胃癌組織中神經纖連蛋白2過表達臨床意義的Meta分析

張玲玲 曹輝 許鐘 黃立敏 楊赟翰 白班俊△

(1.貴州大學醫學院貴州省人民醫院消化內科，貴陽 550002；2.貴州大學醫學院貴州省人民醫院腫瘤科，貴陽 550002)

胃癌在我國發病率占惡性腫瘤第二位，病死率占第三位[1]。侵襲轉移是導致惡性腫瘤包括胃癌患者死亡的主要原因，淋巴結轉移是胃癌最主要的轉移途徑之一。神經纖毛蛋白2(Neuropilin2，NRP2)為跨膜糖蛋白，在胚胎脈管發育中具有重要作用，尤其與淋巴管的發生密切相關[2]，可能與腫瘤的淋巴結轉移相關[3-4]。作為血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)受體的NRP2，可能通過調控腫瘤淋巴管的生成和淋巴結的轉移，從而促進癌細胞的遷移和侵襲[4]。研究[5]表明，NRP2在VEGF-C的刺激下可促進胃腺癌的淋巴浸潤。與癌旁組織相比，NRP2的mRNA和蛋白水平在胃癌組織中均可有異常表達。為了進一步明確NRP2蛋白表達與胃癌臨床病理特征之間的關系，我們采用循證醫學方法進行分析，從而為NRP2蛋白在胃癌組織中表達的意義提供結論。

1 資料與方法

1.1文獻入選標準 納入標準(1)研究對象：為臨床胃癌病例，納入人群無年齡、性別、種族和國籍的限制；(2)診斷依據：經臨床、病理學及影像學等診斷胃癌，有明確的病理學診斷；(3)檢測方法：采用免疫組織化學方法檢測胃癌組織中NRP2蛋白的表達情況；(4)數據報告：文獻中報道了NRP2蛋白在不同臨床病理因素中表達情況的研究數據。排除標準(1)文獻中無可用于分析計算的數據；(2)綜述、meta分析、個案、會議摘要、基礎動物研究等。此外，對重復發表或者雷同的研究，選擇近期或樣本量大、數據報告更完整的文獻。

1.2文獻檢索策略 分別檢索CNKI、萬方、重慶維普等中文文獻數據庫和科學引文數據庫(Web of Science)、PubMed 等英文文獻數據庫。其中，中文檢索式在CNKI中使用：(神經纖毛蛋白 or 神經菌毛素 or 神經菌毛蛋白 or Neuropilin or NRP) and(胃癌 or 胃腺癌 or 胃腫瘤)，在萬方和維普數據庫中使用以上關鍵詞，根據數據庫檢索界面風格調整；英文檢索式：(gastric OR stomach)and(cancer or carcinoma or neoplasm or tumor)and(Neuropilin*or NRP*)，在PubMed中限定 human。檢索時間均截止到2019年2月。

1.3質量評價和數據提取 由兩名評價者分別提取數據，采用非隨機對照研究Newcastle-Ottawa Scale，NOS)量表[6]進行方法學質量評價，評價因素包括：選擇、可比性、暴露。具體包括：(1)病例確定是否充分；(2)病例的代表性；(3)對照的選擇；(4)對照的確定；(5)可比性A；(6)可比性B；(7)暴露因素的確定；(8)病例和對照的暴露是否采用了相同的確定方法；(9)無應答率。核對時若有不同意見經討論仍不能解決時請第三位研究人員共同評價。NOS量表總分9分，≥6分為高質量文獻。提取數據內容包括研究的一般信息、NRP2蛋白表達與臨床病理因素的相關數據。

1.4統計學方法 應用統計學軟件Stata進行meta分析相關的統計學分析及繪圖。NRP2蛋白表達與胃癌臨床病理特征之間關系的評估使用比值比(OR)及95%可信區間(95%CI)作為系統評價的指標。主要統計學分析步驟包括：(1)異質性檢驗采用Q檢驗[7]和I2檢驗[8]。(2)合并效應量如果異質性檢驗結果提示各項研究間無異質性時，采用固定效應模型計算，若組間存在異質性則用隨機效應模型合并。(3)繪制森林圖。(4)評估發表性偏倚用Begg’s漏斗圖[9]和 Egger’s 回歸方法[10]檢驗文獻是否存在發表偏倚(P<0.05時判斷為存在發表偏倚)。

2 結 果

2.1納入文獻及質量評價 應用在線文獻數據庫共檢索到550篇相關文獻，去重后為463篇。經篩查共8篇文獻納入本研究[5，11-17]，共包括702例患者，研究對象均為中國胃癌患者。納入研究的基本信息及質量評分見表1。納入8項研究質量評分均在6分以上，為高質量文獻。

表1 納入研究的基本特征及質量評價

2.2meta分析結果

2.2.1性別 納入8項研究均對NRP2蛋白在不同性別中的表達情況進行了比較，異質性檢驗示P=0.334、I2=12.4%，采用固定效應模型合并數據，結果顯示，胃癌組織中男性患者與女性患者之間NRP2蛋白表達無統計學差異[OR=0.997，95%CI(0.718，1.384)，P=0.986]。

2.2.2年齡 納入文獻中，共有5項研究[5，11-12，14，16]以60歲(<60 VS ≥60)為標準將胃癌分為兩組進行比較，組間無異質性(P=0.408、I2=0.0%)，采用固定效應模型合并數據，結果顯示，不同年齡段之間NRP2蛋白表達無統計學差異[OR=0.802，95%CI(0.531，1.212)，P=0.295]。

2.2.3分期 納入文獻中共有3項研究[11-12，15]比較了早期和進展期胃癌，組間存在異質性(P=0.039、I2=69.2%)，采用隨機效應模型合并數據，結果顯示NRP2蛋白在兩組間無統計學差異[OR=0.625，95%CI(0.141，2.764)，P=0.536]。

2.2.4腫瘤大小 納入文獻中共有7項研究[5，11-16]以腫瘤大小5cm為界比較了不同大小胃癌中的差別，組間存在異質性(P=0.000、I2=81.0%)，采用隨機效應模型合并數據，結果顯示NRP2蛋白在兩組間無統計學差異[OR=0.750，95%CI(0.267，2.103)，P= 0.584]。

2.2.5TNM分期 納入文獻中，共有6項[5，11-13，15-16]涉及TNM分期的比較，異質性檢驗示P=0.001、I2=75.1%，采用隨機效應模型合并數據，見圖1，結果顯示，胃癌組織中NRP2蛋白表達在Ⅰ～Ⅱ組患者中低于Ⅲ～Ⅳ組患者[OR=0.250，95%CI(0.095，0.655)，P=0.005]。

圖1 胃癌組織中NRP2蛋白在不同TNM分期中表達的meta分析(Ⅰ～Ⅱ組 VS Ⅲ～Ⅳ組)

2.2.6組織學分型 納入文獻中，共有5項研究[5，11-12，15，17]有關于分化與未分化胃癌的比較，異質性檢驗示P=0.000、I2=87.9%，采用隨機效應模型合并數據，結果顯示，胃癌組織中NRP2蛋白表達情況與分化程度無關[OR=0.898，95%CI(0.284，2.841)，P=0.855]。

2.2.7淋巴結轉移 納入8項研究均對是否存在淋巴結轉移進行了比較，異質性檢驗示P= 0.051、I2=50.1%，采用隨機效應模型合并數據，結果(圖2)顯示，胃癌組織中NRP2蛋白表達在無淋巴結轉移組患者中低于有淋巴結轉移組患者[OR=0.278，95%CI(0.152，0.509)，P=0.000]。

圖2 胃癌組織中NRP2蛋白在有無淋巴結轉移組表達的meta分析

2.2.8遠處轉移 納入文獻中共2項研究[5，13]對是否存在遠處轉移進行了比較，組間無異質性(P=0.188、I2=42.3%)采用固定效應模型分析，結果顯示，有轉移組和無轉移組兩組間無統計學差異[OR=0.575，95%CI(0.200，1.650)，P=0.304]。

2.3發表偏倚 結果顯示，Begg秩相關檢驗P=0.174，Egger線性回歸P=0.127，統計學上未發現發表偏倚(圖3～圖4)。

圖3Begg′s發表偏倚圖圖4Egger′s發表偏倚圖

3 討 論

NRP2作為VEGF受體家族成員之一，表達于靜脈和淋巴管內皮細胞，在生長發育中參與淋巴管新生的調節。研究發現，NRP2在多種腫瘤組織中異常表達，參與腫瘤淋巴管生成，與腫瘤淋巴轉移密切相關，并可通過自噬等機制參與腫瘤的化療抵抗[4，18]。基于以上因素，在NRP2與胃癌相關的研究上，相關報道不僅在探索NRP2參與胃癌發生發展的可能分子機制，也嘗試將其作為診斷分子及治療靶點的可能[19]。

為了更全面認識NRP2在胃癌組織中的表達情況及意義，本研究檢索了胃癌中NRP2相關的研究報道，篩查出應用免疫組織化學方法檢測胃癌中NRP2表達的公開發表文獻。通過meta分析，進行數據處理，共有8項研究包括702例胃癌患者納入分析。結果顯示胃癌組織中NRP2蛋白過表達，在TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的患者中顯著高于Ⅰ～Ⅱ的患者，在有淋巴結轉移的患者中顯著高于無淋巴結轉移者。從現有的報道綜合分析來看，胃癌中NRP2蛋白過表達與性別、年齡、臨床分期、腫瘤大小、分化程度以及有無遠處轉移等無關。

需要注意的是，在臨床分期、TNM分期、腫瘤大小、分化程度以及有無淋巴結轉移等相關特征的比較中，組間存在異質性。這可能與納入文獻等不足有關，包括：(1)所有納入研究的對象均為中國患者；(2)目前相關研究較少，納入文獻數量有限，樣本量也有限，研究報道的數據側重點也不盡一致，如8項研究中，6項提供了可用于分析的TNM分期相關數據，5項提供了組織學分型相關的數據，僅3項有早期和進展期胃癌臨床分期相關的數據；(3)在檢測方法上，雖然均采用免疫組織化學，但不同的研究組、不同的操作者，在抗體來源、具體實驗步驟如稀釋濃度、結果判斷標準等因素上，不可避免的存在差異。

綜上所述，胃癌中NRP2蛋白過表達與TNM分期和有無淋巴結轉移等有關，在TNM分期Ⅲ～Ⅳ期和有淋巴結轉移的患者中具有更高的陽性率，檢測胃癌組織中NRP2蛋白的表達情況有助于判斷胃癌患者有無淋巴結轉移。