GC-MS分析來(lái)自不同藥性寄主的桑寄生揮發(fā)性成分

黃蜚穎，劉人源，柴子舒，蘇本偉，朱開昕，陸海琳*，李永華

(1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530200；2.欽州市中醫(yī)藥研究所，廣西 欽州 535000)

桑寄生為桑寄生科鈍果寄生屬植物廣寄生Taxilluschinensis(DC.)Danser的干燥帶葉莖枝，為2015版《中國(guó)藥典》收錄的常用藥材，具有祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎元等功效[1]，主要分布于海南、福建、廣東、廣西[2]等地，古文獻(xiàn)記載的“桑寄生”寄主應(yīng)為桑[3-4]，藥性“平”，指的應(yīng)是寄主為桑的桑寄生的藥性；《本草經(jīng)集注》[3]提到桑寄生“根津所因處為異”，《本草綱目》[5]載“世俗多以雜樹上者充之，氣性不同”，指出，非桑樹寄主的桑寄生藥性(藥效)不同；現(xiàn)代研究表明來(lái)自不同寄主的桑寄生其揮發(fā)油成分存在一定差異[6-7]。在民間，人們用來(lái)自不同寄主的寄生治療不同疾病[8]。龔祝南等[9]在對(duì)桑寄生進(jìn)行本草考證時(shí)提出寄主會(huì)影響寄生的藥性，不同寄主的桑寄生可治療不同的疾病，可見，古代本草對(duì)不同寄主來(lái)源的桑寄生存在藥性差異是持認(rèn)可態(tài)度的，但受研究條件的限制，古人雖然意識(shí)到了寄主會(huì)影響桑寄生的性味、療效，但未能從物質(zhì)基礎(chǔ)層面探討寄主對(duì)寄生產(chǎn)生影響的原因。辛寧等[10]對(duì)藥性不同的藥材的8大類化學(xué)成分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)溫性藥比寒性藥含揮發(fā)油類成分的比例相對(duì)較高。本課題組采集寄生于柳樹和肉桂的桑寄生及其寄主藥材柳枝、桂枝，擬對(duì)來(lái)自出產(chǎn)寒、熱不同藥性藥材寄主的桑寄生的揮發(fā)油進(jìn)行定性研究，尋找寄主與桑寄生的關(guān)系，以期為桑寄生的藥性研究奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 藥品與試劑

柳樹桑寄生及柳枝采于廣西南寧，肉桂桑寄生及桂枝采于廣西梧州，所有藥材皆于12月份采集。經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室李永華研究員鑒定，桑寄生基原植物為桑寄生科鈍果寄生屬?gòu)V寄生Taxilluschinensis(DC.)Danser，桂枝基原植物為樟科樟屬肉桂CinnamomumcassiaPresl，柳枝基原植物為楊柳科柳屬柳樹SalixbabylonicaL。乙酸乙酯(太倉(cāng)滬試試劑有限公司，批號(hào)：20160513)，無(wú)水硫酸鈉(天津博迪化工股份有限公司，批號(hào)：20160126)。

1.2 儀器設(shè)備

美國(guó)Agilent 7890B-5977A氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。98-1-B型電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司)，XMTD-8222電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，16 K臺(tái)式離心機(jī)(珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司)。

2 方法

2.1 樣品制備

將采集到的桑寄生及寄主藥材鮮品枝、葉分開，枝剪成約2 cm的小段，陰干，然后45 ℃烘3 h。稱取一定量的藥材(桑寄生按1∶2的枝葉比稱取)，以1∶10的料液比，用水蒸氣蒸餾法提取8 h，靜置冷卻后加入乙酸乙酯溶解、稀釋，從提取器下端收集乙酸乙酯層，加適量無(wú)水硫酸鈉除水，離心后取上清液用于進(jìn)樣分析。

2.2 氣相色譜條件

氣相色譜條件：HP-5 MS彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30 m×250 μm×0.25 μm)，載氣He(≥99.999%)，流量(1.0 mL·min-1)，進(jìn)樣口溫度270 ℃，桂枝的分流比為80∶1，其他樣品為20∶1，進(jìn)樣量10 μL，溶劑延遲5.0 min，程序升溫，起始溫度為60 ℃，保持8 min，然后以3 ℃/min升至170 ℃，再以2 ℃/min升至270 ℃，保持10 min。

2.3 質(zhì)譜條件

電離方式EI，電子能量70 eV，離子源溫度230 ℃，傳輸線溫度 280 ℃，質(zhì)量范圍M/Z 50～550。

2.4 質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)

NIST11.L、Flavor2.L質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)。

2.5 揮發(fā)性成分定性和定量分析

按上述實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣分析，通過 MSD ChemStation化學(xué)工作站檢索NIST11.L標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)和 Flavor2.L質(zhì)譜圖庫(kù)，確定桑寄生及其寄主藥材揮發(fā)性成分的化學(xué)組成；通過化學(xué)工作站RTE積分器進(jìn)行積分(最大峰數(shù)為100)，采用峰面積歸一化法計(jì)算出各成分在揮發(fā)性成分中的相對(duì)含量。

3 結(jié)果

寒、熱不同寄主桑寄生與寄主藥材揮發(fā)油的總離子流圖譜見圖1，不同寄主桑寄生及寄主藥材總離子流比較見圖2。桑寄生及其寄主藥材揮發(fā)性成分分析結(jié)果見表1、表2、表3。柳樹桑寄生識(shí)別鑒定揮發(fā)性成分68個(gè)，相對(duì)含量最高的兩個(gè)揮發(fā)性成分分別為反式-橙花叔醇和芳樟醇，柳樹桑寄生與其寄主柳枝共有的特征性成分為15個(gè)，這15個(gè)揮發(fā)性成分相對(duì)總含量為7.520%；肉桂桑寄生識(shí)別鑒定揮發(fā)性成分52個(gè)，相對(duì)含量最高的兩個(gè)揮發(fā)性成分分別為6，10，14-三甲基-十五烷-2-酮和8-庚癸烯，肉桂桑寄生與其寄主桂枝共有的特征性成分為9個(gè)，這9個(gè)特征性成分相對(duì)總含量為4.878%。

圖1 桑寄生及其寄主揮發(fā)油GC-MS總離子流

A1.柳樹桑寄生；A2.柳枝；B1.肉桂桑寄生；B2.桂枝

A1.柳樹桑寄生；A2.柳枝；B1.肉桂桑寄生；B2.桂枝

序號(hào)tR(min)化合物分子式柳樹桑寄生揮發(fā)性成分及相對(duì)含量柳枝揮發(fā)性成分及相對(duì)含量肉桂桑寄生揮發(fā)性成分及相對(duì)含量桂枝揮發(fā)性成分及相對(duì)含量16.199正己醛 C6H12O0.8860.8580.1010.01828.180反式-2-己烯醛 C6H10O0.070---38.848正己醇 C6H14O0.2391.298--410.008苯乙烯 C8H8---0.018512.227(1R)-(+)-α蒎烯C10H16---0.190613.041莰烯 C10H16---0.207713.764苯甲醛C7H6O---1.929814.271庚醇 C7H16O0.1840.184--914.608β-蒎烯 C10H16---0.0911014.7891-辛烯-3-醇 C8H16O0.9490.949--1115.4362-正戊基呋喃 C9H14O0.7310.731--1216.064辛醛 C8H16O0.0910.186--1317.3191-異丙基-2-甲基苯 C10H140.036--0.0161417.540右旋萜二烯 C10H160.067--0.1581517.661桉樹腦 C10H18O-0.475-0.0511617.8623-乙基-2-甲基-1,3-己二烯 C9H160.042---1718.1133-辛烯-2-酮 C8H14O-0.308--1818.374間羥基苯甲醛 C7H6O2---0.5171918.379水楊醛 C7H6O2-0.287--

續(xù)表1 不同寄主桑寄生與寄主藥材的揮發(fā)性化學(xué)成分 (%)

續(xù)表1 不同寄主桑寄生與寄主藥材的揮發(fā)性化學(xué)成分 (%)

表2 柳樹桑寄生與柳枝共有的特征性化學(xué)成分 (%)

表3 肉桂桑寄生與桂枝共有的特征性化學(xué)成分 (%)

4 討論

柳樹寄主藥用部位為柳枝，《中藥大辭典》[11]記載柳枝“性寒”，因此將柳樹寄主的藥性定義為寒性寄主；肉桂寄主藥用部位有桂枝和肉桂皮，2015版《中國(guó)藥典》[1]記載桂枝“性溫”，肉桂皮性“大熱”，因此將肉桂寄主的藥性定義為溫?zé)峒闹鳌?/p>

本研究發(fā)現(xiàn)，不同寒、熱藥性寄主柳樹和肉桂桑寄生的揮發(fā)性成分組成及含量不同，寄主會(huì)通過它們之間特殊的寄生關(guān)系將寄主的特征性揮發(fā)性成分轉(zhuǎn)運(yùn)到桑寄生中去，其中柳樹寄主轉(zhuǎn)運(yùn)過去的特征性揮發(fā)性成分有15個(gè)，這些成分的相對(duì)總含量為7.520%；肉桂寄主轉(zhuǎn)運(yùn)過去的特征性揮發(fā)性成分有9個(gè)，這些成分的相對(duì)總含量為4.878%。

本草古籍[3-5]中關(guān)于寄主對(duì)桑寄生藥材藥性的影響記載頗多，上述揮發(fā)性成分由寄主向寄生其上的桑寄生轉(zhuǎn)運(yùn)，是否對(duì)桑寄生的藥性構(gòu)成影響，有待進(jìn)一步研究。