E-鈣黏素及β-連環(huán)素在胃癌分型中的表達(dá)及臨床意義

陳 萍 張欽華 劉瓊?cè)?/p>

1.廣東省江門市中心醫(yī)院病理科，廣東江門 529000；2.廣東省江門市中心醫(yī)院腫瘤科，廣東江門 529000

胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的消化道腫瘤之一，目前按Lauren's 分型將其分為彌漫型胃癌和腸型胃癌兩種，并且認(rèn)為這兩型胃癌無(wú)論從形態(tài)學(xué)、發(fā)病機(jī)制、生物學(xué)行為及預(yù)后上都明顯不同，彌漫型胃癌和腸型胃癌相比其惡性程度更高，預(yù)后更差，多項(xiàng)研究證實(shí)彌漫性胃癌的致瘤背景、組織學(xué)發(fā)生與腸型胃癌是一樣的[1-2]，以及兩者與胃癌臨床病理因素之間的關(guān)系，探討E-cadherin 和β-catenin 在兩型胃癌中表達(dá)的意義。

1 材料與方法

1.1 材料

收集江門市中心醫(yī)院2014 年1 月～2016 年12月首發(fā)胃癌手術(shù)切除標(biāo)本共74 例，每例均包括癌及癌旁正常胃組織，其中男51 例，女23 例，男女之比為2.22 ∶1，年齡37 ～84 歲，平均62.1 歲，按照Lauren's分型：腸型胃癌36 例，彌漫型胃癌38 例，參照WHO推薦的分化分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：高-中分化腺癌38 例，低、未分化36 例；浸潤(rùn)深度T1+T2 為13 例，T3+T4 為61 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移53 例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21 例。

表1 E-cadherin 和β-catenin 在正常胃組織與胃癌組織中的表達(dá)情況[n（%）]

1.2 方法

所有組織標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟包埋。4μm 厚度切片，1 張行HE 染色，1 張以PBS 溶液代替一抗進(jìn)行陰性對(duì)照，2 張分別行E-cadherin 和β-catenin 免疫組化染色。取癌旁正常胃組織作陽(yáng)性對(duì)照，免疫組化采用S-P 法，E-cadherin 和β-catenin 抗體和S-P 試劑盒，全部是由福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)，實(shí)驗(yàn)完全按照說(shuō)明步驟進(jìn)行。

1.3 染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)[3-4]

E-cadherin 和β-catenin 染色陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)基本相同，即細(xì)胞膜呈現(xiàn)棕色細(xì)小顆粒狀著色為陽(yáng)性細(xì)胞，正常染色主要定位于細(xì)胞膜，即連續(xù)的細(xì)胞膜染色。染色結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)方法[3]，染色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：細(xì)胞膜、胞質(zhì)全部沒(méi)有染色則判定為0 分；細(xì)胞質(zhì)染色為主則判定為1 分；異質(zhì)性染色，即細(xì)胞膜、胞質(zhì)混合型染色則判定為2 分；連續(xù)的細(xì)胞膜染色則判定為3 分。臨床中，為統(tǒng)計(jì)分析方便，無(wú)連續(xù)的細(xì)胞膜染色被視為異常，即0 ～2分為異常表達(dá)。在同一個(gè)腫瘤內(nèi)，其染色方式常有變化，判斷以主要染色區(qū)域?yàn)闇?zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 16.0 處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；E-cadherin 和β-catenin之間采用相關(guān)性分析，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E-cadherin 和β-catenin 在正常胃組織與胃癌組織中的表達(dá)情況

E-cadherin 和β-catenin 蛋白經(jīng)免疫組化染色后，陽(yáng)性反應(yīng)呈現(xiàn)淺棕色至深棕色，在正常胃黏膜組織中定位于細(xì)胞膜，呈現(xiàn)網(wǎng)格狀陽(yáng)性（見(jiàn)圖1A、2A），在胃癌組織中呈現(xiàn)不同程度的異常表達(dá)（見(jiàn)圖1B-1D、2B-2D），胃癌中E-cadherin 異常表達(dá)率為83.8%（62/74），β-catenin 的異常表達(dá)率為79.7%（59/74），兩者的異常表達(dá)率為均顯著高于正常胃組織（P ＜0.01）。見(jiàn)表1。

圖1 E-cadherin 和β-catenin 在兩型胃癌組織中的定位及表達(dá)情況

2.2 E-cadherin 和β-catenin在兩型胃癌中的表達(dá)及其他臨床病理因素的分析

E-cadherin 在彌漫型胃癌中的異常表達(dá)率為94.7%（36/38），在腸型胃癌中的異常表達(dá)率為72.2%（26/36），β-catenin 在彌漫型胃癌中的的異常表達(dá)率為92.1%（35/38），在腸型胃癌中的異常表達(dá)率為66.6%（24/36），兩者在彌漫型胃癌中的異常表達(dá)率均顯著高于腸型胃癌（P ＜0.01），見(jiàn)表2，并且兩者的異常表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均顯著相關(guān)，具體表現(xiàn)為在低-未分化胃癌的異常表達(dá)率顯著高于高-中分化胃癌，浸潤(rùn)深度為T3+T4 的胃癌兩者異常表達(dá)率高于T1+T2，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌兩者異常表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。見(jiàn)表2。

表2 E-cadherin 和β-catenin在兩型胃癌中的表達(dá)及其他臨床病理因素的分析[n（%）]

2.3 E-cadherin和β-catenin在胃癌中表達(dá)的相關(guān)性

E-cadherin 和β-catenin 在胃癌中的表達(dá)具有一定的相關(guān)性（見(jiàn)表3），74 例胃癌組織中E-cadherin 和β-catenin 均正常表達(dá)者為12.16%（9/74），E-cadherin 和β-catenin 均異常表達(dá)者為75.68%（56/74），兩者在胃癌組織中的表達(dá)具有相關(guān)性（P ＜0.01，r=0.514）。

表3 E-cadherin 和β-catenin在胃癌中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

1965 年Lauren 根據(jù)胃癌的組織結(jié)構(gòu)和生物學(xué)行為，將胃癌分為腸型和彌漫型，兩型胃癌有著不同完全不同的病理形態(tài)及臨床特征[5-6]。腸型胃癌發(fā)生于胃黏膜腸上皮化生的背景下，一般具有明顯的腺管形成，以高、中分化腺體為主，具有較高的發(fā)病幾率，患者以男性所占比例較多，預(yù)后相對(duì)較好。彌漫型胃癌細(xì)胞增長(zhǎng)方式為彌漫性，細(xì)胞缺乏連接，是難以形成腺管的，臨床中主要低分化腺癌或印戒細(xì)胞癌為主，分化相對(duì)較差，年輕女性患者較多，出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的幾率較大，臨床預(yù)后相對(duì)較差[7]。E-cadherin 是一個(gè)相對(duì)分子量為120KD 的鈣依賴性細(xì)胞粘附分子，屬于介導(dǎo)上皮細(xì)胞粘附跨膜糖蛋白中的一種，在保持細(xì)胞體態(tài)結(jié)構(gòu)、保證細(xì)胞極性方面具有較高的價(jià)值，另外其對(duì)于腫瘤細(xì)胞還具有防止其離散、脫落的作用[8]。β-catenin是一個(gè)相對(duì)分子量為92～95KD 的介于細(xì)胞骨架與E-cadherin 之間的細(xì)胞內(nèi)糖蛋白，也是細(xì)胞黏附素家族的重要成員之一。E-cadherin 作用的發(fā)揮離不開(kāi)β-catenin，必須與β-catenin 形成復(fù)合物才能發(fā)揮細(xì)胞粘附作用[9]。

E-cadherin 和β-catenin 為代表的細(xì)胞粘附分子，均屬于對(duì)腫瘤進(jìn)行抑制、控制器發(fā)展的因素，具有極為重要的價(jià)值，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲的機(jī)制較多，效果較佳。兩者中任何一種成分異常均可使細(xì)胞粘附系統(tǒng)功能障礙引起癌細(xì)胞脫落和向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[10-11]。已有研究發(fā)現(xiàn)，E-cadherin 表達(dá)減少或出現(xiàn)異常表達(dá)的情況，影響因素為癌組織分化、淋巴結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移或者浸潤(rùn)深度等[12]。Bornman 等認(rèn)為E-cadherin 表達(dá)的減少或缺失，在一定程度上降低了細(xì)胞間的粘附力，這就容易導(dǎo)致癌癥細(xì)胞出現(xiàn)彌漫生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移或者脫落的情況[13]。另有研究表明β-catenin 的膜表達(dá)減弱或缺失與腫瘤低分化和侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[14-15]。本研究發(fā)現(xiàn)E-cadherin和β-catenin 在胃癌組織中呈現(xiàn)不同程度的異常表達(dá)，并且彌漫型胃癌中的異常表達(dá)率均顯著高于腸型胃癌，提示E-cadherin 和 β-catenin 共同參與介導(dǎo)胃癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，與腸型胃癌相比，在彌漫型胃癌中E-cadherin 和 β-catenin 更容易出現(xiàn)表達(dá)定位改變甚至缺失，進(jìn)一步提示E-cadherin 和β-catenin 在兩型胃癌不同生物學(xué)特征的分子學(xué)基礎(chǔ)中發(fā)揮重要作用，從而為臨床對(duì)不同組織學(xué)類型胃癌的分子靶向治療提供理論依據(jù)，并據(jù)此為患者制定更為個(gè)體化的治療方案[16-17]。

本研究還發(fā)現(xiàn)E-cadherin 和 β-catenin 在胃癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，并且兩者的異常表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均顯著相關(guān)，在低-未分化、浸潤(rùn)深度為T3+T4、伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌中E-cadherin 和β-catenin 的表達(dá)顯著降低，因此檢測(cè)E-cadherin 和 β-catenin 的表達(dá)可作為判斷胃癌是否侵襲、轉(zhuǎn)移的重要參考指標(biāo)，也是腫瘤術(shù)后增加放化療可靠依據(jù)[18]。

本研究通過(guò)檢測(cè)E-cadherin 和β-catenin 在彌漫型胃癌和腸型胃癌中表達(dá)情況及兩者相關(guān)性，揭示了兩型胃癌不同生物學(xué)特征的分子基礎(chǔ)，從而對(duì)不同組織學(xué)類型胃癌的分子靶向治療提供新思路。