新生兒細菌性肺炎外周血自然殺傷細胞和淋巴細胞亞群與病程進展的關聯研究

王珍妮， 陳 麗， 龔唯鳴

細菌性肺炎是由各種致病菌引起的肺部炎癥性疾病，是臨床上的常見病和多發病[1-2]。新生兒在出生后不久，身體各項機能均未完善，易受到肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、流感嗜血桿菌、銅綠假單胞菌等致病菌的侵襲，進而表現為細菌性肺炎[3-4]。患兒發病后表現為典型的咳嗽、氣促、喘息等呼吸系統癥狀，并伴有惡心、嘔吐、腹脹、腹瀉等癥狀，對新生兒健康造成嚴重威脅，若不及時治療控制將影響患兒的正常發育[5]。現有研究顯示，新生兒細菌性肺炎的發生發展過程與免疫系統有緊密關聯，其中自然殺傷細胞、淋巴細胞亞群等在細菌感染性肺炎發病過程中發揮重要的免疫調節作用[6-7]。為了進一步闡釋新生兒細菌性肺炎外周血自然殺傷細胞和淋巴細胞亞群與病程進展的關聯，本研究以深圳市鹽田區人民醫院近期收治的細菌性肺炎新生兒為研究對象，對其外周血自然殺傷細胞、淋巴細胞進行檢測分析，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選擇2017年1月-2019年1月本院收治的細菌性肺炎新生兒80例為研究對象納入觀察組，納入標準：①均為新生兒，日齡≤28 d；②患兒經胸部X射線檢查、細菌學檢查診斷確診為細菌感染性肺炎；③患兒有咳嗽、肺部濕啰音等典型的肺炎癥狀；④患兒家屬簽署知情同意書，研究方案經醫院倫理委員會批準。排除標準：①患兒確診為其他類型的肺炎；②患兒入組前服用相關治療藥物影響檢測指標的判斷；③患兒并發其他免疫系統疾病。另選同期在本院進行健康體檢的新生兒50例為對照組。

1.2 檢測方法

觀察組、對照組入院時分別采集空腹靜脈血約3 mL，加入到含有EDTA的抗凝管中，在采血后的2 h內完成測定。在試管中分別加入單克隆抗體CD16+、CD56+、CD59+、CD3+、CD4+、CD8+，室溫避光孵育20 min后，加入紅細胞溶解素2 mL溶解紅細胞約8 min，在TG-20G型高速離心機（常州金壇良友儀器有限公司）中離心，轉速5 000 r/ min離心10 min，用磷酸緩沖液（PBS）洗滌2次后加入0.5 mL含1%多聚甲醛PBS固定后采用FACSCAlibur型流式細胞儀（美國BD公司）進行檢測。異硫氰酸（FITC） 熒光抗體CD16+、CD56+、CD59+、CD4+、CD8+、CD3+，全部購于美國Pharmingen公司產品，均為小鼠抗人IgG 型抗 體。

1.3 觀察指標

對觀察組、對照組納入者的自然殺傷細胞包括CD16+、CD56+、CD59+以及淋巴細胞亞群包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+進行統計對比。并將觀察組患者按病程進展情況分為：急性期患者47例，急性期為肺炎3 d以內，氣促、有缺氧體癥，發熱，肺部細濕啰音及X線胸片病灶等；恢復期患者33例，恢復期通常肺炎病程5 d之后氣促、缺氧消退，發熱者熱退，肺部啰音轉粗或消失，X線胸片病灶在吸收等，比較急性期與恢復期患兒間自然殺傷細胞、淋巴細胞亞群等細胞水平差異。采用Pearson相關性檢驗對兩組納入者的自然殺傷細胞與淋巴細胞亞群間的相關性進行分析探 討。

1.4 數據分析方法

以SAS 19.0進行數據處理，計量資料以（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用F檢驗，計數資料以 [n( % ) ]表示，組間比較采用χ2檢驗，相關性檢驗采用Pearson檢驗，當P＜0.05時差異有統計學意義。

2 結果

2.1 組間基線資料比較

觀察組中男4 3例、女3 7例；患兒日齡9～28 d，平均 （16.82±7.82）d；患兒病原菌分布：肺炎鏈球菌24例、金黃色葡萄球菌21例、肺炎克雷伯菌15例、流感嗜血桿菌11例、銅綠假單胞菌9例。對照組中男27例，女23例；日齡6～28 d，平均 （15.28±7.99）d。兩組性別、日齡等一般臨床資料比較差異無統計學意義。

2.2 各組間自然殺傷細胞水平比較

經檢測顯示，觀察組患兒的自然殺傷細胞包括CD16+、CD56+、CD59+等細胞水平均低于對照組；觀察組急性期患兒的CD16+、CD56+、CD59+細胞水平均低于恢復期患兒，三組間比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 各組間自然殺傷細胞水平比較Table 1 Levels of natural killer cell in peripheral blood in terms of disease status

2.3 各組間淋巴細胞亞群水平比較

觀察組患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于對照組，CD8+水平高于對照組；觀察組急性期患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于恢復期患兒，CD8+水平高于恢復期患兒，三組間比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 各組間淋巴細胞亞群水平比較Table 2 Levels of lymphocyte subsets in peripheral blood in terms of disease status

2.4 相關性分析

經Pearson相關性分析，CD16+、CD56+、CD59+與CD3+、CD4+呈正相關，與CD8+呈負相關，見表3。

表3 自然殺傷細胞與淋巴細胞亞群相關性分析Table 3 Correlation analysis between natural killer cells and lymphocyte subsets

3 討論

新生兒由于剛出生不久，機體的各個臟器功能均處于未完善階段，此時機體的免疫系統未完全建立，易受到外界致病因素的侵襲出現各種感染性疾病，其中新生兒細菌性肺炎是常見的一種[8]。進一步的研究揭示，新生兒細菌性肺炎的發生發展過程與免疫系統有緊密關聯，其中以自然殺傷細胞、淋巴細胞亞群等在細菌感染性肺炎發病過程中發揮重要的免疫調節作用[9-10]。自然殺傷細胞是機體重要的免疫細胞組成成分，非特異性免疫系統的主要成員之一，在參與機體的抗腫瘤、抗病毒、抵御外來細菌侵襲、免疫調節等方面發揮重要的作用。自然殺傷細胞可通過自然殺傷、抗體依賴的細胞毒作用，并且通過分泌相應的細胞因子對各種外界侵入的病毒、細菌等致病微生物進行殺滅，抑制其在體內的增殖[11-12]。自然殺傷細胞根據其表面標志物不同可分為多個亞群，其中常見的有CD16+、CD56+、CD59+等，當各個亞群的細胞呈現較高水平時，患者免疫系統對于外界致病物質的清掃能力加強，而處于較低水平時，免疫系統識別功能和清除能力也大受影響[13-14]。T淋巴細胞也是機體免疫系統重要的組成部分，能夠參與機體的細胞免疫過程，主要是抗胞內外致病物質的感染、瘤細胞和異體細胞的侵襲等；其在體內主要活躍的亞型結構有CD3+、CD4+、CD8+等亞型[15-16]。

本研究對各組入選者的各項免疫細胞水平進行檢測結果顯示，觀察組患兒的自然殺傷細胞包括CD16+、CD56+、CD59+等細胞水平均低于對照組，觀察組急性期患兒的CD16+、CD56+、CD59+細胞水平均低于恢復期患兒，三組間比較差異有統計學意義。表明細菌感染性肺炎的發生，患者體內的自然殺傷細胞相比于正常人群處于較低水平，而患者在急性期與恢復期時的細胞水平也存在差異，提示自然殺傷細胞與細菌性肺炎的疾病進展過程有一定關聯。隨著患兒自然殺傷細胞水平的升高，細菌性肺炎病變有好轉。在淋巴細胞亞群的觀察中，觀察組患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于對照組，CD8+水平高于對照組，觀察組急性期患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于恢復期患兒，CD8+水平高于恢復期患兒，三組間比較差異有統計學意義，同樣表明隨著淋巴細胞水平的升高，細菌性肺炎病變有好轉。在自然殺傷細胞與淋巴細胞亞群相關性比較中，CD16+、CD56+、CD59+與CD3+、CD4+呈正相關性，與CD8+呈負相關性，提示自然殺傷細胞與淋巴細胞亞群間存在著密切的關聯，均參與并反映了新生兒細菌性肺炎的病程進展情況。

綜上所述，細菌性肺炎新生兒體內的免疫系統紊亂，外周血自然殺傷細胞和淋巴細胞亞群的變化與疾病的進展恢復有密切關聯。因此，通過對細菌性肺炎患兒進行免疫功能的監測，對于疾病的進展、療效評估有參考作用。