宮頸癌組織中Foxm1、ANGPTL4蛋白表達及臨床意義

陳輝，樊茹佳，丁繼俠

（1.河南工業大學醫院婦科，鄭州450001；2.河南省人民醫院婦產科，鄭州450003）

宮頸癌是發生在宮頸陰道部或移行帶及宮頸管內膜交界處的惡性腫瘤，是發病率較高的婦科惡性腫瘤之一[1]。宮頸癌的發病與多種因素有關。早婚早育、人乳頭狀瘤病毒感染、性激素失調及子宮頸糜爛癥等均為宮頸癌的重要發病誘因。流行病學研究[2]提示，宮頸癌的發病率具有明顯的年輕化趨勢，為提高其治療效果，了解其具體發病機制具有重要意義。研究[3]發現，Foxm1蛋白在肝癌、基底細胞癌、肺癌及乳腺癌的組織中均存在明顯的高表達，并提示Foxm1蛋白可能是腫瘤發生、發展過程中重要調控分子之一，但關于宮頸癌中Foxm1的研究較為缺乏。ANGPTL4可以激活整合素β1及β5調控FAK和PAK通路使表皮角質形成細胞遷移，這也為腫瘤細胞的轉移研究提供了理論基礎。本研究探討了宮頸癌組織中Foxm1、ANGPTL4蛋白表達水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月-2018年3月河南省人民醫院保存的宮頸癌組織標本72例，年齡35～62 歲，中位年齡 50～42 歲。納入標準：（1）均經病理學確診；（2）術前未接受放化療等治療；（3）臨床病理資料保存完整。排除標準：合并有其他惡性腫瘤。同時選取正常宮頸組織標本35例作為對照，年齡34～64歲，中位年齡51.50歲。

1.2 實驗方法 取適量宮頸癌組織石蠟包埋后連續切片，免疫組化染色法檢測Foxm1、ANGPTL4蛋白表達，DAB顯色。Foxm1蛋白抗體（批號：20160821）及ANGPTL4蛋白抗體（批號：20161102），DAB 顯色盒及SP試劑盒均購于南京建成生物研究所。磷酸鹽緩沖液代替一抗及陽性片分別作為陰性和陽性對照，高倍顯微鏡下觀察Foxm1、ANGPTL4蛋白表達情況，具體染色方法嚴格依照SP試劑盒說明書進行。

Foxm1主要定位于細胞質和細胞核，ANGPTL4主要定位于細胞質，呈黃色表達。采用半定量積分法：（1）石蠟切片常規脫蠟、水化及抗原修復；（2）滴加 3% H2O2溶液；（3） 用正常山羊血清封閉；（4）滴加兔小鼠NF200特異性一抗（1：100），4℃孵育過夜；（5）次日37℃復溫，滴加生物素標記羊抗小鼠IgG及辣根酶標記鏈酶卵白素工作液；（6）鏡控DAB顯色，蘇木素復染，鹽酸酒精分化，碳酸鋰返藍，最后梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，高倍顯微鏡觀察。

對染色強度和陽性細胞比例進行評分：（1）染色強度：無著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕褐色為3分；（2）陽性細胞比例：≤10%為0分，11%～25%為 1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。（1）+（2）之和，≥4分為陽性表達[4-5]。

1.3 統計學處理 統計分析采用SPSS19.0軟件，計數資料比較使用字2檢驗，相關分析采用Spearman秩相關分析。以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 宮頸癌和正常宮頸組織Foxm1、ANGPTL4蛋白表達 宮頸癌組織Foxm1和ANGPTL4蛋白陽性表達率明顯高于對照組，差異比較有統計學意義（P＜0.05），見表 1 和圖 1、2。

表1 宮頸癌和正常宮頸組織Foxm1、ANGPTL4蛋白表達Tab 1 Expression of Foxm1 and ANGPTL4 in Cervical Carcinoma and Normal Cervical Tissues

圖1 宮頸組織免疫組化染色圖Fig 1 Immunohistochemical staining of cervical tissue

圖2 宮頸癌和正常宮頸組織Foxm1、ANGPTL4蛋白陽性表達Fig 2 Positive expression of Foxm1 and ANGPTL4 protein in cervical cancer and normal cervical tissues

2.2 Foxm1、ANGPTL4蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的關系 FIGO分期Ⅱ期、肌層浸潤≥1/2、中低分化宮頸癌Foxm1蛋白陽性表達率明顯高于Ⅰ期，肌層浸潤＜1/2、高分化患者（P＜0.05），有脈管浸潤宮頸癌ANGPTL4蛋白陽性表達率明顯高于無脈管浸潤（P＜0.05），見表 2。

表2 Foxm1、ANGPTL4蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的關系Tab 2 Relationship between expression of Foxm1 and ANGPTL4 protein and clinicopathological features of cervical cancer

續表2 Foxm1、ANGPTL4蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的關系Tab 2 Relationship between expression of Foxm1 and ANGPTL4 protein and clinicopathological features of cervical cancer

2.3 相關性分析 經Spearman秩相關分析，結果顯示：Foxm1與ANGPTL4蛋白表達呈正相關（rs=0.301，P＜0.05），見表 3。

表3 相關性分析Tab 3 Relevance analysis

3 討論

宮頸癌發病率在全世界女性惡性腫瘤中居第二位，占所有女性惡性腫瘤發病的13%。而現階段關于宮頸癌的發生、發展機制仍存在分歧。腫瘤的侵襲轉移是惡性腫瘤的主要特征，是引起惡性腫瘤患者死亡的主要原因，其過程復雜多變，且由多個因素動態分段調控。Foxm1蛋白含有多個糖蛋白配體及絲氨酸結構，可激活機體氧化應激蛋白酶，促進改變機體腫瘤微環境，進而加速癌細胞的持續增殖[8-9]。Foxm1的過度富集，能夠轉錄調控增加p53或p16等癌基因的轉錄活性，促進腫瘤蛋白高翻譯。最新的研究[10-11]提示Foxm1主要在胎兒平滑肌組織、肝腎組織及部分神經間質表達，但在人體分化組織陽性表達率較低，此外Foxm1蛋白可降低乳腺癌的化療敏感性，進而增加了乳腺癌治療后的復發率。ANGPTL4蛋白水解后的片段與整合素β結合后，能激活相關通路以減弱細胞間的相關聯系，造成血管內皮細胞屏障功能障礙，進而利于腫瘤細胞對血管的附著和侵蝕，增強血管通透性，促進腫瘤的發生、發展[12-15]。

本研究結果顯示，宮頸癌組織中Foxm1和ANGPTL 4蛋白陽性表達率為63.89%和75.00%，明顯高于對照組（P＜0.05）。上述結果中表明宮頸癌患者Foxm1和ANGPTL4蛋白的高表達。Foxm1的促癌機制主要分為以下幾點[16-18]：（1）Foxm1可促進環氧化酶2的高表達；（2）細胞周期紊亂是腫瘤的重要特征，而Foxm1能夠對細胞周期進行調控；（3）Foxm1能夠促進血管內皮生長因子的高表達，該機制在胃癌的發生、發展過程中已經得到了證實；（4）Foxm1還可能通過DNA復制障礙等相關機制促進細胞惡變。ANGPTL水解后形成cANGPTL4，其首先與細胞外基質作用，抑制內皮細胞粘附并調控肌動蛋白骨架，進而促進腫瘤滋養血管生成及內皮細胞遷移，有利于細胞的生長、轉移及侵襲。

本研究Foxm1、ANGPTL4蛋白表達與宮頸癌臨床病理特征的關系結果顯示，FIGO分期Ⅱ期、肌層浸潤≥1/2、中低分化宮頸癌Foxm1蛋白陽性表達率分別為89.47%、84.62%和79.07%，明顯高于Ⅰ期、肌層浸潤＜1/2、高分化患者；有脈管浸潤宮頸癌ANGPTL4蛋白陽性表達率為95.24%，明顯高于無脈管浸潤。上述結果提示宮頸癌組織中Foxm1、ANGPTL4在疾病發生發展中可能有重要作用并能夠促進宮頸癌的病情發展，這可能與Foxm1能夠促進病情誘導因子的表達，進而促進宮頸上皮細胞對宮頸癌組織及基底膜組織的浸潤有關。此外，研究[19-20]發現ANGPTL4在結直腸癌中的高表達與腫瘤分級、浸潤程度及淋巴結轉移呈顯著正相關關系，該結果與宮頸癌的發展、浸潤及分期具有一致性。

本研究進一步發現Foxm1與ANGPTL4蛋白表達呈正相關，該結果再次證實Foxm1與ANGPTL4蛋白具有密切聯系，兩者共同促進宮頸癌的發生、發展，但兩者相互作用的具體機制尚不明晰，還需要進一步研究探討。此外，可能宮頸癌患者自身還存在一定的特異性，關于Foxm1與ANGPTL4蛋白的具體機制尚需要足夠樣本量研究，以提高研究數據的準確性和科學性。綜上所述，宮頸癌組織中Foxm1、ANGPTL4蛋白呈高表達，在疾病發生發展中可能有重要作用。