丹參多糖提取方法研究進展

謝 洲 付亮 黃 娟 王強 李 勇 王 濤 王志德

摘要? ? 丹參多糖是丹參主要化學成分之一，其藥用價值高，在生物醫(yī)藥方面具有十分廣闊的臨床應用前景。本文綜述了當前丹參多糖提取的常用方法，包括溶劑法、酶提取法、超聲波提取法、微波輔助法等，以期為丹參多糖的提取提供參考。

關鍵詞? ? 丹參;多糖提取;溶劑法;酶提取法;超聲波提取法;微波輔助法

中圖分類號? ? R282? ? ? ? 文獻標識碼? ? A

文章編號? ?1007-5739（2019）16-0203-02? ? ? ? ? ? ? ?? 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）

中藥丹參為唇形科（Labiatae）多年生草本植物丹參（Salvia miltiorrhiza Bunge.）的干燥根和根莖。丹參所含化學藥用成分主要分為4類，即脂溶性二萜醌類、水溶性酚酸類、揮發(fā)油類、多糖類。多糖由半乳糖∶阿拉伯糖∶甘露糖∶葡萄糖∶核糖∶木糖∶鼠李糖以58.8∶15.3∶4.2∶12.7∶8.5∶1.0∶2.8的摩爾比例組成[1]，具有延緩衰老、抗病毒、抗癌、增強免疫力、降血脂的作用。隨著對丹參藥用成分的深入研究，多糖的提取過程工藝備受研究者的關注。目前常用丹參多糖提取方法主要有溶劑法、酶提取法、超聲提取法、微波輔助法，其研究進展綜述如下。

1? ? 溶劑法

溶劑提取法中較為傳統(tǒng)的方法主要有浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流萃取法、連續(xù)回流萃取法。多糖屬于極性化合物，根據(jù)極性大小相似相溶的原理，丹參多糖易溶于熱水而不溶于醇，采用水提醇沉淀法，提取液主要為水和醇。

汪? 紅等[1]粉碎1 kg丹參，一并加入95%工業(yè)乙醇6倍量提取，過濾，揮干乙醇留藥渣，水煎2次，1次水量為8倍，2次水量為6倍，濃縮水體液至1.5 L，加入2倍量工業(yè)乙醇，靜置混合液10 h，離心后沉淀得多糖80 g。用DEAE.Sepharose FastFloW進行優(yōu)化提純后，以雙氧水脫色，蒸餾水分析，置于冷凍箱直至干燥后得到2個米黃色單一多糖。

蔡亞平等[2]研究表明，丹參多糖最適提取工藝為水浸泡2 h，加熱至沸騰30 min過濾，再煎煮25 min過濾，收集2次過濾液，濃縮液含有丹參2 g/mL，加入無水乙醇使其濃度達80%，在20 ℃恒溫狀態(tài)下放置4 h，離心沉淀，可得到丹參多糖。

李淵[3]采用水提法，將100 g丹參細粉加入1 000 mL圓底燒瓶，同時加入600 mL 95%工業(yè)乙醇，分2次置于80 ℃恒溫水溶鍋中連續(xù)回流2 h，過濾并風干，選擇1 000 mL燒杯，再次加入約8倍體積的蒸餾水，在溫度為95 ℃的烘箱中浸提2 h，攪拌并過濾。所得濾渣再次用8倍體積蒸餾水浸提，收集濾液，離心，取出上清液，濃縮150 mL，離心，分離，去除沉淀，向上清液逐漸加入乙醇，然后干燥沉淀物，可得多糖10.8 g。

通過上述研究表明，丹參多糖提取溶劑的重要因素為溫度、時間、固液比。該方法簡單、具有可操作性，但水提取的缺點是提取溫度標準高，效率較低且耗時，價格高昂，安全性低，而多次的連續(xù)提取極易破壞多糖的化學結構，影響多糖穩(wěn)定性。

2? ? 酶提取法

選用精準靶向性的酶（如果膠酶、纖維素酶），通過酶反應分解細胞壁的纖維素、果膠，破壞細胞壁的組織結構，克服來自細胞壁和細胞質(zhì)之間的阻力，促使細胞質(zhì)中的有效藥用成分加速外溢，降低提取難度，提高提取效率。

楊瑞花等[4]采用響應面法纖維素酶優(yōu)化提取丹參多糖，單因素正交試驗確定了丹參多糖最宜提取條件為加酶量0.5%、酶解溫度65 ℃、pH值4.5、提取時間2 h，所得提取率25.9%。

蔡紅兵等[5]確定了影響酶提取丹參多糖的因素主次關系為溫度>酶解時間>酶用量，最佳提取條件為溫度60 ℃、加酶量10 g/kg、酶解時間120 min，提取率為10.89%。

鞏健[6]選用木瓜蛋白酶、纖維素酶、果膠酶質(zhì)量比為2∶2∶1的復合酶，確定最佳工藝提取條件為酶解溫度52 ℃、70 min、復合添加量8 mg/mL、液料比（mL/g）為45∶1，多糖提取率為13.36%。

酶提取法具有便利專一、容易去除雜質(zhì)、效率高、節(jié)約成本和降低能耗的優(yōu)點，基于此，酶法具有廣闊的應用空間。根據(jù)酶的特殊性，應用中采用復合酶，協(xié)同底物、抑制劑、酶濃度之間的關系，熟悉所需pH值、溫度和時間等開展試驗。

3? ? 超聲波提取法

該方法的應用原理是利用超聲波空化效應，即介質(zhì)內(nèi)部在溶解過程中本存在細微氣泡，在頻率高于20 000 Hz的超聲波作用下產(chǎn)生共振，當聲壓達到定向擴散的閾值后氣泡會逐漸增大，直至形成共振腔，然后瞬時閉合，氣泡閉合時會暴發(fā)出巨大的氣壓壓力，從而形成沖擊波，擊碎植物細胞壁乃至整個生物體，整個過程快速、準確、穩(wěn)定，有利于有效成分的溶出。該方法無需加熱、提取率高，相比溶劑法提取時間可縮短近15倍。

徐天生等[7]通過正交試驗發(fā)現(xiàn)加水量、藥材粉碎粒度、超聲提取時間對最終結果有顯著影響。對丹參多糖提取率的影響順序為藥材粉碎度>加水量>超聲時間，并得出三者最佳組合為加水量為12倍藥材質(zhì)量、粒度過20目篩、超聲提取時間20 min，并重復3次，試驗結果穩(wěn)定。在實際生產(chǎn)應用中，考慮到經(jīng)濟、省時，應把藥材粒度作為首要因素。該方法切實可行。

張海容等[8]通過響應面優(yōu)化超聲波提取丹參多糖工藝的方法，采用三因素三水平響應面分析，根據(jù)Design Expert試驗設計原理解出二次線性回歸方程，得到多糖產(chǎn)率響應面圖。研究結果表明，超聲波功率90 W、超聲波提取溫度值為50 ℃、每次提取時間30 min、固液比1∶55、提取次數(shù)為2次，丹參多糖的提取率為8.23%。此法為最佳提取工藝。

王燕華等[9]對提取時間、功率、丹參粒度單因素試驗的基礎上通過分析優(yōu)化，結果表明，超聲波功率設定為212 W、超聲提取時間18 min、顆粒粒度大小55目，丹參多糖提取率可達4.73%。此法為最佳提取方案。

4? ? 微波輔助法

微波提取即300 MHz至300 GHz的電磁波穿透基質(zhì)達提取物細胞內(nèi)部系統(tǒng)的過程，由于吸收微波能，分子的極性在微波場作用下瞬時極化，產(chǎn)生鍵的振動撕裂和粒子間的摩擦和碰撞，迅速產(chǎn)生大量熱能，細胞內(nèi)部溫度驟升，從而細胞高內(nèi)壓沖破細胞壁，同時微波產(chǎn)生的電磁場可加快分子由固體內(nèi)部向固液界面的擴散速率。利用微波輔助提取有效成分，具有簡化操作步驟、節(jié)省溶劑、安全無污染、提高提取率等優(yōu)點。

影響丹參多糖提取的主要因素依次為料液比>提取次數(shù)>提取溫度≈提取時間。趙衛(wèi)星[10]在單因素選擇試驗的基礎上，優(yōu)化了丹參多糖微波提取的最佳條件。結果表明，當料液比（質(zhì)量與體積比）為1∶12、超聲提取溫度值為50 ℃、每次提取時間為40 min、提取次數(shù)為3次時，多糖提取率可達5.43%。

5? ? 結語

丹參多糖提取方法已從傳統(tǒng)的溶劑提取法，發(fā)展到微波輔助提取法、超聲波提取法、酶提取法。4種方法各有優(yōu)點和缺點，在實際應用中，應根據(jù)不同的要求，有針對性地選擇不同方法，補齊短板，亦可將2種或2種以上的方法結合起來使用，最大限度地增大丹參多糖的提取率和純度。本文對丹參多糖的提取方法進行綜述，為丹參多糖提取進一步研究提供了有利理論參考。

6? ? 參考文獻

[1] 汪紅，王強，羅輝明，等.丹參多糖的含量測定及高效毛細管電泳法測定其單糖組分[J].中華中醫(yī)藥學刊，2007（4）：827-829.

[2] 蔡亞平，趙蕊，朱丹.丹參多糖的組成分析[J].中國實驗方劑學雜志，2010，16（18）：88-90.

[3] 李淵.丹參多糖提取工藝研究[J].四川職業(yè)技術學院學報，2015，25（6）：168-171.

[4] 楊瑞花，張玥莉.響應面法優(yōu)化纖維素酶提取丹參多糖工藝[J].中國藥師，2016，19（1）：43-46.

[5] 蔡紅兵，劉莉，劉乃華，等.纖維素酶在提取丹參多糖中的應用[J].今日藥學，2008（4）：65-66.

[6] 鞏健.白花丹參多糖酶法提取條件的響應面優(yōu)化及其抗氧化活性研究[J].糧油食品科技，2015，23（4）：93-97.

[7] 徐天生，梁燕，江莉華，等.用正交試驗法研究超聲提取丹參多糖的最佳工藝[J].中成藥，2008（2）：270-271.

[8] 張海容，魏增云，秦怡，等.響應面優(yōu)化—超聲輔助提取丹參多糖工藝[J].計算機與應用化學，2015，32（5）：596-600.

[9] 王燕華，武福華，郭昭涵，等.響應面試驗優(yōu)化丹參中多糖的超聲波提取工藝及其抗氧化活性[J].食品科學，2015，36（18）：7-12.

[10] 趙衛(wèi)星.正交超聲法提取丹參多糖工藝研究[J].廣東化工，2014，41（23）：36-38.