血清lncRNA PTENP1聯合CA724、CA19-9、癌胚抗原檢測在胃癌診斷及預后中的價值

胃癌是常見的消化道腫瘤之一，中國的發病率約為27.77/10萬，病死率約25.27/10萬[1]。早期胃癌患者常無自覺癥狀，發病隱匿，這是疾病最終進展至晚期并導致患者預后較差的重要原因。血清學標志物可為胃癌的早期發現和及時診療贏得寶貴時間，已逐漸引起人們重視。研究發現，糖類抗原724(CA724)、糖類抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原(CEA)、長鏈非編碼RNA(lncRNA)PTENP1在胃癌患者體內異常表達，與胃癌的發生、發展、侵襲、轉移等過程密切相關[2-5]。本研究納入110例胃癌患者、108例胃良性疾病患者和120例健康體檢者，檢測并比較了3組研究對象的血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1的表達水平，分析這四項指標與胃癌的臨床病理特征的相關性及臨床價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集新疆醫科大學第五附屬醫院2013年3月至2015年2月經病理學確診的110例胃癌患者，其中乳頭狀腺癌57例，黏液腺癌28例，管狀腺癌25例；發生淋巴結轉移35例，未發生淋巴結轉移75例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期60例，Ⅲ～Ⅳ期50例。胃癌的分期參照美國腫瘤聯合會(AJCC)第8版TNM分期系統[6]。同期選取108例胃良性疾病患者(胃平滑肌瘤38例、胃腺肌瘤20例、胃纖維瘤19例、胃潰瘍31例)和120例健康體檢者。3組研究對象的年齡、性別、吸煙史、飲酒史差異均無統計學意義(P均>0.05)，具有可比性，見表1。本研究的開展經醫院倫理委員會批準。

表1 3組研究對象的臨床基本資料

1.2 血清CA724、CA19-9、CEA與lncRNA PTENP1表達水平檢測

研究對象禁食10 h以上，次日清晨由醫護人員使用含促凝劑的采血管抽取靜脈血5 mL，血液標本經12 000 r/min離心15 min(離心半徑10 cm)，收集上層血清。采用化學發光法檢測CA724、CA19-9、CEA表達水平，檢測原理為：采用化學發光劑吖啶酯類化合物直接標記CA724、CA19-9、CEA抗體，分別與標本中CA724、CA19-9、CEA特異性結合，用發光信號測定儀——Archetect j2000sr全自動免疫分析儀(美國Abbott公司)進行發光測定，而后根據CA724、CA19-9、CEA標準品制作的標準曲線進行定量，并采用配套的原裝進口試劑盒。

采用實時熒光定量PCR(qPCR)檢測lncRNA PTENP1的相對表達量，檢測試劑購自中國Takara公司，反應體系為：Mix 10 μL，上下游引物各0.8 μL，cDNA 2 μL，DEPC水6.4 μL。qPCR反應循環條件為：95 ℃變性5 min；95 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s，45個循環。每組設置3個復孔。應用PrimerPremier 5.0進行PCR引物設計，引物合成由武漢擎科創新生物科技有限公司提供，引物序列見表2。采用2-ΔCt法計算lncRNA PTENP1的相對表達量?！鰿t值= PTENP1 Ct值-GAPDH Ct值。

采用英國朗道公司腫瘤高值、低值質控品進行質量控制，判斷標準為Westgard多規則分析，并分析本次實驗血清CA724、CA19-9、CEA與lncRNA PTENP1檢測的批內、批間變異系數，用以評估檢測的重復性和精確度。

表2 引物序列

1.3 隨訪

依據納入研究的時間，對胃癌患者進行40個月的電話隨訪，記錄患者的生存時間。隨訪終點為：(1)40個月內患者死亡；(2)40個月內患者退出該項研究；(3)40個月隨訪結束。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 3組血清CA724、CA19-9、CEA與lncRNA PTENP1表達水平比較

血清CA724、CA19-9、CEA與lncRNA PTENP1檢測的批內和批間變異系數值小于5%，提示實驗具有良好的重復性和精確度。與胃良性疾病組和健康體檢組相比較，胃癌組的血清CA724、CA19-9和CEA表達水平均升高，血清lncRNA PTENP1水平降低，差異均有統計學意義(P均<0.05)。而胃良性疾病組與健康體檢組間血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1的水平差異無統計學意義(P>0.05)。

表3 3組研究對象血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1水平比較

注：與胃癌組相比，aP<0.05

2.2 血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1表達水平與胃癌患者臨床病理特征的關系

以胃癌患者血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1表達水平的中位數分別將患者分為高表達組和低表達組。相比于CA724、CA19-9、CEA低表達和lncRNA PTENP1高表達組，CA724、CA19-9、CEA高表達和lncRNA PTENP1低表達組的淋巴結轉移發生率、Ⅲ～Ⅳ期患者所占比例均升高，且差異具有統計學意義(P<0.05)，見表4和表5。Spearman相關性分析顯示，血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1水平與胃癌患者淋巴結轉移及TNM分期均具有顯著相關性(P<0.05)，見表6。

表4 血清CA724和CA19-9表達水平與胃癌患者臨床病理特征的關系/例(%)

表5 血清CEA和lncRNA PTENP1水平與胃癌患者臨床病理特征的關系/例(%)

表6 血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1表達水平與臨床病理特征的相關性分析

2.3 ROC曲線分析結果

血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1區分胃癌組與胃良性病變組及健康體檢組的ROC結果見表7和圖1，4項指標對應的診斷臨界值分別為2.82 U/mL、30.14 U/mL、2.25 ng/mL和26.91(-log)。當聯合檢測CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1時，敏感度顯著提高至96.1%。

表7 血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1對胃癌鑒別診斷的ROC結果

圖1 血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1 對胃癌鑒別診斷的ROC曲線分析

2.4 生存分析

110例胃癌患者依據CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1水平的中位數分別被分為高水平組與低水平組。與高lncRNA PTENP1組相比，低lncRNA PTENP1組患者的生存時間顯著降低(log-rankP=0.002，見圖2A)；與低CA19-9組相比，高CA19-9組患者的生存時間顯著降低(log-rankP=0.039，見圖2B)；與低CA724組相比，高CA724組患者的生存時間顯著降低(log-rankP<0.001，見圖2C)；與低CEA組相比，高CEA組患者的生存時間也顯著降低(log-rankP=0.010，見圖2D)。

圖2 各組生存情況分析 A lncRNA PTENP1組 B CA19-9組 C CA724組 D CEA組

3 討論

由于胃癌的早期篩查尚未在中國普及，導致一部分胃癌患者在就診時已處于晚期。目前對晚期胃癌尚無有效的治療方法，因而其5年生存率極低。尋找可靠的早期篩查生物學指標是提高胃癌患者生存率的重要方法。

CEA是一種具有胚胎抗原特性的酸性糖蛋白，在胃腸道惡性腫瘤及乳腺癌、肺癌等腫瘤患者體內表達升高，對惡性腫瘤的診斷具有提示作用[7]。CA19-9是糖抗原的一種，其表達升高多提示有胰腺炎、肝硬化、糖尿病、消化道腫瘤可能。CA724是一種較新的腫瘤標志物，對胃腸道腫瘤的判斷具有潛在價值，但目前在臨床上的應用較少[8]。陳鐘等[9]對41例胃癌患者和40例健康對照的血清腫瘤標志物檢測發現，胃癌患者的血清CA19-9、CA724和CEA水平明顯高于健康人群。王梅等[10]對92例胃癌患者和45例對照者血清CEA、CA724水平的分析結果表明，胃癌患者血清CEA、CA724水平、陽性率均明顯高于對照組(P<0.05)，兩者聯合檢測的陽性率顯著高于單項檢測(P<0.05)，且兩者的表達水平隨胃癌TNM分期和疾病進展呈逐級升高趨勢。國外研究亦有類似報道[11-12]。本研究發現，胃癌患者血清CA724、CA19-9、CEA表達水平均顯著高于胃良性疾病患者和健康體檢者，與國內外研究結果相一致[9-12]。進一步的相關性分析發現，血清CA724、CA19-9、CEA水平與胃癌患者淋巴結轉移及TNM分期均具有顯著相關性，這一發現與王梅等[10]的研究結果相符。生存分析結果也進一步提示，高水平CA724、CA19-9、CEA與胃癌患者的不良預后有密切聯系。

除腫瘤標志物外，lncRNA PTENP1也被證實在胃癌患者體內異常表達，與胃癌的發病及轉移過程密切相關。Dong等[13]通過檢測110例胃癌患者血漿lncRNA PTENP1表達，發現與健康對照相比，胃癌患者血漿lncRNA PTENP1表達水平顯著降低。Guo等[14]通過基因重組方法構建lncRNA PTENP1的siRNA載體，并感染人SGC7901及MKN45胃癌細胞系，發現下調lncRNA PTENP1表達后可顯著降低胃癌細胞系中抑癌基因PTEN的表達，表明lncRNA PTENP1在抑制胃癌細胞的生物學過程中發揮了重要作用。Zhang等[15]的研究證實，lncRNA PTENP1可通過影響胃癌組織血管形成微環境，抑制腫瘤組織新生血管形成，從而抑制腫瘤的生長轉移；此外，該研究提示lncRNA PTENP1可通過“海綿作用”吸附并抑制miR-106b和miR-93發揮功能，從而抑制胃癌細胞的增殖與侵襲。同樣，本研究發現lncRNA PTENP1水平在Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者及發生淋巴結轉移患者中明顯降低，提示低水平的lncRNA PTENP1與胃癌的不良預后相關。

此外，本研究還探究了聯合檢測血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1水平對胃癌的診斷價值，發現聯合4項指標可將胃癌診斷的敏感度提高至96.1%，高于單獨檢測CA724(91.2%)、CA19-9(63.1%)和CEA(66.2%)。

綜上所述，聯合檢測血清CA724、CA19-9、CEA和lncRNA PTENP1水平對胃癌的診斷和預后具有一定價值，有望為胃癌的臨床診療路徑提供新的思路。