應用

楊永能

（云南省楚雄彝族自治州動物疫病預防控制中心，云南楚雄 675000）

豬傳染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia，PCP）是世界范圍的豬病，給養豬業帶來了嚴重的經濟損失。為有效地預防和控制該病，建立一種快速、靈敏又特異的檢測方法勢在必行。目前，國內診斷該病的方法大多是采用細菌分離鑒定和血清學診斷，細菌分離鑒定費時、費力、過程繁瑣且有時分離不到致病菌；血清學診斷雖然簡便、快速，但有其局限性，如亞臨床感染或帶菌狀態下易造成假陰性，對免疫豬和感染豬不能做出有效的鑒別診斷。豬傳染性胸膜肺炎有15個血清型，目前，雖然已建立了以胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP） APXI、APXII、APXIII及OMP等某一DNA片段為目標基因的PCR診斷方法，但與胸膜肺炎放線桿菌相近的菌屬較多，且也存在這些目標基因或者與目標基因差別極小的基因片段，在進行PCR擴增時，偶爾會出現假陽性，造成誤診。APXIVA基因與APXI、APXII、APXIII基因不同，APXI、APXII、APXIII等基因只存在于部分血清型的胸膜肺炎放線桿菌中，APXIVA則存在于所有血清型中。據報道，以放線桿菌所有的15個血清型菌株為模板，用PCR方法都能擴增出APXIVA片段，而從其他親緣關系相近的細菌中無法擴增出這一片段，說明該片段具有很高的種屬特異性。以APXIVA基因某一DNA片段為目標基因建立PCR診斷方法，有利于疾病發生時的快速診斷和流行病學調查，具有廣闊的應用前景和實用價值。

1 試驗材料與方法

1.1 菌株來源

標準菌株：傳染性胸膜肺炎放線桿菌血清型2型和5型標準菌株和副豬嗜血桿菌菌株購自中國獸醫藥品監察所微生物菌種保藏中心。……