蒼術(shù)-玄參有效部位配伍對糖尿病模型小鼠的治療作用研究

楊 惠，劉穎新，孔興欣，陳 容，蔣梅香，劉利利

(湖南中醫(yī)藥高等專科學校，湖南 株洲 412012)

蒼術(shù)-玄參藥對記載于《施今墨對藥》[1]，大量臨床實踐證明，二者配伍使用，對糖尿病有較好的治療效果[2]。在前期研究中已經(jīng)從藥理和成分分析上證實了蒼術(shù)-玄參藥對的降糖作用，且主要降糖有效部位為多糖和正丁醇部位[3]。因此，本研究在前期基礎(chǔ)上，進一步篩選出該藥對降糖有效部位的最優(yōu)配伍比例，并對降糖機制進行了探討，為蒼術(shù)-玄參藥對更好地服務臨床提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器與試劑

鹽酸二甲雙胍片(中美上海施貴寶制藥有限公司，批號：ABB9058，規(guī)格：0.5 g/片)；鏈脲佐菌素(STZ，美國Sigma公司)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。三諾安準血糖儀 (長沙三諾生物傳感技術(shù)有限公司)；7100型全自動生化分析儀 (日本日立公司)；KS-600EI超聲波清洗機(鄭州萬博儀器設備有限公司)。

1.2 藥材

蒼術(shù)、玄參藥材均購自長沙佰佳藥材公司，經(jīng)湖南中醫(yī)藥高等專科學校馮傳平教授鑒定，分別是菊科植物茅蒼術(shù)(Atractylodeslancea(Thunb.)DC.)的干燥根莖、玄參科植物玄參(ScrophularianingpoensisHemsl.)的干燥根。蒼術(shù)-玄參藥對多糖部位、正丁醇部位由本實驗室自制。

1.3 動物

SPF級ICR雄性小鼠，體重 20～22 g，由長沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，合格證號：SCXK(湘)2014-0011。

2 方法

2.1 動物模型的制備

小鼠適應性喂養(yǎng)1 w后，再連續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料4 w，禁食不禁水12 h后，按照120 mg/kg劑量腹腔注射STZ溶液(pH4.4的檸檬酸鈉緩沖液配置)[4-5]，小鼠尾靜脈取血測定空腹血糖值 (FBG)，空腹血糖≥11.1 mmol/L判定為造模成功。

2.2 分組與給藥

將造模成功的小鼠隨機分為6組，每組10只，分別為模型組、二甲雙胍組、多糖-正丁醇部位1∶1配伍組(糖醇1∶1組)、多糖-正丁醇部位1∶2配伍組(糖醇1∶2組)、多糖-正丁醇部位2∶1配伍組(糖醇2∶1組)。根據(jù)前期課題組對蒼術(shù)-玄參藥對有效部位的研究，確定正丁醇和多糖部位每日給藥量分別為0.29 g/kg、1.93 g/kg，二甲雙胍組0.25 g/kg。空白組和模型組每天1 g給予0.5%CMC-Na，每日1次，連續(xù)4周。

2.3 指標測定

2.3.1 空腹血糖的測定實驗 給藥4周后，小鼠尾靜脈取血，采用血糖儀和試紙測定其空腹血糖(FBG)

2.3.2 按照試劑盒要求對小鼠肝臟中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性進行測定。

2.4 統(tǒng)計分析

3 結(jié)果

3.1 對糖尿病小鼠空腹血糖(FBG)的影響

與空白組比較，模型組小鼠的空腹血糖(FBG)水平顯著升高(P<0.01) ;與模型組比較，陽性藥物組、多糖-正丁醇各配伍組小鼠空腹血糖(FBG)水平顯著下降(P<0.01，P<0.05)，其中，糖醇2∶1組對小鼠空腹血糖(FBG)降低更為明顯(P<0.01)。結(jié)果見表1。

組別劑量(g·kg-1)空腹血糖(mmol·L-1)給藥前給藥4周后空白組—7.25±1.347.53±1.22模型組—19.85±4.08##22.76±4.17##陽性藥物組0.2519.47±3.82##14.95±3.15??糖醇1∶1組2.2219.63±4.53##17.86±3.97?糖醇1∶2組2.51 19.69±3.51##17.71±4.09?糖醇2∶1組4.15 19.37±4.32##15.60±3.61??

注：與空白組比較：#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較：*P<0.05，**P<0.01，下同。

3.2 對糖尿病小鼠肝臟抗氧化能力的影響

與空白組比較，模型組小鼠肝臟中SOD和GSH-Px的活性顯著降低，MDA水平顯著升高(P<0.01)。與模型組比較，多糖-正丁醇部位配伍組均能顯著升高小鼠肝臟中SOD和GSH-Px的活性，降低MDA含量(P<0.05，P<0.01)。其中，糖醇2∶1組對MDA水平的降低更為顯著(P<0.01)。結(jié)果見表2。

表2 蒼術(shù)-玄參有效部位配伍對糖尿病小鼠SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影響

4 討論

糖尿病是一種慢性代謝性疾病，以胰島素抵抗、慢性炎癥及胰島β細胞受損為主要特征。近年來，糖尿病發(fā)病率有逐年增加的趨勢，對人類健康產(chǎn)生了嚴重的危害[6]。鏈脲佐菌素(STZ)屬于廣譜抗生素，能特異性地損傷胰島β細胞而誘發(fā)糖尿病。同時，STZ對機體毒性較小，動物存活率高。因此，常用于糖尿病動物模型的制備[7]。

中藥藥對是方劑配伍的核心。目前，國內(nèi)對于中藥藥對的配伍研究主要集中在飲片-有效部位-有效成分配伍三個層次[8]，而有效部位和有效成分配伍則更容易闡明藥對的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機制[9]。因此，從經(jīng)典藥對的有效組分入手，并進行配伍優(yōu)化研究已成為闡釋藥對配伍機制科學內(nèi)涵的重要途徑[8]。蒼術(shù)-玄參藥對出自《施今墨對藥》，臨床上二者相須為用，對糖尿病有良好的治療效果[10]。在前期研究中發(fā)現(xiàn)，該藥對的多糖和正丁醇部位具有良好的降糖作用。因此，本研究從有效部位配伍入手，考察多糖和正丁醇降糖有效部位的最優(yōu)配比，并探討可能的降糖作用機制。從實驗結(jié)果可以看出，多糖-正丁醇部位各比例配伍均能降低糖尿病小鼠的空腹血糖。其中，糖醇2∶1配伍組降糖作用最為顯著，糖醇1∶1和1∶2配伍組在降糖作用和對糖尿病小鼠肝臟抗氧化能力的影響上程度相當，這在一定程度上可以反映出正丁醇比例的變化對糖尿病小鼠治療作用的影響關(guān)系不大。

現(xiàn)代研究證明，機體處于高糖狀態(tài)時所產(chǎn)生的氧化應激反應可以使機體自身的抗氧化體系失衡[11]，體內(nèi)的自由基會造成生物膜的脂質(zhì)過氧化損傷，形成脂質(zhì)過氧化物[12]，脂質(zhì)過氧化的主要中間產(chǎn)物MDA的水平可以反映出機體脂質(zhì)過氧化的程度，間接的反映出細胞受損程度[13]。GSH-Px可還原MDA，使體內(nèi)MDA 的含量降低從而起到抵御氧化損傷的作用。SOD作為體內(nèi)具有清除自由基功能的酶，可以降低自由基對機體的氧化脅迫，其活性能夠反映出機體的抗氧化能力[14]。因此，可以通過對體內(nèi)SOD，GSH-Px活性和MDA水平的測定來考察機體的抗氧化能力。實驗結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組小鼠肝臟組織MDA水平顯著升高，SOD和GSH-Px的活性顯著降低，表明糖尿病小鼠的抗氧化能力下降。與模型組比較，蒼術(shù)-玄參藥對的多糖和正丁醇部位配伍各比例均能顯著增強GSH-Px和SOD活性，而對MDA水平降低顯著。這提示多糖-正丁醇部位配伍在一定程度上能夠提高鏈脲佐菌素(STZ)所致糖尿病小鼠的抗氧能力。這可能是蒼術(shù)-玄參藥對多糖和正丁醇提取部位配伍降糖作用的機制之一。